ОФС.1.8.2.0010.18. Общая фармакопейная статья. Количественное определение белка колориметрическим методом с биуретовым реактивом в препаратах крови человека и животных

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том II»)

Количественное определение белка колориметрическим методом с биуретовым реактивом в препаратах крови человека и животных	ОФС.1.8.2.0010.18 Вводится впервые

Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на метод количественного определения белка колориметрическим методом с биуретовым реактивом в препаратах крови человека (иммуноглобулинах, альбумине) и животных (антитоксических сыворотках) (Метод А) и на методику количественного определения белка колориметрическим методом с биуретовым реактивом в препаратах крови животных (гетерологичные иммуноглобулины и антитоксические сыворотки), разведенных в 100 раз (Метод Б).

Колориметрический метод с биуретовым реактивом обладает низкой чувствительностью к посторонним веществам, которые могут присутствовать в качестве примеси в препарате.

Метод А (содержание белка от 5 до 20%)

К 5 мл испытуемого раствора, приготовленного из испытуемого образца с содержанием белка от 2 до 4 мг/мл, прибавляют 5 мл биуретового реактива для препаратов крови человека и животных, перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 30 мин. При тех же условиях аналогичным образом готовят стандартный раствор (СО). Испытуемые и стандартные растворы готовят в двух повторностях. Одновременно готовят контрольный раствор, используемый в качестве раствора сравнения, содержащий 5 мл 0,9% раствора натрия хлорида и 5 мл биуретового реактива. Измеряют оптическую плотность окрашенных растворов при длине волны 540 нм (если нет других указаний в нормативной документации) в кюветах с толщиной слоя 10 мм.

Содержание белка (X) в препарате в процентах вычисляют по формуле:

X = \frac{A \cdot Co}{Ao} ,

где:

А — значение оптической плотности раствора испытуемого образца;

Ао — значение оптической плотности СО;

Со — содержание белка в СО, в процентах.

1. Испытуемый раствор (А). 1 или 2 мл испытуемого образца (в зависимости от исходного содержания белка) помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят объем раствора 0,9% раствором натрия хлорида до метки и перемешивают. Содержание белка в испытуемом растворе от 2 до 4 мг/мл.

2. Стандартный раствор (СО). Для препаратов иммуноглобулинов, альбумина и антитоксических сывороток используют соответствующие стандартные образцы, разрешенные к применению уполномоченными органами в соответствии с инструкциями по применению. Допускается использование стандартных образцов предприятия, аттестованных с использованием вышеуказанных стандартных образцов.

Метод Б (содержание белка от 0,08 до 0,13%)

К 5 мл раствора испытуемого образца с содержанием белка в препарате от 0,8 до 1,3 мг/мл прибавляют 5 мл биуретового реактива для препаратов крови человека и животных, перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 30 мин. Аналогичным образом готовят разведенный 1:100 стандартный образец (СО). Одновременно готовят контрольный раствор (см. приготовление по методу А). Испытуемые и стандартные образцы готовят в двух повторностях. Далее анализ проводят по методу А.

Содержание белка (X) в разведенном препарате 1:100 в процентах рассчитывают по формуле:

X = \frac{D\text{исп}. \cdot Cco}{Dco} ,

где:

Dисп. — значение оптической плотности испытуемого образца, разведенного 1:100;

---