ОФС.1.7.2.0024.18. Общая фармакопейная статья. Количественное определение формальдегида в биологических лекарственных препаратах

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том II»)

ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ

flowchart LR
  n0["ОФС.1.7.2.0024.15"]:::rst
  click n0 "https://bukva.ai/docs/gf-xiii-minzdrav-rossii-ministerstvo-273" "ОФС.1.7.2.0024.15. Общая фармакопейная статья'Количественное определение формальдегида в иммунобиологических лекарственных препаратах. ОФС.1.7.2.0024.15'"
  n1["ОФС.1.7.2.0024.18"]:::doc
  click n1 "https://bukva.ai/docs/ofs-1-7-2-0024-18" "ОФС.1.7.2.0024.18. Общая фармакопейная статья. Количественное определение формальдегида в биологических лекарственных препаратах"
  n0 --> n1
classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000;
classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000;
classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Настоящая общая фармакопейная статья предназначена для количественного определения формальдегида в биологических лекарственных препаратах (БЛП) в реакциях взаимодействия формальдегида с фуксинсернистым реактивом или с ацетилацетоном колориметрическим методом.

Метод с фуксинсернистым реагентом основан на образовании хиноидного красителя малинового окрашивания при его взаимодействии с водорастворимыми альдегидами позволяет определять содержание формальдегида в БЛП в диапазоне от 20 до 80 мкг/мл в пробе. Метод А.

Метод с ацетилацетоновым реагентом основан на образовании соединения желтого окрашивания при его взаимодействии с формальдегидом в присутствии ионов аммония, позволяет определять содержание формальдегида в БЛП в диапазоне от 2 до 20 мкг/мл в пробе. Метод В.

Интенсивность окраски образующихся соединений пропорциональна содержанию формальдегида в испытуемом образце.

Определение формальдегида с фуксинсернистым реактивом (Метод А)

Для анализа готовят две параллельные пробы испытуемого образца.

В химические пробирки отбирают 0,5 — 2,0 мл (в зависимости от содержания формальдегида) надосадочной жидкости сорбированного образца (испытуемый образец сорбированного лекарственного препарата предварительно центрифугируют при 2000 об/мин в течение 20 мин) или такое же количество несорбированного образца, доводят объем раствора водой очищенной до 5 мл и перемешивают, затем прибавляют 1 мл раствора фуксинсернистой кислоты и вновь перемешивают. Пробирки закрывают пробками и оставляют на 1 ч. Измеряют оптическую плотность при 590 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм по сравнению с контрольным раствором, содержащим 5 мл воды очищенной и 1 мл раствора фуксинсернистой кислоты.

Содержание формальдегида (X1) в мкг/мл вычисляют по формуле:

X_{1} = \frac{a}{A} ,

где:

а — содержание формальдегида, найденное по калибровочному графику, мкг;

А — объем испытуемого образца, мл.

Содержание формальдегида в ИЛП не должно превышать 0,02% (200 мкг/мл).

Построение калибровочного графика. К 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 3,5; 4,0 мл стандартного раствора № 2 прибавляют воду очищенную до объема 5 мл, перемешивают (содержание формальдегида: 20; 30; 40; 50; 60; 70; 80 мкг), прибавляют 1 мл раствора фуксинсернистой кислоты и вновь перемешивают. Далее анализ проводят, как указано выше. Строят калибровочный график, откладывая по оси абсцисс количество формальдегида в мкг, а по оси ординат — среднее значение оптической плотности калибровочных растворов.

Примечания

Испытуемый раствор. На анализ отбирают 0,5, 1,0 или 2,0 мл испытуемого образца в зависимости от содержания формальдегида в лекарственном препарате (количество формальдегида в анализируемом образце должно быть в пределах 20 — 80 мкг).

Основной стандартный раствор формальдегида с содержанием формальдегида около 4 мг/мл (раствор № 1). В мерную колбу вместимостью 100 мл вносят 1 мл формалина технического, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают.

Определяют процентное содержание формальдегида в формалине техническом. В колбу с притертой пробкой переносят 5 мл раствора № 1, прибавляют 20 мл 0,05 М раствора йода и 10 мл 1 М раствора натрия гидроксида, перемешивают и оставляют в темном месте на 10 мин. Затем прибавляют 11 мл 0,5 М раствора серной кислоты. Выделившийся йод, образующий коричнево-красное окрашивание раствора, титруют 0,1 № раствором натрия тиосульфата до появления соломенно-желтого окрашивания, затем добавляют 0,5% раствор крахмала (индикатор) и продолжают титрование до обесцвечивания раствора. На титрование контрольного раствора отбирают 5 мл воды очищенной и прибавляют реактивы, указанные выше для раствора № 1.

Содержание формальдегида (X2) в процентах рассчитывают по формуле:

X_{2} = \frac{(\text{а} - \text{б}) \cdot \text{К } \cdot 0,001501 \cdot 100* \cdot 100}{5,0}

где:

а — объем 0,1 № раствора натрия тиосульфата, пошедшее на титрование контрольного раствора, мл;

б — объем 0,1 № раствора натрия тиосульфата, пошедшее на титрование раствора № 1, мл;

К — поправочный коэффициент к титру 0,1 № раствора натрия тиосульфата;

5,0 — объем раствора № 1, мл;

100* — разведение формалина технического, мл;

100 — коэффициент пересчета в проценты;

0,001501 — количество формальдегида, соответствующее 1 мл 0,05 М раствора йода, г.

Содержание формальдегида в формалине техническом должно быть не менее 36%.

Содержания формальдегида (X3) в стандартном растворе № 1 в мг/мл рассчитывают по формуле:

X_{3} = \frac{X_{2} \cdot 1000}{100 \cdot 100*} ,

где:

X2 — содержание формальдегида в формалине техническом, %;

100 — пересчет % в г;

100* — пересчет в 1 мл;

1000 — пересчет в мг.

Полученный раствор хранят при температуре от 2 до 8 °C не более 1 мес.

Стандартный раствор формальдегида 20 мкг/мл (раствор № 2). Необходимое количество раствора № 1 помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают (если установлено, что концентрация формальдегида в формалине техническом 37%, то для приготовления стандартного раствора формальдегида № 2 отбирают 0,54 мл основного стандартного раствора № 1). Стандартный раствор № 2 используют свежеприготовленным.

Приготовление раствора фуксинсернистой кислоты. На кипящей водяной бане растворяют 1 г фуксина основного или парафуксина (для фуксинсернистой кислоты) в 500 мл воды очищенной. Раствор охлаждают до температуры 18 — 20 °C, фильтруют в мерную колбу, вместимостью 1000 мл и прибавляют 30 мл 20% раствора калия метабисульфита или 25 мл 20% раствора натрия метабисульфита. Через 20 мин к смеси прибавляют 10 мл хлористоводородной кислоты концентрированной, доводят объем раствора водой до метки, перемешивают и выдерживают не менее сут.

Перед каждым использованием раствор фуксинсернистой кислоты титруют 0,05 М раствором йода (индикатор: 0,5% раствор крахмала). На титрование 3 мл фуксинсернистой кислоты должно расходоваться от 3 до 4 мл раствора йода. Если объем раствора йода, израсходованного на титрование, меньше 3 мл, то к 100 мл приготовленного реактива прибавляют калий (или натрий) метабисульфит из расчета 200 мг на каждый миллилитр разницы между 3 мл и израсходованным объемом раствора йода. Если объем раствора йода, израсходованный на титрование, больше 4 мл, то к 100 мл реактива прибавляют раствор фуксина основного или парафуксина (V1) в мл в количестве, рассчитанным по формуле:

V_{1} = \frac{V + 100}{27} ,

где:

V — объем 0,05 М раствора йода, пошедший на титрование 3 мл реактива, мл;

100 — объем фуксинсернистой кислоты, мл;

27 — коэффициент пересчета.

Реактив готов к применению через сутки после приготовления. Раствор должен быть бесцветным, допускается слегка желтоватая окраска. Для его осветления раствора возможно применение активированного угля.

Реактив хранят в склянке из темного стекла с притертой пробкой при комнатной температуре в течение 1 г.

Приготовление 0,1 № раствора натрия тиосульфата. Раствор натрия тиосульфата готовят из стандарт-титра (фиксанала) 0,1 М раствора натрия тиосульфата в мерной колбе вместимостью 1000 мл. Раствор хранят в склянке из темного стекла с притертой пробкой при комнатной температуре в течение 3 мес.

Приготовление 20% раствора натрия (калия) метабисульфита. В мерную колбу вместимостью 100 мл вносят 20 г натрия (калия) метабисульфита, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Реактив хранят в склянке из темного стекла с притертой пробкой при комнатной температуре в течение 6 мес.

Определение формальдегида с ацетилацетоном (Метод В)

Для анализа готовят две параллельные пробы испытуемого образца. 2 мл надосадочной жидкости сорбированного (испытуемый образец сорбированного лекарственного препарата предварительно центрифугируют при 2000 об/мин в течение 20 мин) или несорбированного испытуемого образца с содержанием формальдегида от 2 до 20 мкг/мл помещают в химическую пробирку, добавляют 2 мл ацетилацетонового реагента, закрывают пробкой, перемешивают и выдерживают на водяной бане при температуре 40 °C в течение 40 мин, затем охлаждают до комнатной температуры и измеряют оптическую плотность испытуемого образца при 400 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм по сравнению с контрольной пробой, содержащей 2 мл воды очищенной и 2 мл ацетилацетонового реагента. Испытуемый образец сорбированного лекарственного препарата предварительно центрифугируют при 4000 об/мин в течение 10 мин.

Концентрацию формальдегида в испытуемом образце вычисляют по формуле:

X = \frac{a \cdot n}{b} ,

где:

a — количество формальдегида в пробе, найденное по калибровочному графику, в мкг;

n — коэффициент разведения;

b — объем испытуемого образца, взятый на анализ, мл.

Построение калибровочного графика. Калибровочные растворы готовят, используя стандартный раствор формальдегида, с концентрацией 20 мкг/мл (раствор № 2), приготовленный из основного раствора формальдегида с учетом титра данного раствора (около 4 мг/мл, раствор № 1) (табл).

Таблица

СТАНДАРТНЫЕ РАСТВОРЫ С КОНЦЕНТРАЦИЕЙ ФОРМАЛЬДЕГИДА 1 — 20 МКГ/ПРОБА

В каждую пробирку с калибровочным раствором соответствующей концентрации прибавляют воду очищенную до объема 2 мл и перемешивают, добавляют 2 мл ацетилацетонового реагента и вновь перемешивают. Далее анализ проводят, как указано выше для испытуемого образца. Калибровочную кривую строят, откладывая по оси абсцисс значения концентраций, по оси ординат — значения оптической плотности калибровочных растворов. Коэффициент корреляции должен быть не менее 0,99.

Примечания

Испытуемый раствор. На анализ отбирают 2 мл испытуемого образца, если нет иных указаний в нормативной документации (количество формальдегида в анализируемом образце должно быть в пределах 2 — 20 мкг).

Основной стандартный раствор формальдегида с содержанием около 4 мг/мл (раствор № 1). Методика приготовления указана в методе А.

Стандартный раствор формальдегида 20 мкг/мл (раствор № 2). Методика приготовления указана в методе А.

Ацетилацетоновый реагент. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 150 г аммония ацетата, добавляют 3 мл уксусной кислоты ледяной, 700 мл воды, перемешивают и измеряют pH (5,5 — 6,5), затем прибавляют 2 мл ацетилацетона, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Реагент хранят в течение 1 г при температуре 2 — 8 °C.