ФС.2.1.0691. Фармакопейная статья. Окситоцин

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 13.03.2024 № 120)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Окситоцин	ФС.2.1.0691
Окситоцин
Oxytocinum	Взамен ВФС 42-2059-96

C43H66N12O12S2 [50-56-6]	М.м. 1007,2

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

S3.1,S3.6-Цикло(L-цистеинил-L-тирозил-L-изолейцил-L-глутаминил-L-аспарагинил-L-цистеинил-L-пролил-L-лейцилглицинамид).

Содержит не менее 93,0% и не более 102,0% окситоцина C43H66N12O12S2 в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей и уксусной кислоты вещество.

<*> Существует в форме окситоцина ацетата.

Биологическая активность окситоцина соответствует 600 МЕ на 1 мг окситоцина C43H66N12O12S2.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или почти белый порошок.

<*> Гигроскопичен.

Растворимость. Очень легко растворим в воде, легко растворим в хлористоводородной кислоты растворе 0,01 М.

<*> Растворяется в разбавленном растворе уксусной кислоты.

---

<*> Приводится для информации.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

Проводят определения 1 и 2 или 1 и 3.

1. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика окситоцина на хроматограмме раствора стандартного образца окситоцина (раздел «Количественное определение»).

2. Аминокислотный состав. Определение проводят в соответствии с ОФС «Аминокислотный анализ», гидролиз по методу 1, анализ по методу 1. Относительное содержание каждой аминокислоты рассчитывают в мольных долях, принимая за единицу одну шестую суммарного мольного содержания аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты, пролина, глицина, изолейцина и лейцина по формуле:

X = \frac{n_{i} \cdot 6}{\sum n(Asp,Glu,Pro,Gly,Ile,Leu)} ,

где ni — количество молей соответствующей аминокислоты, мкмоль;

\sum n(Asp,Glu,Pro,Gly,Ile,Leu) — сумма мольного содержания аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты, пролина, глицина, изолейцина и лейцина, мкмоль.

Относительное содержание аминокислот должно быть в следующих пределах: аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота, пролин, глицин, лейцин и изолейцин — от 0,90 до 1,10; тирозин — от 0,7 до 1,05; полуцистин — от 1,4 до 2,1. Остальные аминокислоты могут присутствовать не более чем в следовых количествах.

3. 1Н-ЯМР-спектроскопия (ОФС «Спектроскопия ядерного магнитного резонанса»).

Растворитель. Дейтерия оксид, содержащий 0,02 мг/мл дейтерированного триметилсилилпропионата натрия (ТСП), доводят pH дейтерированной уксусной кислотой до значений 5 — 6. Хранят в контейнере из полиэтилена высокой плотности.

Испытуемый раствор. Готовят раствор субстанции в растворителе с концентрацией окситоцина около 10 мг/мл.

Раствор стандартного образца окситоцина. Готовят раствор фармакопейного стандартного образца окситоцина для ЯМР идентификации в растворителе с концентрацией окситоцина около 10 мг/мл.

Оборудование. Импульсный ЯМР-спектрометр с рабочей частотой на протонах не менее 300 МГц.

Параметры регистрации 1Н-ЯМР спектров

Ширина спектра	от 0 до 9 м.д.
Температура образца	22 — 27 °C;
Число сканирований	не менее 32.

Примечание - Спектры испытуемого раствора и раствора сравнения должны записываться без вращения образца и при одинаковой температуре.

Анализ 1Н-ЯМР спектров. Спектр испытуемого раствора должен соответствовать спектру раствора стандартного образца окситоцина после нормализации обоих спектров с целью уравнивания их по интенсивности. Допускается наличие сигналов протонов уксусной кислоты при 1,9 м.д., воды при 4,9 м.д. и сигналов остаточных растворителей. Допускается различная интенсивность сигналов уксусной кислоты.

ИСПЫТАНИЯ

Прозрачность раствора. Раствор 10 мг субстанции в 10 мл хлористоводородной кислоты раствора 0,01 М должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей»).

Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании «Прозрачность раствора», должен быть бесцветным (ОФС «Степень окраски жидкостей», метод 2).

pH раствора. От 3,0 до 6,0 (2,0% раствор, ОФС «Ионометрия», метод 3).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Подвижная фаза (ПФА). Растворяют 15,6 г натрия дигидрофосфата дигидрата в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до 1000 мл.

Подвижная фаза (ПФБ). Ацетонитрил — вода 500:500.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 25 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в ПФА и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца примеси F. Содержимое флакона фармакопейного стандартного образца примеси F окситоцина растворяют в 1,0 мл ПФА.

Раствор для идентификации. Содержимое флакона фармакопейного стандартного образца окситоцина для идентификации, содержащий примеси B, D, E и I, растворяют в 1,0 мл ПФА.

Примечание

Примесь B: S3.1,S3.6':S3.6,S3.1'-цикло[бис(L-цистеинил-L-тирозил-L-изолейцил-L-глутаминил-L-аспарагинил-L-цистеинил-L-пролил-L-лейцилглицинамид)] [20054-93-7].

Примесь D: [3-лейцин]окситоцин [4294-11-5].

Примесь E: N2.1-ацетилокситоцин [10551-48-1].

Примесь F: [5-(3-цианоаланин)]окситоцин [87590-89-4].

Примесь I: [5-аспарагиновая кислота]окситоцин [65907-78-0].

Хроматографические условия

Колонка	125 x 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный эндкепированный для хроматографии, 3 мкм;
Температура колонки	25 °C;
Скорость потока	1,0 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 220 нм;
Объем пробы	50 мкл.

Режим хроматографирования

Время, мин	ПФА, %	ПФБ, %
0 — 30	70 \rightarrow 40	30 \rightarrow 60
30 — 30,1	40 \rightarrow 70	60 \rightarrow 30
30,1 — 45	70	30

Хроматографируют раствор для идентификации, раствор стандартного образца примеси F и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Окситоцин — 1 (около 10 мин); примесь I — около 0,9; примесь D — около 0,95; примеси E и F — около 1,4; примесь B — около 1,7.

Идентификация примесей. Для идентификации пиков примесей B, D, E и I используют хроматограмму раствора для идентификации. Для идентификации пика примеси F используют хроматограмму раствора стандартного образца примеси F и хроматограмму, прилагаемую к стандартному образцу примеси F.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для идентификации отношение максимум/минимум (p/v) между пиками примеси D и окситоцина должно быть не менее 2,0.

Допустимое содержание примесей. Содержание любой примеси в субстанции в процентах вычисляют согласно методу нормирования (ОФС «Хроматография»):

• примесь B — не более 1,0%;
• примесь I — не более 1,0%;
• сумма примесей E и F — не более 1,5%;
• любая другая примесь — не более 1,0%;
• сумма примесей — не более 5,0%.

Не учитывают пики менее 0,1%.

Вода. Не более 5,0% (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют 50 мг (точная навеска) субстанции.

Уксусная кислота. От 6,0% до 10,0% (ОФС «Определение уксусной кислоты в синтетических пептидах»).

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 15 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в смеси ПФБ и ПФА в соотношении 5:95 по объему и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

<**> Бактериальные эндотоксины. Не более 300 ЕЭ на 1 мг окситоцина (ОФС «Бактериальные эндотоксины»).

---

<**> Испытание проводят для субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси» со следующими изменениями.

Раствор стандартного образца окситоцина. Готовят раствор фармакопейного стандартного образца окситоцина в ПФА с концентрацией окситоцина в растворе около 0,25 мг/мл.

Хроматографические условия

Объем пробы	25 мкл.

Хроматографируют раствор стандартного образца окситоцина и испытуемый раствор.

Содержание окситоцина C43H66N12O12S2 в субстанции в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей и уксусной кислоты вещество в процентах (X), вычисляют по формуле:

X = \frac{S_{1} \cdot C_{0} \cdot P \cdot 100}{S_{0} \cdot C_{1} \cdot (100 - W - A)} ,

где S1 — площадь пика окситоцина на хроматограмме испытуемого раствора;

S0 — площадь пика окситоцина на хроматограмме раствора стандартного образца окситоцина;

C1 — концентрация окситоцина в испытуемом растворе, мг/мл;

C0 — концентрация окситоцина в растворе стандартного образца окситоцина, мг/мл;

P — содержание окситоцина в фармакопейном стандартном образце окситоцина, %;

A — содержание уксусной кислоты в субстанции, %;

W — суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %.

ХРАНЕНИЕ

В сухом, защищенном от света месте, при температуре от 2 до 8 °C.

---