ФС.2.1.0459. Фармакопейная статья. Мелатонин
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377)
(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)
Примечание
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте https://minzdrav.gov.ru/ по состоянию на 22.08.2023. В соответствии с Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377 данный документ введен в действие с 01.09.2023.
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
| Мелатонин | ФС.2.1.0459 |
|---|---|
| Мелатонин | |
| Melatoninum | Вводится впервые |
 | |
| C13H16N2O2 [73-31-4] | М.м. 232,28 |
N-[2-(5-Метокси-1H-индол-3-ил)этил]ацетамид.
Содержит не менее 98,0% и не более 101,5% мелатонина C13H16N2O2, в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.
Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок.
Растворимость. Растворим в метаноле, умеренно растворим в хлороформе и этилацетате, мало или очень мало растворим в воде.
1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца мелатонина.
2. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика мелатонина на хроматограмме раствора стандартного образца мелатонина (раздел «Количественное определение»).
Температура плавления. От 116 до 119 °C (ОФС «Температура плавления», метод 1).
Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).
Подвижная фаза А (ПФА). Растворяют 2,45 г калия дигидрофосфата в 900 мл воды и доводят значение pH фосфорной кислотой разведенной 10% до 3,0, количественно переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объем раствора водой до метки.
Подвижная фаза Б (ПФБ). Ацетонитрил.
Растворитель (А). Ацетонитрил — Вода 200:800.
Растворитель (Б). ПФБ — ПФА 200:800.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 25 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в растворителе А и доводят объем раствора этим же растворителем до метки.
Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1 мл испытуемого раствора и доводят объем раствора растворителем А до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1 мл полученного раствора и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.
Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 50 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца мелатонина и 50 мг (точная навеска) примеси 5-метокситриптамина, растворяют в растворителе А и доводят объем раствора этим же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1 мл полученного раствора и доводят объем раствора растворителем А до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10 мл полученного раствора и доводят объем раствора растворителем А до метки.
Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл раствора сравнения и доводят объем раствора растворителем А до метки.
Примесь 1: 5-метокситриптамин: 2-(5-метокси-1H-индол-3-ил)этан-1-амин [608-07-1].
| Время, мин | ПФА, % | ПФБ, % |
|---|---|---|
| 0 — 20 | 90 \rightarrow 70 | 10 \rightarrow 30 |
| 20 — 36 | 70 \rightarrow 30 | 30 \rightarrow 70 |
| 36 — 41 | 30 \rightarrow 90 | 70 \rightarrow 10 |
Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для проверки пригодности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.
Относительное время удерживания соединений. Мелатонин — 1 (около 7 мин); примесь 1 — около 0,3.
Идентификация примесей. Для идентификации пика примеси 1 используют относительное время удерживания соединений и хроматограмму раствор для проверки пригодности хроматографической системы.
Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы:
На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы:
- разрешение (RS) между пиками 5-метокситриптамина и мелатонина должно быть не менее 10,0;
- фактор асимметрии пика (AS) мелатонина должен быть не более 2,0.
Содержание 5-метокситриптамина в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:
X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 50 \cdot 1 \cdot 100 \cdot 100}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 20 \cdot 100 \cdot 100} ,
где S1 — площадь пика 5-метокситриптамина на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 — площадь пика 5-метокситриптамина на хроматограмме стандартного раствора;
a0 — навеска стандартного образца 5-метокситриптамина, мг;
P — содержание 5-метокситриптамина в стандартном образце 5-метокситриптамина, %.
Содержание любой другой примеси в субстанции (Xi) в процентах вычисляют по формуле:
X_{i} = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 1 \cdot 10 \cdot 50 \cdot 100 \cdot 100}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 50 \cdot 100 \cdot 100 \cdot 100} ,
где S1 — площадь пика любой другой примеси на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 — площадь пика мелатонина на хроматограмме стандартного раствора;
a0 — навеска стандартного образца мелатонина, мг;
P — содержание мелатонина в стандартном образце мелатонина, %.
Допустимое содержание примесей:
- примесь 1 — не более 0,15%;
- любая другая примесь — не более 0,10%;
- сумма всех примесей — не более 0,5%.
Не учитывают пики, содержание каждого из которых менее 0,05%.
Вода. Не более 0,3% (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют 0,2 г (точная навеска) субстанции.
Сульфатная зола. Не более 0,1% (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.
Тяжелые металлы. Не более 0,001%. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжелые металлы» (метод 3Б) в зольном остатке, полученном в испытании «Сульфатная зола», с использованием эталонного раствора 1.
Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».
Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».
Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси» со следующими изменениями:
Подвижная фаза (ПФ). ПФБ — ПФА 200:800.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 25 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в растворителе Б и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора растворителем Б до метки.
Раствор стандартного образца мелатонина. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 50 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца мелатонина, растворяют в растворителе Б и доводят объем раствора этим же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1 мл полученного раствора и доводят объем раствора растворителем Б до метки.
Объем вводимой пробы в хроматографическую систему — 5 мкл.
Хроматографируют раствор стандартного образца мелатонина и испытуемый раствор.
Время хроматографирования: двукратное от времени удерживания пика мелатонина (около 2 мин).
Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора стандартного образца мелатонина фактор асимметрии пика (AS) мелатонина должен быть не более 2,0.
Содержание мелатонина C13H16N2O2 в субстанции в процентах в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество (X) вычисляют по формуле:
X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 5 \cdot 25 \cdot 100 \cdot 100}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 50 \cdot 50 \cdot 5 \cdot (100 - W)} ,
где S1 — площадь пика мелатонина на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 — площадь пика мелатонина на хроматограмме раствора стандартного образца мелатонина;
a0 — навеска стандартного образца мелатонина, мг;
W — суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %;
P — содержание мелатонина в стандартном образце мелатонина, %.