ФС.2.1.0367. Фармакопейная статья. Флударабина фосфат. Флударабин
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377)
(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)
Примечание
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте https://minzdrav.gov.ru/ по состоянию на 23.08.2023. В соответствии с Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377 данный документ введен в действие с 01.09.2023.
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
| Флударабина фосфат | ФС |
|---|---|
| Флударабин | |
| Fludarabini phosphas | Вводится впервые |
 | |
| C10H13FN5O7P [75607-67-9] | М.м. 365,21 |
9-(5-O-Фосфоно- \beta -D-арабинофуранозил)-2-фтор-9H-пурин-6-амин.
Содержит не менее 97,0% и не более 102,0% флударабина фосфата C10H13FN5O7P в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.
Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок.
<*> Гигроскопичен.
<*> Приводится для информации.
Растворимость. Легко растворим в диметилформамиде, мало растворим в воде, практически нерастворим в этаноле.
1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции, в области от 4000 до 400 см-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца флударабина фосфата.
2. ВЭЖХ. Время удерживания пика основного вещества на хроматограмме испытуемого раствора Б должно соответствовать времени удерживания пика флударабина фосфата на хроматограмме раствора стандартного образца флударабина фосфата (А) (раздел «Количественное определение»).
Удельное вращение. От +10,0 до +14,0 в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество (ОФС «Оптическое вращение»).
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 0,1 г (точная навеска) субстанции, прибавляют 15 мл воды, обрабатывают ультразвуком до полного растворения, охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора водой до метки.
Прозрачность раствора. Раствор должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей»).
Испытуемый раствор. Растворяют 50 мг субстанции в 5 мл диметилформамида, при необходимости обрабатывая ультразвуком.
Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании «Прозрачность раствора», должен выдерживать сравнение с эталоном BY5 (ОФС «Степень окраски жидкостей», метод 2).
pH раствора. От 2,0 до 4,0 (0,1% раствор, ОФС «Ионометрия», метод 3).
Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»). Все растворы используют сразу после приготовления.
Допустимое содержание примесей:
- сумма неидентифицированных примесей — не более 0,5%;
- сумма всех примесей, определенных в тестах 1 и 2 — не более 2,0%.
1. Примеси, элюирующиеся до основного пика
Подвижная фаза (ПФ). Метанол — калия дигидрофосфата раствор 0,01 М 60:940.
Испытуемый раствор А. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 25 мг (точная навеска) субстанции, прибавляют 30 мл ПФ, обрабатывают ультразвуком до полного растворения, охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора ПФ до метки.
Испытуемый раствор Б. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора А и доводят объем раствора ПФ до метки.
Раствор стандартного образца флударабина фосфата (А). Помещают 10 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца флударабина фосфата в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 30 мл ПФ, обрабатывают ультразвуком до полного растворения, охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора ПФ до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора ПФ до метки.
Раствор стандартного образца флударабина фосфата (Б). В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 1,0 мл раствора стандартного образца флударабина фосфата (А) и доводят объем раствора ПФ до метки.
Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 10 мг фармакопейного стандартного образца флударабина фосфата, прибавляют 10 мл хлористоводородной кислоты раствора 0,1 М, нагревают на водяной бане при температуре 80 °C в течение 15 мин, охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора водой до метки.
Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5,0 мл раствора стандартного образца флударабина фосфата (Б) и доводят объем раствора ПФ до метки.
Примесь A: 6-амино-9-(5-O-фосфоно- \beta -арабинофуранозил)-1,9-дигидро-2H-пурин-2-он [62314-92-5].
Примесь B: 6-амино-1,7-дигидро-2H-пурин-2-он [3373-53-3].
Примесь C: 9-(3,5-ди-O-фосфоно- \beta -D-арабинофуранозил)-2-фтор-9H-пурин-6-амин [548774-53-4].
Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор стандартного образца флударабина фосфата (А), раствор стандартного образца флударабина фосфата (Б) и испытуемый раствор А.
Относительное время удерживания соединений. Флударабина фосфат — 1 (около 9 мин); примесь A — около 0,26; примесь B — около 0,34; примесь C — около 0,42.
Идентификация примесей. Для идентификации пика примеси C используется хроматограмма раствора стандартного образца флударабина фосфата (А). В случае возникновения затруднений при идентификации пиков примесей A и B хроматографируют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы при длине волны 292 нм.
Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика флударабина фосфата должно быть не менее 10.
На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (Rs) между пиками примеси A и примеси B должно быть не менее 2,0 (при длине волны 292 нм).
На хроматограмме раствора стандартного образца флударабина фосфата (Б):
- фактор асимметрии пика (As) флударабина фосфата должен быть не более 2,0;
- относительное стандартное отклонение площади пика флударабина фосфата должно быть не более 2,0% (6 определений).
Поправочные коэффициенты. Для расчета содержания площади пиков следующих примесей умножают на соответствующие поправочные коэффициенты: примесь A — 4,0; примесь B — около 2,5; примесь C — 1,9.
Содержание каждой из примесей в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:
X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 50 \cdot 1 \cdot 1}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 50 \cdot 20 \cdot 20} ,
где S1 — площадь пика каждой из примесей на хроматограмме испытуемого раствора А;
S0 — площадь пика флударабина фосфата на хроматограмме раствора стандартного образца флударабина фосфата (Б);
a0 — навеска фармакопейного стандартного образца флударабина фосфата, мг;
P — содержание флударабина фосфата в фармакопейном стандартном образце флударабина фосфата, %.
Допустимое содержание примесей:
- примесь A — не более 0,8%;
- примесь C — не более 0,4%;
- примесь B — не более 0,2%;
- любой другой примеси — не более 0,1%.
Не учитывают пики, элюирующиеся после пика флударабина фосфата, и пики менее 0,05%.
2. Примеси, элюирующиеся после основного пика. Определение проводят в условиях испытания «Родственные примеси. Примеси, элюирующиеся до основного пика» со следующими изменениями.
Подвижная фаза (ПФ). Метанол — калия дигидрофосфата раствор 0,01 М 200:800.
Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5 мг фармакопейного стандартного образца флударабина для пригодности системы, содержащего примеси D, E и F, прибавляют 7 мл ПФ, обрабатывают ультразвуком до полного растворения, охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора ПФ до метки.
Примесь D: 2-фтор-7H-пурин-6-амин [700-49-2].
Примесь E: 9-( \beta -D-арабинофуранозил)-2-фтор-9H-пурин-6-амин [21679-14-1].
Примесь F: 9-(5-O-фосфоно- \beta -D-арабинофуранозил)-2-этокси-9H-пурин-6-амин [159002-28-5].
| Время хроматографирования | 8-кратное от времени удерживания пика флударабина фосфата. |
|---|
Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор стандартного образца флударабина фосфата (Б) и испытуемый раствор А.
Относительное время удерживания соединений. Флударабина фосфат — 1 (около 2,5 мин); примесь D — около 1,5; примесь E — около 1,9; примесь F — около 2,5.
Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика флударабина фосфата должно быть не менее 10.
На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (Rs) между пиками флударабина фосфата и примеси D должно быть не менее 5,0.
На хроматограмме раствора стандартного образца флударабина фосфата (Б):
- относительное стандартное отклонение площади пика флударабина фосфата должно быть не более 5,0% (6 введений);
- фактор асимметрии пика (As) флударабина фосфата должен быть не более 2,0.
Поправочные коэффициенты. Для расчета содержания площади пиков следующих примесей умножаются на соответствующие поправочные коэффициенты: примесь D — 0,5; примесь E — около 0,6; примесь F — 1,8.
Содержание каждой из примесей в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:
X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 50 \cdot 1 \cdot 1}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 50 \cdot 20 \cdot 20} ,
где S1 — площадь пика каждой из примесей на хроматограмме испытуемого раствора А;
S0 — площадь пика флударабина фосфата на хроматограмме раствора стандартного образца флударабина фосфата (Б);
a0 — навеска фармакопейного стандартного образца флударабина фосфата, мг;
P — содержание флударабина фосфата в фармакопейном стандартном образце флударабина фосфата, %.
Допустимое содержание примесей:
- примесь E — не более 0,2%;
- примесь F — не более 0,2%;
- примесь D — не более 0,15%;
- любой другой примеси — не более 0,1%.
Не учитывают пики, элюирующиеся до пика флударабина фосфата, и пики менее 0,05%.
Вода. Не более 3,0% (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют 0,1 г (точная навеска) тонкоизмельченной субстанции. Перед титрованием субстанцию взбалтывают с 30 мл метанола безводного в течение 30 с.
Натрий. Не более 0,2%. Определение проводят методом атомно-эмиссионной спектрометрии с пламенной атомизацией (ОФС «Атомно-эмиссионная спектрометрия»).
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 50 мг субстанции, растворяют в воде и доводят объем раствора водой до метки.
Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 0,5084 г натрия хлорида, предварительно высушенного при 105 °C до постоянной массы, растворяют в воде и доводят объем раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора водой до метки.
Определяют атомную эмиссию стандартного и испытуемого растворов на линии спектра излучения натрия при длине волны 589,0 нм.
Отклик эмиссии испытуемого раствора не должен превышать отклик эмиссии стандартного раствора.
Фосфаты. Не более 0,1% (ОФС «Фосфаты»). В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10 мг субстанции, растворяют в воде и доводят объем раствора водой до метки.
Хлориды. Не более 0,2% (ОФС «Хлориды»). Растворяют 10 мг субстанции в 10 мл воды.
Тяжелые металлы. Не более 0,002%. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжелые металлы» (метод 3Б), в зольном остатке, полученном после сжигания 1,0 г субстанции, с использованием эталонного раствора 2.
Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».
<**> Бактериальные эндотоксины. Не более 4,0 ЕЭ на 1 мг флударабина фосфата (ОФС «Бактериальные эндотоксины»).
<**> Испытание проводят для субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.
Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».
Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси. Примеси, элюирующиеся до основного пика» со следующими изменениями.
| Время хроматографирования | 18 мин. |
|---|
Хроматографируют раствор стандартного образца флударабина фосфата (А) и испытуемый раствор Б.
Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора стандартного образца флударабина фосфата (А):
- фактор асимметрии пика (As) флударабина фосфата должен быть не более 2,0;
- относительное стандартное отклонение площади пика флударабина фосфата должно быть не более 2,0% (6 введений);
- относительное стандартное отклонение времени удерживания пика флударабина фосфата должно быть не более 2,0% (6 введений);
- эффективность хроматографической колонки (N), рассчитанная по пику флударабина фосфата, должна составлять не менее 2000 теоретических тарелок.
Содержание флударабина фосфата C10H13FN5O7P в субстанции в процентах (X) в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество вычисляют по формуле:
X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 50 \cdot 50 \cdot 1 \cdot 100}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 1 \cdot 50 \cdot 20 \cdot (100 - W)} ,
где S1 — площадь пика флударабина фосфата на хроматограмме испытуемого раствора Б;
S0 — площадь пика флударабина фосфата на хроматограмме раствора стандартного образца флударабина фосфата (А);
a0 — навеска фармакопейного стандартного образца флударабина фосфата, мг;
W — суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %;
P — содержание флударабина фосфата в фармакопейном стандартном образце флударабина фосфата, %.
В сухом, защищенном от света месте, при температуре от +2 до +8 °C.