ФС.2.1.0342. Фармакопейная статья. Аллопуринол
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377)
(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)
Примечание
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте https://minzdrav.gov.ru/ по состоянию на 16.08.2023. В соответствии с Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377 данный документ введен в действие с 01.09.2023. Взамен ФС 42-2408-99.
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
| Аллопуринол | ФС |
|---|---|
| Аллопуринол | |
| Allopurinolum | Взамен ФС 42-2408-99 |
 | |
| C5H4N4O [315-30-0] | М.м. 136,11 |
1,5-Дигидро-4H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-он.
Содержит не менее 97,0% и не более 102,0% аллопуринола C5H4N4O в пересчете на сухое вещество.
Описание. Белый или почти белый мелкокристаллический порошок.
Растворимость. Легко растворим в натрия гидроксида растворе 10%, умеренно растворим в диметилсульфоксиде, очень мало растворим в воде и спирте 96%.
1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца аллопуринола.
2. Спектрофотометрия (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в 1 мл натрия гидроксида растворе 0,1 М и доводят объем раствора хлористоводородной кислоты раствором 0,1 М до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10 мл полученного раствора и доводят объем раствора хлористоводородной кислоты раствором 0,1 М до метки.
Спектр поглощения испытуемого раствора в области длин волн от 220 до 350 нм должен иметь максимум при 250 нм и минимум при 231 нм. Отношение оптических плотностей A231/A250 должно быть 0,47 +/- 0,05.
3. Качественная реакция. Растворяют 50 мг субстанции в 5 мл натрия гидроксида раствора 0,1 М, прибавляют 1 мл реактива Несслера, нагревают до кипения и оставляют на 30 мин; должен образоваться осадок желтого цвета.
Прозрачность раствора. Раствор 0,1 г субстанции в 10 мл натрия гидроксида раствора 0,1 М должен быть прозрачным или выдерживать сравнение с эталоном 1 (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей»).
Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании «Прозрачность раствора», должен быть бесцветным или выдерживать сравнение с эталоном B7 (ОФС «Степень окраски жидкостей», метод 2).
Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).
Все растворы хранят при температуре 8 °C не более 48 ч.
Подвижная фаза А (ПФА). В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 1,25 г калия дигидрофосфата, растворяют в воде и доводят объем раствора водой до метки.
Подвижная фаза Б (ПФБ). Метанол.
Растворитель. ПФА — ПФБ 900:100.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 25 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в 5 мл натрия гидроксида раствора 0,1 М, обрабатывают ультразвуком в течение 1 мин, прибавляют 80 мл растворителя, обрабатывают ультразвуком в течение 5 мин и доводят объем раствора растворителем до метки.
Раствор стандартного образца аллопуринола. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 5 мг (точная навеска) стандартного образца аллопуринола, растворяют в 2 мл натрия гидроксида раствора 0,1 М, обрабатывают ультразвуком в течение 1 мин, прибавляют 80 мл растворителя, обрабатывают ультразвуком в течение 5 мин и доводят объем раствора растворителем до метки.
Раствор стандартного образца примеси A. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 5 мг (точная навеска) стандартного образца примеси A, растворяют в 2 мл натрия гидроксида раствора 0,1 М, обрабатывают ультразвуком в течение 1 мин, прибавляют 80 мл растворителя, обрабатывают ультразвуком в течение 5 мин и доводят объем раствора растворителем до метки.
Раствор стандартного образца примеси B. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 5 мг (точная навеска) стандартного образца примеси B, растворяют в 2 мл натрия гидроксида раствора 0,1 М, обрабатывают ультразвуком в течение 1 мин, прибавляют 80 мл растворителя, обрабатывают ультразвуком в течение 5 мин и доводят объем раствора растворителем до метки.
Раствор стандартного образца примеси C. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 5 мг (точная навеска) стандартного образца примеси C, растворяют в 2 мл натрия гидроксида раствора 0,1 М, обрабатывают ультразвуком в течение 1 мин, прибавляют 80 мл растворителя, обрабатывают ультразвуком в течение 5 мин и доводят объем раствора растворителем до метки.
Раствор стандартного образца примеси D. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 5 мг (точная навеска) стандартного образца примеси D, растворяют в 2 мл натрия гидроксида раствора 0,1 М, обрабатывают ультразвуком в течение 1 мин, прибавляют 80 мл растворителя, обрабатывают ультразвуком в течение 5 мин и доводят объем раствора растворителем до метки.
Раствор стандартного образца примеси E. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 5 мг (точная навеска) стандартного образца примеси E, растворяют в 2 мл натрия гидроксида раствора 0,1 М, обрабатывают ультразвуком в течение 1 мин, прибавляют 80 мл растворителя, обрабатывают ультразвуком в течение 5 мин и доводят объем раствора растворителем до метки.
Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают по 1,0 мл раствора стандартного образца аллопуринола, раствора стандартного образца примеси A, раствора стандартного образца примеси B, раствора стандартного образца примеси C, раствора стандартного образца примеси D и раствора стандартного образца примеси E и доводят объем раствора растворителем до метки.
Примесь A: 5-амино-1H-пиразол-4-карбоксамид [5334-31-6].
Примесь B: 5-формамидо-1H-пиразол-4-карбоксамид [22407-20-1].
Примесь C: 5-(4H-1,2,4-триазол-4-ил)-1H-пиразол-4-карбоксамид [1346604-13-4].
Примесь D: этил(5-амино-1H-пиразол-4-карбоксилат) [6994-25-8].
Примесь E: этил(5-формамидо-1H-пиразол-4-карбоксилат) [31055-19-3].
| Время, мин | ПФА, % | ПФБ, % |
|---|---|---|
| 0 — 30 | 90 \rightarrow 70 | 10 \rightarrow 30 |
| 30 — 35 | 70 | 30 |
| 35 — 36 | 70 \rightarrow 90 | 30 \rightarrow 10 |
| 36 — 46 | 90 | 10 |
Хроматографируют стандартный и испытуемый растворы.
Относительное время удерживания соединений. Аллопуринол — 1 (около 10 мин); примесь A — около 0,62; примесь C — около 0,79; примесь B — около 0,81; примесь D — около 4,4; примесь E — около 4,8.
Идентификация примесей. Для идентификации пиков примеси A, B, C, D и E используют относительное время удерживания соединений и хроматограмму стандартного раствора.
Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме стандартного раствора:
- разрешение (RS) между пиками примеси C и примеси B должно быть не менее 0,8;
- фактор асимметрии пика (AS) аллопуринола должен быть не более 1,5.
Содержание каждой из примесей A, B, C, D и E в процентах (X) вычисляют по формуле:
X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot 100 \cdot P}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 100 \cdot 100} ,
где S1 — площадь пика каждой из примесей A, B, C, D и E на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 — площадь пика каждой из примесей A, B, C, D и E на хроматограмме стандартного раствора;
a0 — навеска фармакопейного стандартного образца каждой из примесей A, B, C, D и E, мг;
P — содержание примеси A, B, C, D и E в фармакопейном стандартном образце примеси A, B, C, D и E, соответственно, %.
Содержание любой другой примеси в процентах (X) вычисляют по формуле:
X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot 100 \cdot P}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 100 \cdot 100} ,
где S1 — площадь пика любой другой примеси на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 — площадь пика аллопуринола на хроматограмме стандартного раствора;
a0 — навеска фармакопейного стандартного образца аллопуринола, мг;
P — содержание аллопуринола в фармакопейном стандартном образце аллопуринола, %.
Допустимое содержание примесей:
- примеси A, B, C, D, E — не более 0,2% каждая;
- примесь с относительным временем удерживания около 6,5 — не более 0,2%;
- любая другая примесь — не более 0,1%;
- сумма примесей — не более 1,0%.
Гидразин. Не более 0,00025%. Гидразин, присутствующий в субстанции, реагирует с бензальдегидом, образуя бензальдегид азин. Определение полученного продукта реакции проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).
Допускается использование и других реактивов для проведения реакции, например диметиламинобензальдегида или других реагентов, позволяющих повысить чувствительность методики. При этом применяемая методика должна быть валидирована.
Подвижная фаза (ПФ). 2-Пропанол — гексан 50:950.
Растворитель. Натрия гидроксида раствор 8,5% — метанол 1:1.
Раствор бензальдегида. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 2,0 г бензальдегида, растворяют в растворителе и доводят объем раствора растворителем до метки. Раствор готовят непосредственно перед использованием.
Испытуемый раствор. Растворяют 0,25 г (точная навеска) субстанции в 5 мл растворителя, прибавляют 4 мл раствора бензальдегида, перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 2,5 ч. Прибавляют 5,0 мл гексана и встряхивают в течение 1 мин. Оставляют до разделения слоев, используют верхний (гексановый) слой.
Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 10 мг (точная навеска) гидразина сульфата, растворяют в растворителе, обрабатывают ультразвуком и доводят объем раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора растворителем до метки. К 5,0 мл полученного раствора прибавляют 4 мл раствора бензальдегида, перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 2,5 ч. Прибавляют 5,0 мл гексана, встряхивают в течение 1 мин и оставляют до разделения слоев. Используют органический (верхний) слой.
Контрольный раствор. К 5,0 мл растворителя прибавляют 4 мл раствора бензальдегида, перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 2,5 ч. Прибавляют 5,0 мл гексана и встряхивают в течение 1 мин. Оставляют до разделения слоев, используют верхний (гексановый) слой.
Хроматографируют контрольный раствор, стандартный и испытуемый растворы.
Относительное время удерживания соединений. Бензальдегид — 1 (около 2,8 мин); бензальдегид азин — около 0,8.
Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме стандартного раствора:
- разрешение (RS) между пиками бензальдегид азина и бензальдегида должно быть не менее 2,0;
- отношение сигнал/шум (S/N) для пика бензальдегид азина должно быть не менее 20.
Содержание гидразина в процентах (X) вычисляют по формуле:
X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot 5 \cdot 1 \cdot 1 \cdot 5 \cdot P \cdot 32,05}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 50 \cdot 20 \cdot 20 \cdot 5 \cdot 130,12} ,
где S1 — площадь пика бензальдегид азина на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 — площадь пика бензальдегид азина на хроматограмме стандартного раствора;
a0 — навеска гидразина сульфата, мг;
P — содержание основного вещества в гидразина сульфате, %;
32,05 — молекулярная масса гидразина;
130,12 — молекулярная масса гидразина сульфата.
Потеря в массе при высушивании. Не более 0,5% (ОФС «Потеря в массе при высушивании», способ 1). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.
Сульфатная зола. Не более 0,1% (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.
Тяжелые металлы. Не более 0,001%. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжелые металлы» (метод 3А) в зольном остатке, полученном в испытании «Сульфатная зола», или (методом 6).
Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».
Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».
Определение проводят методом титриметрии (ОФС «Титриметрия (титриметрические методы анализа)»).
Растворяют 0,1 г (точная навеска) субстанции в 25 мл диметилсульфоксида, предварительно нейтрализованного по тимоловому синему 0,1 М раствором натрия гидроксида в смеси метанола и бензола, и титруют 0,1 М раствором натрия гидроксида в смеси метанола и бензола. Конечную точку титрования определяют потенциометрически (ОФС «Потенциометрическое титрование»).
Параллельно проводят контрольный опыт.
1 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида в смеси метанола и бензола соответствует 13,61 мг аллопуринола C5H4N4O.
В герметично укупоренной упаковке.