ФС.2.1.0318. Фармакопейная статья. Циластатин натрия. Циластатин

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Циластатин натрия	ФС
Циластатин
Cilastatinum natricum	Вводится впервые

C16H25N2NaO5S [81129-83-1]	М.м. 380,43

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

(Z)-7-[((2R)-2-Амино-2-карбоксиэтил)сульфанил]-2-{[((1S)-2,2-диметилциклопропил)карбонил]амино}гепт-2-еноат натрия.

Содержит не менее 98,0% и не более 101,5% циластатина натрия C16H25N2NaO5S в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или светло-желтый аморфный порошок.

<*> Гигроскопичен.

---

<*> Приводится для информации.

Растворимость. Очень легко растворим в воде и метаноле, мало растворим в этаноле, практически нерастворим в метиленхлориде.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца циластатина натрия.

2. Качественная реакция. Субстанция должна давать характерную реакцию А на натрий (ОФС «Общие реакции на подлинность»).

ИСПЫТАНИЯ

Удельное вращение. От +41,5 до +44,5 в пересчете на безводное вещество (ОФС «Оптическое вращение»).

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 0,25 г субстанции, растворяют в смеси хлористоводородная кислота концентрированная — метанол 1:120 и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Прозрачность раствора. Раствор субстанции 1% в воде, свободной от углерода диоксида, должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей»).

Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании «Прозрачность раствора», должен выдерживать сравнение с эталоном Y6 (ОФС «Степень окраски жидкостей», метод 2).

pH раствора. От 6,5 до 7,5 (раствор, полученный в испытании «Прозрачность раствора», ОФС «Ионометрия», метод 3).

Родственные примеси

1. Примесь D, ацетон и метанол. Определение проводят методом ГХ (ОФС «Газовая хроматография»).

Все растворы используют свежеприготовленными.

Раствор внутреннего стандарта. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помешают 0,5 мл пропанола, растворяют в воде и доводят объем раствора водой до метки.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 0,2 г (точная навеска) субстанции, растворяют в воде, прибавляют 2,0 мл раствора внутреннего стандарта и доводят объем раствора водой до метки.

Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 2,0 мл ацетона, 0,5 мл метанола, 0,5 мл мезитилоксида (примесь D) и доводят объем раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 2,0 мл полученного раствора, 2,0 мл раствора внутреннего стандарта и доводят объем раствора водой до метки (концентрация ацетона около 316 мкг/мл, метанола около 79 мкг/мл; примеси D около 86 мкг/мл).

Хроматографические условия

Колонка	кварцевая капиллярная, 30 м x 0,53 мм, покрытая слоем макрогола 20 000, 1 мкм;
Детектор	пламенно-ионизационный;
Газ-носитель	гелий для хроматографии;
Скорость потока	9 мл/мин;
Объем пробы	1 мкл;
Температура	Инжектор	160 °C;
	Колонка	50 °C в течение 2,5 мин, подъем 8 °C/мин до 70 °C; выдержка 2,5 мин;
	Детектор	220 °C.

Хроматографируют стандартный и испытуемый растворы.

Содержание каждой из примесей в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{B_{1} \cdot C_{0} \cdot 10}{B_{0} \cdot a_{1} \cdot 10} ,

где B1 — отношение площади каждого из пиков примеси D, ацетона или метанола к площади пика внутреннего стандарта на хроматограмме испытуемого раствора;

B0 — отношение площади каждого из пиков примеси D, ацетона или метанола к площади пика внутреннего стандарта на хроматограмме стандартного раствора;

a1 — навеска субстанции, мг;

C0 — концентрация примеси D, ацетона, или метанола в стандартном растворе, соответственно, мкг/мл.

Допустимое содержание примесей:

• ацетон — не более 1,0%;
• метанол — не более 0,5%;
• примесь D — не более 0,4%.

2. Другие примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Растворы, содержащие циластатин натрия и его примеси, готовят непосредственно перед применением.

Подвижная фаза А (ПФА). Фосфатный буферный раствор pH 3,25.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Ацетонитрил — ПФА 500:500.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 32 мг субстанции, растворяют в воде и доводят объем раствора водой до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объем раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора водой до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы А. В мерную колбу вместимостью 2 мл помещают 3 мг фармакопейного стандартного образца циластатина для проверки пригодности системы 1, содержащий примеси A, B, E, F, G (эпимер 2) и H, растворяют в воде и доводят объем раствора водой до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы Б. В мерную колбу вместимостью 2 мл помещают 3 мг фармакопейного стандартного образца циластатина для проверки пригодности системы 2, содержащий примеси C и G (эпимер 1), растворяют в воде и доводят объем раствора водой до метки.

Раствор для идентификации пика примеси D. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 32 мг мезитилоксида (примесь D), растворяют в воде и доводят объем раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора водой до метки.

Примечание

Примесь A: (Z)-7-[(RS)-((2R)-2-амино-2-карбоксиэтил)сульфинил]-2-{[((1S)-2,2-диметилциклопропил)карбонил]амино}гепт-2-еновая кислота.

Примесь B: (Z)-7-{[(2R)-2-((1RS)-1-метил-3-оксибутил)амино-2-карбоксиэтил]сульфанил}-2-{[((1S)-2,2-диметилциклопропил)карбонил]амино}гепт-2-еновая кислота.

Примесь C: (Z)-7-{[(2R)-2-((1,1-диметил-3-оксибутил)амино-2-карбоксиэтил]сульфанил}-2-{[((1S)-2,2-диметилциклопропил)карбонил]амино}гепт-2-еновая кислота.

Примесь D (мезитилоксид): 4-метилпент-3-ен-2-он [141-79-7].

Примесь E: 7-[((2R)-2-амино-2-карбоксиэтил)сульфанил]-2-оксогептановая кислота [1174657-07-8].

Примесь F: (Z)-7-[((2R)-2-амино-2-карбоксиэтил)сульфанил]-2-[(2,3-диметилбут-3-еноил)амино]гепт-2-еновая кислота.

Примесь G: -(2RS)-7-[((2R)-2-амино-2-карбоксиэтил)сульфанил]-2-{[((1S)-2,2-диметилциклопропил)карбонил]амино}гепт-3-еновая кислота.

Примесь H: (Z)-7-[(2-аминоэтил)сульфанил]-2-{[((1S)-2,2-диметилциклопропил)карбонил]амино}гепт-2-еновая кислота.

Хроматографические условия

Колонка	250 x 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный совместимый с водной подвижной фазой эндкепированный для хроматографии, 5 мкм;
Температура колонки	50 °C;
Скорость потока	2,0 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 210 нм;
Объем пробы	20 мкл.

Режим хроматографирования

Время, мин	ПФА, %	ПФБ, %
0 — 3	100	0
3 — 28	100 \rightarrow 90	0 \rightarrow 10
28 — 38	90	10
38 — 63	90 \rightarrow 50	10 \rightarrow 50
63 — 78	50 \rightarrow 30	50 \rightarrow 70
78 — 88	30	70
88 — 93	30 \rightarrow 100	70 \rightarrow 0

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы А, раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы Б, раствор для идентификации пика примеси D, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Циластатин — 1 (около 50 мин); примесь E — около 0,20; примесь A (эпимер 1) — около 0,60; примесь A (эпимер 2) — около 0,62; примесь D — около 0,90; примесь F — около 0,98; примесь G (эпимер 1) — около 1,02; примесь G (эпимер 2) — около 1,05; примесь H — около 1,06; примесь B — около 1,17; примесь C — около 1,23.

Идентификация примесей. Для идентификации пиков примесей A, B, E, F и G используют хроматограмму раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы А и хроматограмму, прилагаемую к стандартному образцу циластатина для проверки пригодности системы 1. Для идентификации пиков примесей C и G используют хроматограмму раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы Б и хроматограмму, прилагаемую к стандартному образцу циластатина для проверки пригодности системы 2.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы А отношение максимум/минимум (p/v) между пиками примеси F и циластатина должно быть не менее 10,0.

На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы Б отношение максимум/минимум (p/v) между пиками циластатина и примеси G (эпимер 1) должно быть не менее 2,5.

Поправочные коэффициенты. Для расчета содержания примесей площади пиков следующих примесей умножают на соответствующие поправочные коэффициенты: примесь C — 1,3; примесь E — 3,3; примесь G (эпимер 1) и примесь G (эпимер 2) — 1,6.

Содержание каждой из примесей в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{S_{1} \cdot 20 \cdot 1 \cdot 1}{S_{0} \cdot 20 \cdot 100 \cdot 10} \cdot 100,

где S1 — площадь пика любой примеси на хроматограмме испытуемого раствора;

S0 — площадь пика циластатина на хроматограмме раствора сравнения.

Допустимое содержание примесей:

• примесь A (сумма эпимеров) — не более 0,5%;
• примесь C — не более 0,4%;
• примесь E — не более 0,3%;
• каждой из примеси B, F, H, G (эпимер 1), G (эпимер 2) — не более 0,1%;
• любая другая примесь — не более 0,05%;
• сумма примесей — не более 1,0%.

Не учитывают пик примеси D и пики менее 0,03%.

Вода. Не более 2,0% (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют 0,5 г (точная навеска) субстанции.

Тяжелые металлы. Не более 0,002% (ОФС «Тяжелые металлы», метод 6).

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

<**> Бактериальные эндотоксины. Не более 0,17 ЕЭ на 1 мг циластатина натрия (ОФС «Бактериальные эндотоксины»).

---

<**> Испытание проводят для субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом титриметрии (ОФС «Титриметрия (титриметрические методы анализа)»).

Растворяют 0,1 г (точная навеска) субстанции в 30 мл метанола, прибавляют 5 мл воды, доводят значение pH хлористоводородной кислоты раствором 0,1 М до 3,0 и титруют 0,1 М раствором натрия гидроксида. Конечную точку титрования определяют потенциометрически (ОФС «Потенциометрическое титрование»). Учитывают объем титранта, израсходованный между первой и третьей точками перегиба на кривой титрования.

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида соответствует 19,02 мг циластатина натрия C16H25N2NaO5S.

ХРАНЕНИЕ

В сухом месте при температуре от 2 до 8 °C.

---