Временные методические указания по определению 2-амино-4-диметиламино-6-хлор-1,3,5-триазина в воде хроматографическими методами
Актуально на 01.11.2026.
Как цитировать: "Временные методические указания по определению 2-амино-4-диметиламино-6-хлор-1,3,5-триазина в воде хроматографическими методами". 6161-91. https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-6161-91
(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 № 6161-91)
29 июля 1991 г. № 6161-91
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ 2-АМИНО-4-ДИМЕТИЛАМИНО-6-ХЛОР-1,3,5-ТРИАЗИНА В ВОДЕ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ
Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхозпрода РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов в продуктах питания, кормах и объектах окружающей среды.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. Краткая характеристика вещества
N
// \ C H N Cl. Cl──C // \ C──NH 5 8 5
| 2 М.м. 173,61. |
|---|
N \\ / N
\\ /C
N
/ \
H C CH
3 3
2-Амино-4-диметиламино-6-хлор-1,3,5-триазин (АДХТ) — метаболит и полупродукт синтеза грамекса. Белое кристаллическое вещество без запаха с Т пл. 210 — 211 °C. Растворимость в воде — 0,049% (25 °C), ацетоне — 1,94%, хлороформе — 0,34%.
ПДК в воде водоемов — 0,02 мг/куб. дм.
2. Методика определения 2-амино-4-диметиламино-6-хлор-1,3,5-триазина в воде
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Метод основан на экстракции АДХТ из воды хлороформом с последующим определением газожидкостной (ГЖХ) и тонкослойной (ТСХ) хроматографией. Минимально детектируемое количество с помощью пламенно-ионизационного детектора 0,01 мкг, минимально обнаруживаемое количество на тонкослойных хроматограммах 1 мкг. Предел обнаружения АДХТ в воде 0,008 мг/л (ТСХ) и 0,006 мг/л (ГЖХ).
2.1.2 Избирательность метода
Определению АДХТ не мешают другие триазины — полупродукты производства пестицидов — производных сульфанилмочевин.
2.1.3 Метрологическая характеристика метода приведена в таблице.
| Метод определения | Предел обнаружения, мг/л | Процент определения, % | Средняя квадратичн. ошибка определения, мкг | Доверительный интервал (p = 0,95, n = 10) |
|---|---|---|---|---|
| ГЖХ | 0,006 | 65 | +/- 1,1 | +/- 0,8 |
| ТСХ | 0,008 | 72 | +/- 0,44 | +/- 0,3 |
2.2. Реактивы и растворы
Бензол чда, ГОСТ 5955-75.
Натрий сернокислый б/в, ч, ГОСТ 4106-76.
Этиловый эфир уксусной кислоты чда, ГОСТ 22300-76.
Серебро азотнокислое чда, ГОСТ 1277-75.
Бромфеноловый синий чда, ТУ 6-09-37-9-83.
Лимонная кислота осч, ТУ 6-09-584-75.
Хлороформ хч, ТУ 6-09-4263-76.
Калий иодистый чда, ГОСТ 4232-74.
Крахмал растворимый чда, ГОСТ 10163-76.
Дистиллированная вода, ТУ 6-09-2502-77.
Калий марганцовокислый чда, ГОСТ 20490-75, 3-процентный водный раствор.
Хлористоводородная кислота хч, ГОСТ 18290-72, 12-процентный водный раствор.
Кальций сернокислый чда, ГОСТ 3210-66.
Кальций хлористый ч, ГОСТ 4460-77.
Силикагель КСК № 2, ГОСТ 3956-76, ТУ 6-09-2523-72.
Силикагель ЛС 5/40 для тонкослойной хроматографии с 13% гипса (Хемапол, ЧССР).
Пластинки для тонкослойной хроматографии «Силуфол» (Хемапол, ЧССР).
Гидроксид натрия хч, ГОСТ 4328-77.
Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.
Хроматон N-AW, 0,20 — 0,25 мм, с 5% XE-60.
Хромосорб W-HP, 80/100 меш, с 3% OV-17.
2.3. Приборы и посуда
Газовый хроматограф с пламенно-ионизационным детектором («Цвет-106» и т.п.).
Мерные колбы на 25 и 100 мл, ГОСТ 1770-74.
Аппарат для встряхивания, ТУ 69-1-081-73.
Стеклянные пластинки, 15 х 15 см.
Пульверизатор стеклянный для обработки пластинок.
Камера для обработки пластинок, ТУ 10565-63.
Сушильный шкаф, ТУ 69-1-1411-76.
Делительная воронка на 500 мл, ГОСТ 100054-75.
Микрошприц емкостью 10 мкл МШ-10М.
Стеклянный водоструйный вакуумный насос, МРТУ 42961-64.
Колбы конические НШ, ГОСТ 1170-74.
2.4. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденными Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.79 за № 2051-79.
2.5. Подготовка к определению
2.5.1 Приготовление пластинок с тонким слоем силикагеля для ТСХ
35 г силикагеля КСК, просеянного через сито 100/120 меш, смешивают с 2 г сернокислого кальция и 90 мл дистиллированной воды в фарфоровой ступке или на аппарате для встряхивания в течение 15 минут. Около 10 г сорбционной массы наносят на стеклянную пластинку 15 х 15 см и, покачивая, равномерно распределяют по поверхности. Пластинки сушат на воздухе в горизонтальном положении при комнатной температуре 12 часов и затем активируют в сушильном шкафу при 190 °C в течение 30 минут. Хранят в эксикаторе над слоем хлористого кальция. При использовании для приготовления пластинок силикагеля ЛС 14 г этого силикагеля смешивают с 38 мл дистиллированной воды. На одну пластинку наносят 5 — 7 г сорбционной массы и далее поступают так, как это описано выше.
2.5.2 Приготовление стандартного раствора
Стандартный раствор АДХТ в ацетоне с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 10,0 мг вещества в мерной колбе на 100 мл.
2.5.3 Приготовление проявляющих реактивов для ТСХ
раствор № 1 — в мерную колбу на 100 мл помещают 0,4 г бромфенолового синего и доводят до метки дистиллированной водой;
раствор № 2 — в мерную колбу на 100 мл помещают 2 г. азотнокислого серебра и доводят до метки дистиллированной водой;
пластинку обрабатывают смесью (1:1) растворов № 1 и № 2 и затем 4-процентным водным раствором лимонной кислоты.
Проявляющие растворы при хранении в плотно закрытых склянках без доступа света годны для применения в течение месяца.
раствор № 1 — в мерную колбу на 25 мл помещают 0,25 г иодистого калия и доводят до метки дистиллированной водой;
раствор № 2 — 0,75 г растворимого крахмала заваривают в 25 мл дистиллированной воды и затем охлаждают;
пластинку обрабатывают смесью (1:1) растворов № 1 и № 2.
Проявляющий реактив готовят перед употреблением.
2.5.4 Построение градуировочного графика для определения АДХТ методом ГЖХ
Для построения градуировочного графика в пробы воды (250 мл) вносят 1,5; 2,5; 5,0 и 7,5 мкг АДХТ в виде раствора в ацетоне и далее осуществляют извлечение АДХТ из проб и хроматографирование так, как описано в п. 2.6.2. Хроматографирование одной пробы проводят дважды, измеряют на хроматограммах высоты пиков АДХТ и строят график зависимости высоты пика АДХТ от его содержания в воде. Полученные данные обрабатывают по методу наименьших квадратов и получают уравнение калибровочного графика в виде:
H — высота пика АДХТ на хроматограмме, мм;
X — содержание АДХТ в воде, мг/л;
A и B — коэффициенты, которые получают при обработке калибровочного графика по методу наименьших квадратов.
2.6. Описание определения
2.6.1 Тонкослойная хроматография
Пробу воды (250 мл) помещают в делительную воронку, доводят pH до 8 с помощью 1М водного раствора гидроксида натрия и трижды экстрагируют хлороформом (3 x 25 мл). Объединенный хлороформный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия (5 - 10 г) в течение 0,5 - 1 часа при периодическом перемешивании и удаляют растворитель на ротационном испарителе при температуре водяной бани 45 °C до объема ~ 1 мл. Остаток количественно наносят на хроматографическую пластинку с тонким слоем силикагеля (могут быть использованы пластинки, приготовленные в лабораторных условиях, и пластинки "Силуфол"). На эту же пластинку наносят стандартные количества (1 и 2 мкг) АДХТ в виде раствора в ацетоне и
проводят хроматографирование в системе растворителей этилацетат — хлороформ
(1:1) в хроматографической камере, насыщенной в течение 2 часов парами подвижных растворителей. Для насыщения стенки камеры обкладывают фильтровальной бумагой, которая пропитывается смесью подвижных растворителей. После окончания процесса хроматографирования пластинку извлекают из камеры и сушат на воздухе в вытяжном шкафу. Для обнаружения АДХТ пластинку обрабатывают смесью N 1 и N 2 (1:1) и затем 4-процентным водным раствором лимонной кислоты. АДХТ обнаруживается в виде синих пятен на желтом фоне с величиной R = 0,61 +/- 0,05.
f
Для повышения надежности идентификации АДХТ хроматографирование может быть также проведено в системе растворителей ацетон - бензол (3:2). Для обнаружения АДХТ пластинку предварительно помещают в эксикатор (камера для хлорирования) на 2 минуты, на дно которого наливают смесь (1:1) 3-процентного водного раствора марганцовокислого калия и 12-процентного
водного раствора хлористоводородной кислоты (камера насыщается парами хлора
через 5 - 10 минут после помещения в нее растворов марганцовокислого калия и хлористоводородной кислоты). Затем пластинку вынимают из эксикатора, помещают в вытяжной шкаф на 40 минут для удаления паров хлора и обрабатывают проявляющим реактивом N 2. АДХТ обнаруживается в виде синих пятен на светло-голубом фоне с величиной R = 0,82 +/- 0,05 (пластинки
f
«Силуфол»).
2.6.2 Газожидкостная хроматография
Извлечение АДХТ из пробы воды проводят так, как это описано в п. 2.6.1. Объединенный хлороформный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия (5 — 10 г) в течение 0,5 — 1 часа при периодическом перемешивании и удаляют растворитель на ротационном испарителе при температуре водяной бани 45 °C до объема ~ 0,5 мл. Остаток растворителя удаляют потоком теплого воздуха досуха и сухой остаток количественно переносят ацетоном (~ 1 мл) в градуированную центрифужную пробирку. Потоком теплого воздуха упаривают содержимое пробирки до 0,2 мл и вводят в хроматограф 2 мкл.
Условия хроматографирования (хроматограф "Цвет-106" с пламенным ионизационным детектором): стеклянная колонка (длина 1 м, внутренний диаметр 3 мм), заполненная хромосорбом W-HP с 3% OV-17; температура термостата колонки и испарителя 150 и 260 °C соответственно; скорость газа-носителя (азот особой чистоты) через колонку 40 мл/мин., шкала
-12
электрометра 10 x 10 А, скорость диаграммной ленты потенциометра 240 мм/час. Время удерживания АДХТ в этих условиях 6 минут. Для повышения надежности идентификации АДХТ может быть использовано хроматографическое определение на колонке (длина 2 м, внутренний диаметр 3 мм), заполненной хроматоном N-AW с 5% XE-60. Температура термостата колонки 180 °C, остальные условия хроматографирования те же. Время удерживания АДХТ в этом
случае 4 минуты 26 сек.
Содержание АДХТ в воде определяют с помощью предварительно построенного калибровочного графика.
2.7. Обработка результатов анализа
Содержание АДХТ в пробах при определении с помощью тонкослойной хроматографии рассчитывают по формуле:
5
10 x A
X — содержание в пробе АДХТ, мг/л;
A — количество АДХТ в анализируемом объеме пробы, мг;
P — процент определения, % (см. табл.).
Количественную оценку АДХТ на хроматограммах проводят путем сравнения интенсивности окраски и площадей пятен пробы и стандартных растворов или по величине площади пятен по формуле:
A - A
2 1
A = A - ------- x (S - S),
2 S - S 2
2 1
A, S — количество (мкг) и площадь (кв. мм) пятна АДХТ в анализируемой пробе;
A , A , S и S - количество (мкг) и площадь (кв. мм) пятен стандартных 1 2 1 2
растворов АДХТ с большим и меньшим содержанием по сравнению с анализируемой пробой.
Величину площади пятен определяют, накладывая на пластинку прозрачную бумагу или кальку; очерчивают контур пятна, переносят его на миллиметровку и подсчитывают число кв. мм, входящих в контур.
Содержание АДХТ в пробах (X, мг/л) при определении с помощью газожидкостной хроматографии рассчитывают по формуле:
H - A
H — высота пика АДХТ на хроматограмме анализируемой пробы, мм (среднее значение из двух параллельных определений).
3. Требования безопасности
Соблюдаются требования безопасности, рекомендуемые при работе в химических лабораториях.