Методические указания по определению препарата «Комби» смеси карбофурана с беномилом и ТМТД в растениях сахарной свеклы тонкослойной хроматографией
Актуально на 01.11.2026.
Как цитировать: "Методические указания по определению препарата "Комби" смеси карбофурана с беномилом и ТМТД в растениях сахарной свеклы тонкослойной хроматографией". 6135-91. https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-6135-91
(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 № 6135-91)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299).
29 июля 1991 г. № 6135-91
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ПРЕПАРАТА «КОМБИ» СМЕСИ КАРБОФУРАНА С БЕНОМИЛОМ И ТМТД В РАСТЕНИЯХ САХАРНОЙ СВЕКЛЫ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ
Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. Краткая характеристика препарата
Препарат «Комби», или Фурадан-300, содержащий 27,2% карбофурана, 5,22% беномила, 5,22% тирама (ТМТД) и 62,36% инертного наполнителя, используется для предпосевной обработки семян с нормой расхода 30 л/т.
Карбофуран /N-метил-O-2,2-диметилбензо/2,3-дигидрофурил-7/карбамат/.
| / 3 |
|---|
\\ / \ / \
│ O CH O H 3 М.м. 221,3.
O=C-N
\
CH
3
Эмпирическая формула C H O N. 12 15 3
Белое кристаллическое вещество. Т. пл. 150 — 152 °C. Растворимость в воде 700 мг/л, в ацетоне — 150 г/кг, в ацетонитриле — 140 г/кг, в бензоле — 40 г/кг, в диметилсульфоксиде — 270 г/кг, в циклогексане — 90 г/кг. При нагревании со щелочами и кислотами быстро разлагается. Спиртовыми растворами щелочей разрушается даже при комнатной температуре.
В странах Западной Европы МДУ в шампиньонах - 0,8 мг/кг, в кукурузе - 0,1 мг/кг. Токсичен для пчел и других полезных насекомых. СК для рыб 0,28 мг/л (при экспозиции 96 ч).
50
Акарицид, нематоцид, системный инсектицид.
Беномил /N-/1-бутилкарбамоилбензимидазолил-2/-O- метилкарбамат/.
NCONHC H
// \ ───── 4 9
| // 3 М.м. 290,3. |
|---|
Эмпирическая формула C H O N . 14 18 3 4
Синонимы: бенлат, бенлейт, узген, фунгицид 1991, фундазол.
Белое кристаллическое вещество со слабым запахом. Т. пл. 290 °C. Практически нерастворим в воде и в большинстве органических растворителей. Нелетуч.
ПДК в воздухе рабочей зоны 0,01 мг/куб. м, в воде 0,5 мг/л. В СССР МДУ в сахарной свекле — 0,1 мг/кг, пшенице — 0,5 мг/кг, фруктах, огурцах, томатах и капусте — 0,5 мг/кг.
Для теплокровных животных и человека малотоксичен. Слаботоксичен для пчел, птиц и рыб.
Основной продукт разложения беномила — N-метил-/бензимидазолил-2/-карбамат (БМК).
БМК также обладает фунгицидным действием.
Эмпирическая формула C H O N . 9 9 2 3
Кристаллическое вещество от серого или голубого до темно-коричневого цвета. Т. пл. 307 — 312 °C. Плохо растворим в воде и многих органических растворителях, растворим в кислотах.
Беномил и БМК — системные фунгициды.
Тирам (ТМТД) /тетраметилтиурамдисульфид/.
[(CH ) NCS] М.м. 240,4. 3 2\\ 2
S
Эмпирическая формула C H № S . 6 12 2 4
Кристаллическое вещество белого или кремового цвета. Хорошо растворим в хлороформе, ацетоне, хуже в этаноле, диэтиловом эфире, практически нерастворим в воде.
Протравитель семян, используемый для защиты растений от заболеваний, инфекционное начало которых распространяется семенами или находится в почве.
ПДК в воздухе рабочей зоны 0,01 мг/куб. м. В СССР остаточные количества в продуктах питания не допускаются.
2. Методика определения смеси
2.1. Основные положения
Метод основан на извлечении смеси пестицидов из исследуемой пробы подкисленной водой с pH 3, очистке перераспределением пестицидов в хлороформ с последующим определением в тонком слое сорбента.
2.1.2 Метрологическая характеристика метода
ДИАПАЗОН ОПРЕДЕЛЯЕМЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ
| Пестицид | Проявитель | Диапазон определяемых концентраций, мкг | Цвет пятен |
|---|---|---|---|
| Карбофуран | № 1 А, Б А, В А, Г | 0,1 — 3 0,1 — 3 0,1 — 3 | бордовые желтые синие |
| ТМТД | № 1 А, Б Г № 2 | 0,5 — 3 0,5 — 3 0,05 — 10 | бурые оранжевые голубые |
| Беномил, БМК | № 2 | 0,5 — 10 | голубые |
| ТМТД | № 3 | 0,05 — 5 | светло-зеленые |
| Карбофуран | № 4 | 0,1 — 5 | сине-фиолетовые |
| ТМТД | № 4 | 0,5 — 10 | белые |
| Беномил, БМК | № 4 | 1,0 — 10 | сине-фиолетовые |
| Карбофуран | УФ-свет | 0,05 — 10 | сиреневые |
| ТМТД | УФ-свет | 0,05 — 10 | сиреневые |
| Беномил, БМК | УФ-свет | 0,5 — 10 | сиреневые |
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА, N = 5, P = 0,95
| Анализируемая проба | Пестицид | Предел обнаружения, мг/кг | Среднее значение определения, % | Стандартное отклонение, % | Доверительный интервал, +/- % |
|---|---|---|---|---|---|
| Семена | Карбофуран Беномил БМК ТМТД | 0,50 1,00 1,00 0,25 | 95,0 83,5 82,4 92,0 | 1,8 4,7 4,9 3,7 | 2,4 7,1 7,5 3,2 |
| Зеленая | Карбофуран | 0,01 | 81,8 | 4,9 | 7,6 |
| масса | Беномил БМК ТМТД | 0,10 0,10 0,01 | 79,0 79,9 80,8 | 7,6 6,5 5,2 | 15,9 10,2 8,1 |
| Корне- | Карбофуран | 0,01 | 91,8 | 3,7 | 5,1 |
| плоды | Беномил БМК ТМТД | 0,10 0,10 0,01 | 79,5 82,5 91,5 | 6,1 5,2 6,5 | 9,7 8,0 9,0 |
2.1.3 Избирательность метода
2.2. Реактивы и растворы
Этиловый спирт ректификат 96-процентный, ГОСТ 5962-81.
Кислота хлористоводородная, ГОСТ 3118-77.
Кислота уксусная, ГОСТ 22300-76.
Кислота лимонная, осч, ГОСТ 908-79.
Натрий сернокислый, безводный, чда, ГОСТ 4266-76.
Кали едкое, хч, ГОСТ 24363-80.
Перманганат калия, чда, ГОСТ 20490-75.
п-Нитроанилин, чда, ТУ 6-09-258-70.
Натрий нитрит, хч, ГОСТ 4197-74.
Хлорная медь, ч, ГОСТ 4967 -48.
Азотнокислое серебро, чда, ГОСТ 1277-81.
Бромфеноловый синий, чда, ТУ 6-09-4530-77.
о-Толидин, хч, ТУ 6-09-2232-75.
Соли диазонил: прочный синий Б, ГОСТ 11632-65; прочный красный Б, ГОСТ 11827-79; прочный голубой Б, ГОСТ 11632-80.
Приготовление стандартных растворов
Для сравнения готовят основные растворы: 0,3-процентный препарат «Комби», стандартные растворы карбофурана, беномила, БМК и ТМТД, содержащие 1000 мкг/мл, в ацетоне.
Рабочие стандартные растворы, содержащие 500 мкг/мл и 50 мкг/мл, готовят соответствующим разбавлением ацетоном основных растворов.
Хранят растворы в холодильнике в склянках с притертыми пробками: карбофуран — 6 месяцев, БМК — 30 дней, ТМТД — 10 дней, беномил — 10 дней, 0,3-процентный раствор препарата «Комби» — 10 дней.
Реагент А. 15-процентный KOH в спиртово-водном растворе (15 г KOH растворяют в 60 мл этилового спирта и 40 мл воды).
Реагент Б. Смешивают перед употреблением 0,1-процентный раствор п-нитроанилина в 0,1 н растворе хлористоводородной кислоты и 4-процентный водный раствор нитрита натрия в соотношении 10:1.
Реагент В. 0,0,1-процентный раствор солей диазония в ацетоне.
Реагент Г. 0,5-процентный раствор 2,6-дибром-N-хлорхинонимина в гексане с последующим нагреванием 3 — 5 мин. при 110 — 140 °C.
Пластинку опрыскивают реагентом А, подсушивают на воздухе и опрыскивают реагентом Б, или В, или Г.
Опрыскивают пластинку смесью (1:1) 0,05-процентного раствора бромфенолового синего в 50-процентном этиловом спирте с 1-процентным раствором AgNO в ацетоне. Через 1 - 2 минуты
3
опрыскивают 1-процентным раствором лимонной кислоты или 10-процентным раствором уксусной кислоты.
№ 3. 1-процентный раствор CuCl в этиловом спирте. 2
№ 4. Галогенирование, о-толидин, йодид калия
Пластинку обрабатывают парами хлора, проветривают и опрыскивают проявляющим реагентом.
Раствор для хлорирования. Смешивают равные объемы 3-процентного раствора перманганата калия и хлористоводородной кислоты.
Проявляющий реагент. 0,2 г о-толидина растворяют в 2 мл уксусной кислоты, 0,8 г йодида калия растворяют в 2 мл дистиллированной воды, смешивают растворы и доводят водой до 200 мл.
2.3. Приборы и посуда
Весы аналитические 2 класса, ГОСТ 19491-74.
Мерные колбы на 100 мл, ГОСТ 1770-74.
Водяная баня, ТУ 46-22-603-75.
Микропипетки, ГОСТ 20292-74.
Аппарат для встряхивания, ТУ 6921-1084-78.
Круглодонные колбы, ГОСТ 25336-82, вместимостью 250 мл.
Пластинки для тонкослойной хроматографии «Силуфол» (ЧССР).
Пульверизатор стеклянный для обработки пластинок, ГОСТ 25336-82.
Камера для хроматографирования, ГОСТ 25336-82.
Колбы плоскодонные со шлифом, ГОСТ 25336-82, вместимостью 500 мл.
Воронка делительная, ГОСТ 25336-82, на 500 мл.
Вакуумный насос, ГОСТ 10696-75.
2.4. Подготовка к определению
2.4.1 Отбор проб
Пробы для анализа отбираются в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденными Минздравом СССР за № 2051-79 21.08.1979.
2.5. Проведение определения
2.5.1 Экстракция
Растения сахарной свеклы и корнеплоды. 20 — 50 г образца измельчают, помещают в коническую колбу и заливают 100 — 150 мг подкисленной воды с pH 3. Экстракцию проводят на аппарате для встряхивания в течение часа. Экстракт переносят в делительную воронку и проводят реэкстракцию трижды хлороформом (100, 50, 50 мл) по 5 мин. Полученный экстракт фильтруют через воронку с бумажным фильтром и 15 г безводного сернокислого натрия в круглодонную колбу, отгоняют хлороформ на водяной бане или ротационном испарителе до 0,5 — 1 мл. Остаток переносят в мерную пробирку, доводят до объема 1 — 1,5 мл хлороформом, делят на две равные части и наносят на пластинку с левой и правой стороны на расстоянии 1,5 см от краев. Рядом наносят стандартные растворы «Комби» или смесей препаратов.
Семена. 0,4 г семян (20 штук) помещают в коническую колбу на 50 мл, заливают 20 мл хлороформа. Встряхивают в течение часа. Фильтруют через безводный сернокислый натрий, отгоняют хлороформ на ротационном испарителе до 0,5 — 1 мл. Переносят в пробирку, доводят объем до 2 мл, делят на две равные части и проводят анализ, как при определении в растениях.
Семена, обработанные «Комби». Для проверки качества обработки семян берут 0,2 г семян (10 штук), заливают 10 мл хлороформа. Экстрагируют в течение часа. Сливают хлороформ в мерную пробирку, измеряют объем, доводят до 10 мл. Аликвотную часть 0,05 — 0,1 мл наносят в две точки в правой и левой части пластинки. Дальше проводят определение, как в растениях.
2.5.2 Хроматографирование
Пластинку помещают в хроматографическую камеру с подвижной фазой из смеси гексан — ацетон (3:2) или хлороформа. Когда растворитель поднимется на 10 см, пластинку вынимают и сушат на воздухе.
2.5.3 Проявление пластинок
Пластинку просматривают под УФ-светом. Светящиеся пятна карбофурана, ТМТД, беномила и БМК обводят простым карандашом. Для дополнительной идентификации соединений можно использовать проявитель № 4 (см. табл. 1). При использовании других проявителей поступают следующим образом. Правую часть пластинки закрывают фильтровальной бумагой. Левую проявляют, используя проявитель № 1. Затем фильтровальной бумагой закрывают левую, а правую обрабатывают проявителем № 2. Для обнаружения ТМТД можно использовать специфичный проявитель № 3.
Величина R в подвижной фазе гексан — ацетон (3:2); f
карбофурана - 0,45; беномила - 0,65; БМК - 0,25; ТМТД - 0,50; в хлороформе: карбофурана - 0,25; беномила - 0,45; БМК - 0,15;
ТМТД — 0,55.
2.6. Обработка результатов анализа
Количество препаратов на пластинке определяют по площади пятен, сравнивая с пятнами стандартных растворов, по формуле:
P x S
1 x
P = ------- мкг,
x S
1
P и P - содержание препарата в исследуемом и стандартном x 1
растворе в мкг;
S и S - площади соответствующих пятен, кв. мм. x 1
Количество препаратов в мг/кг рассчитывают по формуле:
1000 x P x V
A — масса анализируемой пробы, г;
2.7. Требования безопасности
Необходимо выполнять все требования безопасности работы с токсичными веществами, кислотами и щелочами.