Временные методические указания по определению пиретроидов (перметрина, циперметрина, фенвалерата и декаметрина) в молоке и мясе животных методом газожидкостной хроматографии
(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 № 6093-91)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ включен в Перечень нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения (утв. Россельхознадзором 30.07.2009 № 02-03-48/563).
29 июля 1991 г. № 6093-91
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ПИРЕТРОИДОВ (ПЕРМЕТРИНА, ЦИПЕРМЕТРИНА, ФЕНВАЛЕРАТА И ДЕКАМЕТРИНА) В МОЛОКЕ И МЯСЕ ЖИВОТНЫХ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
(Дополнение № 2473-81 от 22 октября 1981 г.)
Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. Краткая характеристика пестицидов
1.1. Перметрин (анометрин Н, амбуш, стомозан, мухотоксин, персан, корсар, пермасект) — 3-феноксибензил-(1RS)-цис,транс-3-(2,2-дихлорвинил)-2,2-диметилциклопропанкарбоксилат.
//\ //\ Cl H H // \ // \
<pre class="legal-pre"> \C=C───┴────┴── C─O-CH -│ ││-O-│ ││
/ │ \ / ││ 2 \\ / \\ /</pre>
Cl H \/ O \\/ \\/
CH /\CH
3 3 Эмпирическая формула C H Cl O . 21 20 2 3
В чистом виде в зависимости от соотношения изомеров - вязкая жидкость, воскообразная масса или кристаллы со слабым запахом и температурой плавления 34 - 39 °C. Температура кипения 200 °C при 0,01 мм рт. ст. (1,3 Па) и 220 °C при 6,05 мм рт. ст., давление
-7
паров - 3,7 - 4,5 х 10 мм, летучесть - 0,007 мг/куб. м, показатель преломления - ПД - 1,5627, плотность - 1,190 - 1,272
25
г/куб. см при 20 °C. Растворимость в воде — 1 - 10 мг/л, гексане и
этиленгликоле - до 30 г/л. Хорошо растворим в метаноле, этаноле, циклогексане, ацетоне, хлороформе, диэтиловом эфире. Быстрее
гидролизуется в щелочной и сильнокислой среде.
ЛД в зависимости от препаративной формы — 450 — 4000 мг/кг, 50 ОБУВ в воздухе рабочей зоны — 3 мг/куб. м, в атмосферном воздухе — 0,002 мг/куб. м, в воде водоемов — 0,05 мг/л. Нормативы МДУ в продуктах питания находятся в стадии утверждения.
1.2 Циперметрин (цинометрин, фендона, цимбуш, альфаметрин,
эктомин, ренигейд, беррикейд, фастак) — 3-фенокси-(R,S)-2- цианобензил-(1R,S)-цис,транс-3-(2,2-дихлорвинил)-2,2-диметилцикло- пропанкарбоксилат.
C=C──┴────┴─── C ──O──CH── // \ ──O── // \
Cl/ │ \ / ││ │ │ ││ │ ││
H \/ O CN \\ / \\ /
/\
CH CH
3 3
Эмпирическая формула C H O NCl .
22 19 3 2
Чистое вещество в зависимости от соотношения изомеров - вязкая жидкость, воскообразная масса или кристаллы. Температура плавления 1R цис S + 1S цис R изомеров - 80,5 °C. Давление паров -6 -9 1,29 х 10 - 1,3 х 10 мм рт. ст. при 20 °C. Плотность 1,12 г/куб. см при 20 °C. Растворимость в воде - 0,5 - 1, гексане - 142, ксилоле - 315 мг/л. Хорошо растворим в низкомолекулярных кетонах, спиртах, хлорсодержащих углеводах. Гидролизуется в
щелочной среде.
ЛД в зависимости от препаративной формы 79 — 5000 мг/кг. 50 ОБУВ в воздухе рабочей зоны — 0,3 мг/куб. м, в атмосферном воздухе
- 0,0005 мг/куб. м, в воде водоемов — 0,03 мг/л.
Нормативы МДУ в продуктах питания находятся в стадии утверждения.
1.3. Фенвалерат (сумицидин, бельмарк, OM S-200) — 3-фенокси-(R,S)-цианобензил-(R,S)-2-(4-хлорфенил)-3-метилбутират.
Cl_// \\___CH__C __O__CH__// \\__O__// \\ | \ ___ / / | | \ ___ / \ ___ / |
| --- | --- | --- |
/\
CH CH
3 3
Эмпирическая формула C H O NCl.
25 22 3
Кристаллы с температурой плавления 23 °C. Давление паров — -7
2,3 х 10 мм рт. ст. В воде не растворим. Растворим в гексане. Хорошо растворим в ацетоне, ксилоле и низкомолекулярных
одноатомных спиртах. Гидролизуется в щелочной среде.
ЛД при оральном введении для крыс 451 мг/кг, ОБУВ в воздухе 50 рабочей зоны — 0,3 мг/куб. м, в атмосферном воздухе — 0,0003 мг/ куб. м, в воде водоемов — 0,03 мг/л.
1.4 Декаметрин (дельтаметрин, децис, к-отрин, бутокс) -
3-фенокси-(S)-а-цианобензил-(1R,3R)-цис,-3-(2,2-дибромвинил)-2,2- диметилциклопропанкарбоксилат.
CH CH 3\/ 3 Br H /\ O
<pre class="legal-pre"> \ │ / \ ││ / \\ // \
C=C──┬───────┬──C ─O─CH─ ││ │──O──│ ││
/ H H │ \ // \\ /</pre>
Br CN Эмпирическая формула C H O Br . 22 19 3 2
Белое кристаллическое вещество без запаха с температурой плавления 98 — 101 °C. Давление паров 1,5 х 10-8 мм рт. ст. при 25 °C. В воде не растворим, в этаноле — 16, ксилоле — 250, этилацетате — 350 и ацетоне — 500 г/л. Термически устойчив. Гидролизуется в щелочной среде.
ЛД — 67 мг/кг. ОБУВ в воздухе рабочей зоны — 0,1 мг/куб. м, 50 в атмосферном воздухе — 0,0001 мг/куб. м, в воде водоемов — 0,005 мг/л.
2. Методика определения пиретроидов методом газожидкостной хроматографии в молоке и мясе
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Метод основан на извлечении пиретроидов из молока и мяса ацетоном или его 85-процентным раствором с последующей переэкстракцией в смесь гексана с диэтиловым эфиром и концентрировании экстракта. Идентификация (по временам удерживания) и количественное определение (по сумме изомеров) осуществляются на газовом хроматографе с детектором по захвату электронов. Специальную очистку экстрактов в системе гексан — ацетонитрил проводят при значительном содержании жира в пробах, а адсорбционно-хроматографическую на колонке с силикагелем при повышенном загрязнении проб фоновыми хлорорганическими соединениями и продуктами их трансформации.
2.1.2 Метрологическая характеристика метода
Минимально детектируемое количество: перметрина — 0,5; циперметрина — 0,2; фенвалерата — 0,5; декаметрина — 0,5 нг.
Нижний предел определения в молоке и мясе: перметрина — 0,01; циперметрина — 0,005; фенвалерата — 0,01; декаметрина — 0,01 мг/кг/л.
Доверительные интервалы среднего значения при p = 0,95 и n = 6:
а) в молоке для перметрина — 58 +/- 9,8, циперметрина — 8,1 +/- 9,8; фенвалерата — 78 +/- 10,5 и декаметрина — 74 +/- 10,4%;
б) в мясе для перметрина — 53 +/- 10,8; циперметрина — 76 +/- 10,8; фенвалерата — 78 +/- 11,0 и декаметрина — 72 +/- 11,7%.
2.1.3 Избирательность метода
Фосфор- и хлорорганические пестициды не мешают определению.
2.2. Реактивы и растворы
Ацетонитрил ч, ТУ 6-09-3534-87.
Диэтиловый эфир хч, ГОСТ 6265-79.
Натрий сернокислый безводный, ГОСТ 4166-76.
Бутиловый эфир уксусной кислоты ч, ГОСТ 22300-76.
Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.
Насадка 30% OV-17 на инертоне-супер (0,125 — 0,160 мм) (ЧССР).
Силикагель, 0,1 — 0,4 мм (ЧССР).
Этиловый спирт — ректификат, ГОСТ 5962-67.
Смесь гексана с диэтиловым эфиром в объемном соотношении 1:1.
Стандартный раствор пиретроидов в гексане с содержанием 1 нг в 1 мкл (срок хранения 1 год при герметичной упаковке).
2.3. Приборы и посуда
Аппарат для встряхивания АВУ-1, ТУ 64-11081-83.
Фарфоровые выпарительные чашки, ГОСТ 9147-80, на 25 и 100 мл.
Воронки делительные, ГОСТ 25336-82, на 100 и 250 мл.
Колбы мерные, ГОСТ 1770-74, на 100 мл.
Воронки химические, ГОСТ 25336-82, ТУ 25-11-917-76.
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-76.
Газовый хроматограф с детектором по захвату электронов — тип «Цвет», «Газохром» и др.
Колбы конические, ГОСТ 25336-82, на 300 мл.
Микрошприц МШ-10М, ТУ 2.833.106.
Воронка фильтрующая ЕФ-1-20-ПОР-100, ГОСТ 25336-82.
Пипетки на 1 мл, ГОСТ 20292-74.
2.4. Подготовка к определению
2.4.1 Подготовка газохроматографической колонки
Стеклянную колонку длиной 500 мм с внутренним диаметром 3 мм заполняют одним из принятых способов готовой набивкой инертон-супер с 3% OV-17. Колонку кондиционируют при 260 °C, продувая газ-носитель со скоростью 60 мл/мин. в течение 8 часов.
2.4.2 Отбор и подготовка проб
Отбор проб производят в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб для определения микроколичеств пестицидов в сельскохозяйственной продукции, продуктах питания и объектах окружающей среды» (N 2051-79, утверждены Минздравом СССР 21.08.79).
2.5. Проведение определения
2.5.1 Экстракция
Молоко. В колбу с притертой пробкой объемом не менее 300 мл заливают 50 мл молока анализируемой пробы и 150 мл ацетона. Содержимое интенсивно перемешивают, встряхивая колбу не менее 5 минут, и помещают в холодильник при температуре 0 — +3 °C на 6 — 24 часа. Затем нерастворенные компоненты молока отделяют от ацетонового раствора центрифугированием или фильтрованием. Осадок размельчают с помощью размельчителя тканей или шпателем в 25 мл 85-процентного ацетона и переносят в колбу, использованную для первоначальной экстракции. В эту же колбу приливают еще 75 мл 85-процентного ацетона, которым предварительно обмывают оборудование, примененное для размельчения осадка. Колбу с содержимым встряхивают в течение 10 минут и помещают в холодильник на 2 часа. Ацетоновый раствор отделяют от нерастворенных компонентов фильтрованием или центрифугированием. Ацетоновые экстракты объединяют, добавляют 10 мл бутилового эфира уксусной кислоты и испаряют ацетон из экстракта на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °C. Отгонку после испарения ацетона сразу же прекращают, не допуская испарения воды и бутилового эфира уксусной кислоты. Остаток экстракта переносят в делительную воронку, приливают 30 мл смеси диэтилового эфира с гексаном (1:1) и экстрагируют пиретроиды, встряхивая воронку в течение 5 минут. Слоям дают разделиться. При медленном разделении слоев добавляют при легком встряхивании 5 — 10 мл этилового спирта. Нижний слой сливают в другую делительную воронку и повторяют экстракцию 30 мл смеси диэтилового эфира с гексаном (1:1). Гексанэфирную фракцию объединяют, сушат безводным сульфатом натрия, переносят в выпарительную чашку и испаряют досуха под тягой в вытяжном шкафу. Экстракт периодически подливают так, чтобы его количество за все время испарения не превышало одной трети общего объема чашки. Допускается подогрев экстракта до 30 °C, чем удается предотвратить конденсацию воды на стенках чашек и ускорить испарение растворителей.
Мясо. Пробы предварительно пропускают через мясорубку или размельчают ножницами. Отбирают навеску 25 г и гомогенизируют в 25 мл 85-процентного водного раствора ацетона. К гомогенату приливают еще 50 мл раствора ацетона, встряхивают или перемешивают в течение 10 минут и помещают в холодильник при температуре 0 — +3 °C на 6 — 24 часа. Дальнейший ход анализа такой же, как и при определении пиретроидов в молоке. Сухой остаток экстрактов из молока или мяса растворяют в 1 мл бутилового эфира уксусной кислоты. В испаритель вводят 2 — 6 мкл этого раствора.
Если полученные экстракты оказались недостаточно чистыми, что получается при значительном содержании жира или фоновых хлорорганических пестицидов в пробе, и количественное определение пиретроидов затруднено, проводят очистку с ацетонитрилом и (или) на колонке с силикагелем. Для этого конечные экстракты переносят в выпарительные чашки и испаряют досуха.
2.5.2 Очистка экстракта
Очистка с ацетонитрилом. К сухому остатку для его набухания приливают 1 мл ацетона и через 2 — 3 минуты 5 мл гексана. Покачивая чашку, тщательно обмывают ее поверхность и сливают раствор в делительную воронку. Чашку еще раз обмывают 5 мл гексана и сливают раствор в ту же воронку. Приливают 10 мл ацетонитрила и интенсивно встряхивают 2 минуты. Слоям дают разделиться. Нижний (ацетонитрильный) слой сливают в другую воронку. А из гексанового раствора экстракцию повторяют еще дважды, каждый раз применяя по 5 мл ацетонитрила. К объединенному ацетонитрильному раствору приливают 40 мл дистиллированной воды и 30 мл смеси диэтилового эфира с гексаном (1:1). Встряхивают воронку в течение 2 минут. Слоям дают разделиться. Нижний слой сливают в другую воронку, приливают 30 мл той смеси и экстракцию повторяют. Гексанэфирный экстракт объединяют, сушат безводным сульфатом натрия, переносят в выпарительную чашку и испаряют растворителем досуха.
Очистка на колонке с силикагелем. Очистку экстракта проводят на специальном устройстве (см. рис. — не приводится). Для его подготовки пробирку отсоединяют. В воронку засыпают 4,0 — 4,5 куб. см силикагеля, приливают 5 мл гексана, тщательно перемешивают содержимое стеклянной глазной палочкой и, включая вакуум, отсасывают гексан из воронки в колбу. Силикагель дополнительно промывают 10 мл смеси диэтилового эфира с гексаном (1:1) порциями по 5 мл и в заключение — 5 мл гексана. После этого колонка готова к работе.
Сухой остаток экстракта смывают с выпарительной чашки 15 мл гексана порциями по 5 мл. Каждую порцию смыва (5 мл) сливают в воронку устройства и перемешивают с силикагелем в течение 3 минут. Не прекращая перемешивания, включают вакуум и медленно по каплям отсасывают гексан в колбу. Так поступают с каждой порцией смыва. Силикагель промывают 20 мл гексана порциями по 5 мл. Но в этом случае гексан полностью из колонки не удаляют. Как только мениск гексана достигает верхнего уровня силикагеля, вакуум отключают, добавляют следующую порцию растворителя, слегка помешивая стеклянной палочкой, выравнивают слой силикагеля, а затем включают вакуум. Так поступают и с последней порцией растворителя. Затем с помощью резиновой муфты закрепляют пробирку, вводя в нее стебель воронки. Пиретроиды элюируют 12 мл смеси диэтилового эфира с гексаном (1:1), постоянно подливая смесь, и полностью отсасывают элюат в пробирку. Элюат переносят в выпарительную чашку и испаряют почти досуха. Остаток растворяют в 1 мл бутилового эфира уксусной кислоты. В испаритель хроматографа вводят 2 — 6 мкл этого раствора.
2.5.3 Условия хроматографирования
а) хроматограф "Цвет-106" с детектором по захвату электронов. Стеклянная колонка размером 500 x 2 мм с насадкой инертон-супер (0,125 - 0,160 мм) с 3% OV-17. Температурные режимы: термостат колонки - 250, испарителя - 280 и детектора - 270 °C. Скорость газа-носителя (азота) - 28 мл/мин., на продувку детектора - 120
-10
мг/мин. Шкала электрометра — 1 x 10 А. Скорость протяжки ленты
- 200 мм/час. Линейный диапазон детектирования — 0,2 — 10 нг. Абсолютное время удерживания: перметрина — 2,52 мин., циперметрина
- 3,20 мин., фенвалерата — 4,66 мин., декаметрина — 6,33 мин.
б) хроматограф "Цвет-550" с детектором постоянной скорости рекомбинации. Стеклянная колонка размером 500 x 3 мм с насадкой
инертон-супер (0,125 — 0,160 мм) с 3% OV-17. Температурные режимы:
термостат колонки - 260, испарителя - 270, детектора - 280 °C. Скорость газа-носителя (азота) - 60 мл/мин. Шкала электрометра -
-9
8 x 10 . Скорость протяжки ленты самописца - 200 мм/час. Диапазон определяемых концентраций 0,2 - 10 нг. Абсолютное время
удерживания: перметрина — 2,14, циперметрина — 3,05, фенвалерата — 4,42 и декаметрина — 6,88 мин.
В качестве альтернативной может быть использована стеклянная колонка размером 500 x 3 мм с насадкой хроматон N-AW-HDMC (0,125 — 0,160 мм) с 5% SE-30.
2.6. Обработка результатов анализа
Количественное определение проводят методом сравнения со стандартом по площади пика анализируемого соединения в пробе и известном количестве стандарта. Площадь пика находят одним из общепринятых методов. Содержание пиретроидов в анализируемом материале (C) в мг/кг (л) находят по формуле:
S x C x V x 100
р ст
S x V x P x K
ст а
S — площадь пика анализируемой пробы, кв. мм; р
S — площадь пика стандарта, кв. мм; ст
C — содержание пиретроидов в стандарте, нг; ст
V — объем раствора, из которого отбирают аликвоту для инъекции, мл;
V — объем аликвоты, которую вводят в хроматограф, мкл; а
P — навеска или объем анализируемого образца, г или мл;
3. Требования безопасности
Соблюдаются требования безопасности, рекомендуемые при работе с легковоспламеняющимися растворителями, взрывоопасными и высокотоксичными веществами.