Методические указания по определению синтетических пиретроидов (амбуш, децис, рипкорд, сумицидин) в растениях, почве, воде водоемов методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии

(утв. Минздравом СССР 22.10.1981 № 2473-81)

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ СИНТЕТИЧЕСКИХ ПИРЕТРОИДОВ (АМБУШ, ДЕЦИС, РИПКОРД, СУМИЦИДИН) В РАСТЕНИЯХ, ПОЧВЕ, ВОДЕ ВОДОЕМОВ МЕТОДАМИ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ И ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>

---

<*> Разработаны: Д.Б. Гиренко, М.А. Клисенко (ВНИИГИНТОКС); Т.М. Петровой, Е.Г. Красниковой (ВИЗР); А.Ф. Скурьят, Е.М. Бунякиной (БелНИИЗР).

Краткая характеристика препаратов приведена в таблице 70.

Таблица 70

ХАРАКТЕРИСТИКА ПИРЕТРОИДОВ

Общепринятое название (торговое название)	Бруттоформула	Химическое название	Молекулярная масса	Давление паров, Па	ДСД, мг/кг	МДУ в картофеле, мг/кг
Перметрин	C H O Cl	+/-Цис,транс-3-(2,2-	391,28	-5 4,5 x 10	0,035	0,05
(амбуш) Циперметрин	21 20 3 2 C H O Cl	дихлорвинил)-2,2- диметилциклопропанкарбоновой кислоты 3-феноксибензиловый эфир (1RS)-Цис,транс-3-	416	(25 °C) -6 5,1 x 10	0,003	0,01
(рипкорд, цимбуш) Фенвалерат	22 19 3 2 C H O NCl	(дихлорвинил)-2,2- диметилциклопропанкарбоновой-1 кислоты (RS)-3-феноксиальфа-цианобензиловый эфир (RS)-2-Метил-(4-	405	(70 °C) -5 3,1 x 10	0,034	0,01
(сумицидин) Декаметрин	25 22 3 C H Br NO	хлорфенил)бутановой кислоты (RS)-альфациано-3-феноксибензиловый эфир (1R)-Цис-3-(2,2-	505,2	-8 1,5 x 10	0,003	0,01
(децис, дельтаметрин)	22 19 2 3	дибромовинил)-2,2- диметилциклопропанкарбоновой кислоты (S)-3-фенокси-альфацианобензиловый эфир		(25 °С)

Препараты нерастворимы в воде. Хорошо растворяются в ацетоне, спиртах, хлороформе. ПДК в воде водоемов составляет: рипкорда — 0,07 мг/л, сумицидина — 0,05 мг/л.

Принцип метода. Метод основан на определении синтетических пиретроидов методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии после извлечения препаратов из анализируемой пробы органическими растворителями (хлороформ, смесь гексана и ацетона, 50-процентный водный раствор ацетона) с последующей очисткой экстрактов перераспределением между двумя несмешивающимися жидкостями и (или) на колонках с адсорбентами.

Метрологическая характеристика метода. Диапазон определяемых концентраций 0,01 — 0,04 мг/кг (мг/л). Остальные параметры приведены в таблице 71.

Таблица 71

СИНТЕТИЧЕСКИХ ПИРЕТРОИДОВ

Препарат	Анализируемый объект	Среднее значение определения, %		Относительное стандартное отклонение		Доверительный интервал среднего при n = 5, p = 0,95, %
		ТСХ	ГЖХ	ТСХ	ГЖХ	ТСХ	ГЖХ
Амбуш	Вода Почва Картофель	75 +/- 1,7 66 +/- 2,2 70 +/- 2,3	78 +/- 4,4 67 +/- 3,6 70 +/- 3,9	2,3 3,6 3,2	5,7 5,2 5,7	+/- 5,2 +/- 9,3 +/- 8,1	+/- 6,5 +/- 6,0 +/- 6,5
Рипкорд	Вода Почва Картофель	80 +/- 2,0 71 +/- 2,2 75 +/- 2,4	82 +/- 3,5 72 +/- 3,8 77 +/- 3,3	2,5 3,1 3,2	4,3 5,3 4,3	+/- 6,9 +/- 7,0 +/- 8,2	+/- 5,0 +/- 6,1 +/- 5,0
Сумицидин	Вода Почва Картофель	72 +/- 2,4 68 +/- 2,1 70 +/- 2,6	80 +/- 1,7 70 +/- 2,1 75 +/- 1,7	3,1 3,2 3,7	1,7 3,0 2,2	+/- 8,0 +/- 8,7 +/- 9,5	+/- 2,0 +/- 3,5 +/- 3,0
Децис	Вода Почва Картофель	80 +/- 1,8 72 +/- 2,5 75 +/- 2,7	85,6 +/- 2,7 79,0 +/- 2,9 82,3 +/- 2,3	2,2 3,4 3,6	3,2 3,7 2,8	+/- 5,0 +/- 8,1 +/- 9,0	+/- 8,2 +/- 9,5 +/- 7,2

Избирательность метода. Хлорсодержащие пестициды определению не мешают.

Реактивы и растворы. Для экстракции и очистки экстрактов. Ацетон ч. Диэтиловый эфир х.ч. н-Гексан ч., х.ч. Сульфат натрия безводный свежепрокаленный. Хлороформ ч. Ацетонитрил ч. Бензол ч.д.а. Хлорид кальция х.ч., 0,05-процентный раствор. Оксид алюминия для хроматографии II степени активности. Хлорид натрия ч.

Для метода ТСХ. Пластинки «Силуфол» УФ . Аммиак ч., 25-процентный 254 водный раствор. Нитрат серебра. Фосфорно-молибденовая кислота ч.д.а. Спирт этиловый 96-процентный.

Проявляющие реагенты: № 1 — 0,5 г нитрата серебра растворяют в 5 мл дистиллированной воды, прибавляют 7 мл 25-процентного раствора аммиака и доводят объем раствора до 100 мл ацетоном; № 2 — 10-процентная фосфорно-молибденовая кислота в этиловом спирте.

Для метода ГЖХ. Неподвижные фазы: 5% SE-30 на хроматоне N-AW-HDMC (0,16 — 0,20 мм); 3% OV-1 на хроматоне N-AW-HDMS (0,125 — 0,160 мм); 5% ПМС-100 на хроматоне N-AW (0,100 — 0,125 мм). Азот особой чистоты.

Стандартные растворы: № 1 — основной стандартный раствор пиретроидов в гексане (500 мкг/мл). Хранят в холодильнике в течение 6 мес.; № 2 — стандартный раствор пиретроидов в гексане или бензоле (10 мкг/мл). Хранят в холодильнике в течение 2 недель.

Приборы и посуда. Колбы: конические на 50 и 250 мл; круглодонные со шлифами для отгонки растворителей; мерные. Делительные воронки на 50; 100 и 250 мл. Воронки. Колонки для адсорбционной хроматографии длиной 30 см с диаметром 15 мм. Аппарат для встряхивания колб. Прибор для отгонки растворителей (ротационный вакуумный испаритель). Камера хроматографическая. Микропипетки на 0,1 — 0,2 мл. Хроматоскоп (хемоскоп). Пульверизатор стеклянный. Микрошприцы на 10 мкл. Газовый хроматограф «Цвет», «Газохром» с ДЭЗ (ДПР).

Подготовка к анализу. Приготовление хроматографической колонки. В колонку помещают ватный тампон, последовательно 3 — 4 г сульфата натрия, 5 г оксида алюминия, 2 г безводного сульфата натрия.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. Пробу воды (500 мл) помещают в делительную воронку, добавляют 10 г хлорида натрия, хорошо перемешивают и трижды экстрагируют хлороформом порциями по 50 мл. Пропускают экстракт через слой сульфата натрия и упаривают до объема 0,3 — 0,5 мл при температуре бани не выше 50 °C, а затем досуха на воздухе. Остаток в колбе растворяют в 1 мл гексана и хроматографируют (ТСХ и ГЖХ).

Измельченную пробу растительного материала (овощи, фрукты, зеленая масса) массой 25 г помещают в коническую колбу, заливают 50 мл 50-процентного водного ацетона, встряхивают в течение 1 ч. Экстракцию повторяют трижды. Экстракты фильтруют через бумажный фильтр, объединяют и помещают на 1 ч в холодильник. При выпадении осадка пробу следует отфильтровать вторично. Объединенный фильтрат переносят в делительную воронку и экстрагируют пиретроиды 30 мл гексана. Встряхивают 5 — 10 мин., отделяют гексан, а водный раствор встряхивают еще дважды с 30 мл гексана. Объединяют гексановую фракцию, сушат безводным сульфатом натрия и концентрируют до объема 0,3 — 0,5 мл на ротационном испарителе при температуре бани не выше 50 °C, затем на воздухе досуха. Остаток в колбе растворяют в 1 мл гексана и хроматографируют (ГЖХ и ТСХ). Если конечные экстракты получились недостаточно чистые, их дополнительно очищают с помощью ацетонитрила или методом колоночной хроматографии. В первом случае к сухому остатку в колбу добавляют 3 — 5 мл ацетонитрила, встряхивают 1 — 2 мин. Переносят ацетонитрил количественно (смывая колбу 1 — 2 мл свежего ацетонитрила) в делительную воронку и приливают 50 мл 2-процентного раствора хлорида натрия. Пиретроиды дважды экстрагируют гексаном порциями по 30 мл, встряхивая по 1 — 2 мин. Пиретроиды переходят в гексан, коэкстрактивные вещества остаются в водном растворе. Объединенный гексановый экстракт сушат безводным сульфатом натрия, упаривают досуха. Остаток растворяют в 1 мл гексана и хроматографируют.

Для очистки экстракта подготовленную колонку промывают 30 — 40 мл хлороформа или бензола, элюат отбрасывают. Вносят в колонку остаток пробы после упаривания (если растворитель был удален досуха, остаток растворяют в 1 — 2 мл гексана) порциями по 1 — 2 мл гексана, дают раствору впитаться и элюируют пиретроиды 50 мл бензола. Элюат концентрируют досуха. Остаток растворяют в 1 мл гексана и хроматографируют.

Пробу почвы (20 г) помещают в коническую колбу, заливают 50 мл смеси ацетона и хлорида кальция (1:1), встряхивают в течение 1 ч. Экстракцию повторяют трижды. Экстракты фильтруют, объединяют, переносят в делительную воронку и экстрагируют пиретроиды 30 мл гексана. Встряхивают 5 — 10 мин., отделяют гексан, а водный раствор встряхивают еще дважды с 30 мл гексана. Объединяют гексановую фракцию, сушат безводным сульфатом натрия и концентрируют досуха. Остаток в колбе растворяют в 1 мл гексана и хроматографируют. Если конечные экстракты получились недостаточно чистыми, их дополнительно очищают с помощью ацетонитрила или методом колоночной хроматографии (так же, как при анализе растительного материала).

    Условия хроматографирования (метод ГЖХ).  В хроматограф последовательно
вводят  по  5  мкл   стандартного   раствора   N 2   и   пробы.  Носитель -

                                                                 -12

хроматон N-AW-HDMC (0,16 — 0,20 мм). Шкала электрометра 20 x 10 А. Линейный диапазон детектирования 3 — 15 нг. Нижний предел определения (нг): амбуш — 10, рипкорд — 3, сумицидин — 5, децис — 5. Время удерживания пиретроидов приведено в таблице 72.

Таблица 72

УСЛОВИЯХ ХРОМАТОГРАФИРОВАНИЯ

Препарат	Неподвижная фаза
	5% SE-30 <*>	3% OV-1 <**>
Амбуш Рипкорд Сумицидин Децис	1 мин. 24 с 2 мин. 30 с 3 мин. 06 с 3 мин. 36 с	1 мин. 57 с 2 мин. 20 с — 3 мин. 30 с

---

<*> Длина колонки 0,5 м. Температура (°C): испарителя — 240, колонки — 220, детектора — 250. Скорость потока азота 60 мл/мин.

<**> Длина колонки 1 м. Температура (°C): испарителя — 270, детектора — 280. Скорость потока азота 30 мл/мин.

Для идентификации амбуша (перметрина) может быть использована колонка длиной 1 м с 5% ПМС-100 на хроматоне N-AW. Температура испарителя и детектора 270 °C, колонки — 240 °C. Скорость азота 60 мл/мин. Время удерживания амбуша 7 мин. 30 с.

Тонкослойная хроматография. Экстракт после определения методом ГЖХ упаривают до 0,2 — 0,3 мл и количественно наносят на хроматографическую пластинку «Силуфол». Помещают пластинку в камеру, содержащую смесь растворителей гексан-ацетон (4:1). После развития хроматограмм и высушивания на воздухе пластинку обрабатывают одним из проявляющих реагентов.

При обработке раствором нитрата серебра после облучения УФ-светом в течение 5 мин. пиретроиды проявляются в виде серо-черных пятен. Нижний предел определения рипкорда 3 мкг, амбуша, дециса, сумицидина — 5 мкг.

При обработке 10-процентным раствором фосфорно-молибденовой кислоты в этиловом спирте нижний предел определения составляет 3 — 10 мкг.

Хроматограммы на пластинках «Силуфол» УФ до опрыскивания 254

проявляющими  реагентами  можно  просматривать  в  хроматоскопе. В УФ-свете
(лямбда  =  254 нм)  пиретроиды  обнаруживаются  в  виде  темных  пятен  на
флуоресцирующем фоне. Предел обнаружения - 3 мкг.  Величины R   пиретроидов

                                                         f

на   пластинках   "Силуфол"   при   использовании  в  качестве   подвижного
растворителя  смеси  гексана с ацетоном  (4:1)  равны:  для  амбуша - 0,61,

рипкорда — 0,44, сумицидина — 0,34, дециса — 0,45.

Обработка результатов анализа. При использовании метода ГЖХ количественное определение проводят путем сравнения пиков пробы и стандарта (при условии, что пики близки по величине и определение ведется в диапазоне линейности детектора). Количественную оценку пиков хроматограммы проводят по площади пика, рассчитывая ее как произведение высоты пика на ширину, измеренную на половине высоты.

Количество препарата в пробе (X, мг/кг или мг/л) рассчитывают по формуле:

                                C  V S
                                 ст 2

X = ------, S V P ст 1

где:

C — количество препарата во введенном в хроматограф стандартном ст растворе, нг;

S — площадь пика стандартного раствора пиретроида, введенного в ст хроматограф, кв. мм;

S — площадь пика исследуемого раствора, кв. мм;

V — объем экстракта, введенный в хроматограф, мкл; 1

V — объем анализируемого экстракта после упаривания, мл; 2

P — навеска или объем анализируемой пробы, г или мл.

При использовании метода ТСХ содержание препарата в пробе (X, мг/кг или мг/л) рассчитывают по формуле:

                                  A

X = -, P

где:

A — количество препарата, найденное путем сравнения размера или интенсивности пятен пробы и стандартного раствора, мкг;

---