ОФС.1.8.1.0006.18. Общая фармакопейная статья. Факторы свертывания крови человека (генно-инженерные, рекомбинантные)

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 № 749)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том II»)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Факторы свертывания крови человека (генно-инженерные, рекомбинантные)	ОФС.1.8.1.0006.18
	Вводится впервые

Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на рекомбинантные факторы свертывания крови (РФСК) человека, полученные с использованием технологии рекомбинантной ДНК.

Рекомбинантный фактор свертывания крови (РФСК) представляет собой лиофилизированный препарат гликопротеинов, обладающий биологической активностью фактора свертывания крови, выделенного из плазмы и предназначенный для заместительной терапии при заболеваниях, связанных с нарушениями системы свертывания крови.

Серьезным осложнением заместительной терапии является выработка ингибирующих антител. На фоне данной проблемы существенным достоинством РФСК является возможность разработки модифицированных белков, сохраняющих активность эндогенных факторов, но отличных от них по структуре, что позволяет существенно снизить индукцию ингибирующих антител. В качестве других преимуществ РФСК по сравнению с плазменными факторами можно отметить высокую активность, чистоту, безопасность, независимость производства от донорской плазмы.

РФСК представлены препаратами на основе VII рекомбинантного активированного фактора свертывания крови (rFVIIa), VIII рекомбинантного фактора свертывания крови (rFVIII) и IX рекомбинантного активированного фактора свертывания крови (rFIXa).

Структура белковой молекулы РФСК может как совпадать, так и отличаться от структуры аналогичного фактора свертывания крови, выделенного из плазмы, при условии сохранения биологической активности препарата. Аминокислотная последовательность и значимые посттрансляционные модификации молекулы РФСК должны быть полностью охарактеризованы. На основании структуры белковой молекулы должна быть установлена принадлежность препарата к имеющимся международным непатентованным наименованиям или, в случае разработки оригинальной структуры, ей должно быть присвоено отдельное международное непатентованное наименование.

Факторы свертывания крови VII, VIII и IX, циркулирующие в плазме, представляют собой двухцепочечные (в активированной форме) гликопротеины с доменной структурой и сложным профилем гликозилирования. Молекула фактора свертывания крови VII состоит из 406 аминокислотных остатков с молекулярной массой около 50 кДа, молекула фактора свертывания крови VIII состоит из 2332 аминокислотных остатков с молекулярной массой от 170 до 280 кДа, молекула фактора свертывания крови IX — из 381 аминокислотного остатка с молекулярной массой около 57 кДа.

Рекомбинантные факторы свертывания крови представлены рядом модифицированных форм, получивших следующие международные непатентованные наименования: РФСК VIIa (rFVIIa) — Эптаког альфа; РФСК VIII (rFVIII) — Октоког альфа, Мороктоког альфа, Симоктоког альфа, Бероктоког альфа и Туроктоког альфа; РФСК IXa (rFIXa) — Нонаког альфа.

ПРОИЗВОДСТВО

Производство РФСК осуществляется с применением технологии рекомбинантной ДНК и должно проводиться в условиях соблюдения правил надлежащей производственной практики.

Экспрессирующая конструкция, штамм-продуцент, производство лекарственного средства, включая банки штаммов-продуцентов, должны быть охарактеризованы в объеме и в соответствии с требованиями, изложенными в ОФС «Лекарственные средства, получаемые методами рекомбинантных ДНК».

Основными клеточными линиями при производстве РФСК являются эукариотические клетки млекопитающих. Производство основано на системе банков клеток-продуцентов — Главного банка клеток (ГБК) и Рабочего банка клеток (РБК).

Используемые в процессе производства РФСК клетки и материалы биологического происхождения должны быть охарактеризованы в объеме и в соответствии с требованиями, изложенными в ОФС «Требования к клеточным культурам — субстратам производства биологических лекарственных препаратах» и ОФС «Лекарственные средства, получаемые методами рекомбинантных ДНК».

Очищенный белок должен быть охарактеризован в соответствии с ОФС «Лекарственные средства, получаемые методами рекомбинантных ДНК».

ИСПЫТАНИЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ СУБСТАНЦИИ

Качество препарата контролируется с помощью одного или более стандартных образцов, аттестованных в установленном порядке или с использованием соответствующих международных стандартных образцов.

СТАНДАРТНЫЕ ОБРАЗЦЫ

В качестве стандартного образца может быть использована типичная серия готового продукта, охарактеризованная по всем показателям качества, а при необходимости — и по дополнительным показателям, аттестованная в установленном порядке по соответствующему международному стандартному образцу при наличии последнего.

Испытания фармацевтической субстанции или конечного балка биологической фармацевтической субстанции для хранения должны проводиться в соответствии с требованиями ОФС «Лекарственные средства, получаемые методами рекомбинантных ДНК», если не обосновано иное.

Описание. Субстанция (конечный балк) должна выдерживать требования, определенные в фармакопейной статье или нормативной документации. Определение проводят визуально.

Подлинность. Подлинность должна быть подтверждена с помощью комплекса методов, позволяющих специфически идентифицировать РФСК с использованием стандартных образцов. Субстанция (конечный балк) должна обладать биологической активностью соответствующего фактора свертывания крови, выделенного из плазмы, и определяться обоснованным методом, например, коагулометрическим методом или методом хромогенного субстрата.

Должна быть подтверждена структура белковой молекулы и ее посттрансляционные модификации с применением пептидного картирования, карбогидратного картирования, а также дополнительных физико-химических методов исследования: электрофорезом в полиакриламидном геле, изоэлектрическим фокусированием, обращенно-фазовой и эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографией, методом масс-спектрометрического анализа и др.

Испытания проводят любой пригодной методикой, например, методикой, основанной на методах, изложенных в ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография», ОФС «Хроматография», ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой области», ОФС «Определение белка» ОФС «Капиллярный электофорез», ОФС «Электрофорез в полиакриламидном геле», ОФС «Определение подлинности и чистоты биологических лекарственных препаратов методом вестерн-блот» и др., если применимо. Выбор дополнительных методов должен быть обоснован. Структура молекулы и ее гликопрофиль должны соответствовать стандартному образцу. Поскольку посттрансляционная модификация, заключающаяся в гликозилировании белка, может быть стандартизована только в рамках одной конкретной технологии, гликопрофиль может быть индивидуальным. Для подтверждения качества субстанции необходимо установление существующих различий профиля гликозилировании относительно международного стандартного образца или оригинального препарата, подробное их описание и предоставление сведений в регистрационном досье об отсутствии влияния данных отличий на эффективность препарата (сохранение активности соответствующего ФСК) и безопасности препарата (на стадии доклинических исследований). Для оценки данного показателя необходимо наличие внутреннего стандартного образца с установленным профилем гликозилировании и характеристикой референсных пиков.

Описание конкретной методики должно быть приведено в фармакопейной статье или нормативной документации на фармацевтическую субстанцию. Методики должны быть валидированы.

Прозрачность. Субстанция (конечный балк) должна выдерживать требования, определенные в фармакопейной статье или нормативной документации. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Прозрачность и степень мутности жидкостей».

Цветность. Субстанция (конечный балк) должна выдерживать требования, определенные в фармакопейной статье или нормативной документации. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Степень окраски жидкостей».

pH. Приводится допустимый интервал значений pH. Субстанция (конечный балк) должна выдерживать требования, определенные в фармакопейной статье или нормативной документации. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС «Ионометрия».

Количественное определение. Количественное определение должно состоять из количественного определения активности РФСК, количественного определения целевого белка и кальция (если применимо). Рассчитанная активность должна быть не менее 80% и не более 125% от номинальной активности. Доверительные интервалы (P = 0,95) должны быть не менее 80% и не более 120% рассчитанной активности. Содержание белка должно соответствовать нормам, определенным в фармакопейной статье или нормативной документации на субстанцию. Испытания проводят любой пригодной методикой, например, методикой, основанной на методах, изложенных в ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография», ОФС «Хроматография», ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой области», ОФС «Определение белка» или в соответствии с валидированной методикой, приведенной в фармакопейной статье или нормативной документации на фармацевтическую субстанцию. Выбор метода определения белка должен быть обоснован. Количественное определение может проводиться одновременно с подтверждением подлинности.

Количественное определение кальция, если нет других указаний в нормативной документации, проводят методом с достаточной чувствительностью, например, методом атомно-абсорбционной спектрометрии в соответствии с ОФС «Атомно-абсорбционная спектрометрия».

Чистота. Родственные соединения. Содержание родственных соединений и посторонних примесей в субстанции (конечном балке) оценивают обоснованными методами, например, методом обращенно-фазовой или эксклюзионной ВЭЖХ или методом электрофореза. Испытания проводят любой пригодной методикой, например, методикой, основанной на методах, изложенных в ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография», ОФС «Хроматография», ОФС «Электрофорез в полиакриламидном геле». Комплекс методов должен зависеть от структурных особенностей целевого белка и максимально полно отражать их специфику. Нормативные требования и методика испытаний должны быть приведены в фармакопейной статье или нормативной документации на субстанцию.

Чистота. Посторонние примеси. Остаточные белки клетки-хозяина. Содержание белков штамма-продуцента должно быть не более 200 нг на мг белка. Остаточные белки клетки-хозяина могут быть определены иммунохимическими методами (например, радиоиммунологическим или ИФА). Методика должна быть приведена в нормативной документации на субстанцию.

Данное испытание обязательно для фармацевтической субстанции, вносимой в государственный реестр лекарственных средств.

В случае если используемая для производства фармацевтическая субстанция не предназначена для реализации и включения в государственный реестр лекарственных средств РФ, испытания проводятся с использованием конечного балка, в нормативной документации на лекарственный препарат приводится указание о гарантии качества ЛС по данному показателю.

Остаточная ДНК штамма-продуцента. Приводят нормы по содержанию остаточной ДНК штамма-продуцента. Возможно применение готовых наборов реагентов с использованием валидированной методики на основе молекулярной гибридизации, полимеразной цепной реакции, иммуноферментного анализа.

Содержание остаточных белков клеток-хозяина и ДНК штамма-продуцента не должно превышать значений, установленных в фармакопейной статье или в нормативной документации, и показателей, определенных международными требованиями к данной группе препаратов.

Оценка показателя обязательна для фармацевтической субстанции, вносимой в государственный реестр лекарственных средств.

В случае если используемая для производства фармацевтическая субстанция не предназначена для реализации и включения в государственный реестр лекарственных средств РФ, испытания проводятся с использованием балка субстанции для хранения, в нормативной документации на лекарственный препарат приводится указание о гарантии качества ЛС по данному показателю и предел допустимого содержания на 1 дозу препарата.

Остаточные количества гетерологичных примесей белковой природы (бычий сывороточный альбумин). Остаточные количества гетерологичного белка, наличие которого может быть обусловлено технологий производства, должно быть определено количественно пригодным методом, например, методом иммуноферментного анализа. Сведения о пределе содержания гетерологичных примесей и стабильности производства в отношении показателя должны быть приведены в досье на фармацевтическую субстанцию.

В случае если используемая для производства фармацевтическая субстанция не предназначена для реализации и внесения в государственный реестр лекарственных средств РФ, оценку показателя проводят с использованием конечного балка. Сведения о пределе содержания гетерологичных примесей и стабильности производства в отношении показателя должны быть приведены в досье на препарат.

Микробиологическая чистота. Субстанция (конечный балк) до стерилизующей фильтрации должна выдерживать требования, предъявляемые к фармацевтическим субстанциям, предназначенным для приготовления лекарственных форм для парентерального применения. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

Стерильность. Субстанция (конечный балк) должна быть стерильной, если хранится после стерилизующей фильтрации. Испытания стерильности проводят методом прямого посева или методом мембранной фильтрации в соответствии с ОФС «Стерильность».

Бактериальные эндотоксины. Указывают допустимое содержание бактериальных эндотоксинов и метод определения. Содержание бактериальных эндотоксинов должно соответствовать нормам, определенным в фармакопейной статье или нормативной документации на субстанцию, или указано для конечного балка в досье на препарат. Испытание проводят в соответствии с ОФС «Бактериальные эндотоксины» по указанному в нормативной документации методу.

Пирогенность (если применимо). Субстанция должна выдерживать требования, определенные в фармакопейной статье или нормативной документации. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Пирогенность».

Аномальная токсичность. Данное испытание обязательно для фармацевтической субстанции, вносимой в государственный реестр лекарственных средств. Субстанция должна быть нетоксична. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Аномальная токсичность», тест для иммунобиологических лекарственных препаратов (испытание на белых мышах), если нет других указаний в нормативной документации.

Время получения восстановленного раствора субстанции лиофилизированной (растворимость).

Указывают время растворения препарата, приводят описание методики с указанием применяемого растворителя, его объема и условий растворения.

Потеря в массе при высушивании или содержание воды. Указывают требования к потере в массе при высушивании или содержанию воды в субстанции лиофилизированной. Определение проводят в соответствии с ОФС «Потеря в массе при высушивании» или ОФС «Определение воды методом Фишера».

Производственный штамм. Указывают штамм-продуцент, его морфологические особенности и др., регулярность контроля основных показателей.

Транспортирование, хранение. В герметичном контейнере при температуре, указанной в нормативной документации. Для замороженного раствора недопустимо повторное замораживание и оттаивание.

ИСПЫТАНИЯ ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА

Качество препарата контролируется с помощью одного или более стандартных образцов, аттестованных в установленном порядке или с использованием соответствующих международных стандартных образцов.

СТАНДАРТНЫЕ ОБРАЗЦЫ

В качестве стандартного образца может быть использована типичная серия готового продукта, охарактеризованная по всем показателям качества, а при необходимости и по дополнительным показателям, аттестованная в установленном порядке по соответствующему международному стандартному образцу при наличии последнего.

Лекарственные препараты на основе РФСК выпускают в форме лиофилизата для приготовления раствора для инъекций.

Требования к испытаниям лекарственных препаратов РФСК регламентируются нижеприведенными показателями, а также требованиями ОФС «Лекарственные средства, получаемые методами рекомбинантных ДНК» и ОФС «Лекарственные формы для парентерального применения».

Если технология производства РФСК построена по принципу непрерывного цикла без получения субстанции как самостоятельного продукта или отдельного этана производства, то испытания, предусмотренные для субстанции, должны проводиться для конечного балка.

Описание. Приводится описание свойств лекарственной формы препарата. Лекарственный препарат должен выдерживать требования, определенные в фармакопейной статье или нормативной документации.

Подлинность. Подлинность подтверждается комплексом (2 — 3) взаимодополняющих методов (один из которых — определение специфической активности), позволяющих специфически идентифицировать РФСК с использованием стандартных образцов. Для подтверждения структуры белка могут быть использованы следующие физико-химические методы: изоэлектрическое фокусирование, обращенно-фазовая и эксклюзионная высокоэффективная жидкостная хроматография и другие методы с доказанной специфичностью.

Выбор методов оценки подлинности должен быть обоснован. Методики должны быть приведены в фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственный препарат. Для испытаний могут использоваться методики, основанные на методах, изложенных в ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография», ОФС «Хроматография», ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой области», ОФС «Определение белка» ОФС «Капиллярный электофорез», ОФС «Электрофорез в полиакриламидном геле», ОФС «Определение подлинности и чистоты биологических лекарственных препаратов методом вестерн-блот» и др., если применимо.

Время растворения (Растворимость).

Указывают допустимую норму. Определяют визуальным методом. При необходимости описывают методику.

Прозрачность. Указывают требования по прозрачности раствора. Лекарственный препарат должен выдерживать требования, определенные в фармакопейной статье или нормативной документации. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Прозрачность и степень мутности жидкостей».

Цветность. Указывают требования по цветности раствора. Лекарственный препарат должен выдерживать требования, определенные в фармакопейной статье или нормативной документации. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Степень окраски жидкостей».

pH. Приводится допустимый интервал значений pH. Лекарственный препарат должен соответствовать нормам, определенным в фармакопейной статье или нормативной документации. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС «Ионометрия».

Герметичность (если применимо в готовом препарате). Лекарственный препарат должен выдерживать требования, определенные в фармакопейной статье или нормативной документации. Методика испытания должна быть приведена в нормативной документации.

Осмолярность (Осмоляльность) (если применимо). Лекарственный препарат должен выдерживать требования, определенные в фармакопейной статье или нормативной документации. Определение проводят в соответствии с ОФС «Осмолярность».

Механические включения. Видимые механические включения должны отсутствовать.

Определение невидимых частиц проводят в соответствии с ОФС «Невидимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения». В нормативной документации указывают допустимое содержание невидимых механических включений и метод(ы), используемый(е) для проведения испытания.

Чистота. Родственные соединения и посторонние примеси (если применимо). Чистота препарата оценивается комплексом взаимодополняющих методов (не менее 2 — 3), выбор которых должен быть обоснован. Требования по содержанию родственных соединений и посторонних примесей должны гарантировать безопасность и эффективность лекарственного препарата.

Содержание родственных соединений может определяться с помощью электрофореза в полиакриламидном геле в восстанавливающих и невосстанавливающих условиях; изоэлектрофокусирования; обращено-фазовой и эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографии и других методов с доказанной специфичностью и точностью.

Испытания проводят в соответствии с ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография», ОФС «Электрофорез в полиакриламидном геле», ОФС «Изоэлектрическое фокусирование».

Методики испытания и соответствующие требования должны быть приведены в нормативной документации на лекарственный препарат.

Производитель лекарственного препарата должен гарантировать, что содержание посторонних примесей (остаточных белков клетки-хозяина, ДНК штамма-продуцента и других возможных гетерологичных примесей) не превышает установленную норму. Норма должна быть обоснована и соответствовать международным требованиям к чистоте препаратов, предназначенных для длительного введения.

Стерильность. Лекарственный препарат должен быть стерильным. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Стерильность» методом прямого посева или мембранной фильтрации. В нормативной документации должно быть указание о наличии/отсутствии антимикробного действия препарата в условиях проведения испытания». В случае проведения испытания методом прямого посева должны быть указаны питательные среды для проведения испытаний, соотношение количества испытуемого препарата и питательной среды, условия инкубации. Для метода мембранной фильтрации при необходимости должна быть приведена методика пробоподготовки препарата к испытанию с указанием промывочной жидкости и количества промывок мембраны.

Бактериальные эндотоксины. Указывают допустимое содержание бактериальных эндотоксинов и метод(ы) определения. Содержание бактериальных эндотоксинов должно соответствовать нормам, определенным в фармакопейной статье или нормативной документации на препарат. Испытание проводят в соответствии с ОФС «Бактериальные эндотоксины» по указанному в нормативной документации методу.

Аномальная токсичность. Лекарственный препарат должен быть нетоксичным. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Аномальная токсичность», тест для иммунобиологических лекарственных препаратов (испытание на белых мышах).

Количественное определение. Количественное определение должно состоять из количественного определения активности РФСК и количественного определения целевого белка. Рассчитанная активность должна быть не менее 80% и не более 125% номинальной. Доверительные интервалы (P = 0,95) должны быть не менее 80% и не более 120% рассчитанной активности. Содержание белка должно соответствовать нормам, определенным в фармакопейной статье или нормативной документации на субстанцию. Испытания проводят любым пригодным методом, например, в соответствии с ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография», ОФС «Хроматография», ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой области», ОФС «Определение белка» или в соответствии с валидированной методикой, приведенной в фармакопейной статье или нормативной документации. Выбор метода определения белка должен быть обоснован. Количественное определение может проводиться одновременно с подтверждением подлинности и специфической активности.

Вещества, вносимые в препарат. Устанавливают норму содержания и определяют количественное содержание веществ, используемых в качестве стабилизаторов, любым пригодным фармакопейным методом или с помощью валидированной методики производителя.

Упаковка и Маркировка. В соответствии с ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственных средств» и ОФС «Лекарственные формы для парентерального применения».

Транспортирование, хранение. В защищенном от света месте при температуре от 2 до 8 °C в системе «холодовой цепи», не допускается замораживание. В соответствии с ОФС «Лекарственные формы для парентерального применения» и ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственных средств». Контролируемые условия, обоснованные исследованиями по стабильности препарата, указывают в фармакопейной статье или нормативной документации.

---