ОФС.1.7.1.0017.18. Общая фармакопейная статья. Генно-инженерные препараты инсулина человека

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 № 749)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том II»)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Генно-инженерные препараты инсулина человека	ОФС.1.7.1.0017.18 Вводится впервые

Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на генно-инженерные препараты инсулина человека, полученные с использованием технологии рекомбинантной ДНК из генетически стабильных и безопасных микроорганизмов.

Требования, изложенные в настоящей общей фармакопейной статье, не распространяются на бычий инсулин, свиной инсулин и инсулин полусинтетический.

Инсулин представляет собой двухцепочечный пептид, имеющий структуру антидиабетического гормона, вырабатываемого поджелудочной железой человека.

Требования на генно-инженерные препараты инсулина человека, могут быть дополнены с учетом специфических свойств лекарственного средства и технологии его производства.

ПРОИЗВОДСТВО

Производство инсулина осуществляется с применением технологии рекомбинантной ДНК и должно проводиться в условиях соблюдения правил надлежащей производственной практики и в соответствии с требованиями, изложенными в ОФС «Лекарственные средства, получаемые методами рекомбинантных ДНК».

В качестве клеток-хозяина для создания штамма-продуцента используются бактерии (Escherichia coli) или грибы (Saccharomyces cerevisiae или Pichia pastoris). Производство основано на системе банков клеток-продуцентов — Главного банка клеток (ГБК) и Рабочего банка клеток (РБК).

Схема производственного процесса генно-инженерных препаратов инсулина, как правило, включает:

1. Получение посевного материала штамма-продуцента.

2. Биосинтез рекомбинантного белка (РБ) (препроинсулина):

• ферментация (культивирование продуцента);
• сепарирование (получение биомассы);
• дезинтеграция клеточной суспензии;
• центрифугирование (выделение и отмывка телец включения).

3. Выделение и очистка РБ (препроинсулина).

4. Солюбилизация телец включения и восстановление (денатурация) РБ:

• ренатурация (рефолдинг) РБ;
• хроматографическая очистка проинсулина.

5. Ферментативное расщепление проинсулина.

6. Ступени очистки инсулина, каждая из которых включает несколько стадий очистки, например:

• хроматографическая очистка инсулина 1
• хроматографическая очистка инсулина 2
• хроматографическая очистка инсулина 3

7. Получение кристаллического инсулина:

• кристаллизация и отмывка;
• высушивание.

8. Получение лекарственной формы.

Все этапы процесса производства должны быть валидированы, в том числе, эффективность каждого этапа очистки в отношении удаления и/или инактивации посторонних агентов и примесей, источником которых могут быть штамм-продуцент (ДНК), примеси, связанные с процессом производства, например, гетерологичных белков (иммуногенные примеси, компоненты питательных сред, иммуносорбенты для афинной хроматографии и пр.). На всех этапах производства должно контролироваться качество всех полупродуктов и продуктов в соответствии с установленными требованиями или спецификациями.

Экспрессирующая конструкция, штамм-продуцент, производство лекарственного средства, включая банки штаммов-продуцентов, должны быть, охарактеризованы в объеме и в соответствии с требованиями, изложенными в ОФС «Лекарственные средства, получаемые методами рекомбинантных ДНК».

При изменениях производственного процесса, представляются доказательства сопоставимости продуктов до и после внесения изменений. Изменения не должны оказывать влияние на качество инсулина и/или стабильность и воспроизводимость процесса производства.

ИСПЫТАНИЯ

ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ СУБСТАНЦИЯ

Требования к испытаниям фармацевтических субстанций инсулина регламентируются нижеприведенными показателями, а также требованиями ОФС «Лекарственные средства, получаемые методами рекомбинантных ДНК».

Описание. Белый или почти белый порошок. Определение проводят визуально.

Подлинность. Подлинность подтверждается методом ВЭЖХ с использованием стандартного образца (пептидным картированием, идентификацией основного вещества), а также определением биоидентичности.

Испытания проводят в соответствии с ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография» и ОФС «Пептидное картирование», ОФС «Биологическое испытание инсулина».

Методики должны быть приведены в фармакопейной статье или нормативной документации на субстанцию.

Растворимость. Указывают не менее трех растворителей субстанции (например, вода, хлороформ или этанол, разбавленные растворы минеральных кислот и щелочей). Концентрации используемых растворов кислот и щелочей должны быть определенны в фармакопейной статье или нормативной документации. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Растворимость».

Прозрачность. Раствор должен быть прозрачным или степень опалесценции не должна превышать эталон I. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Прозрачность и степень мутности жидкостей».

Цветность. Раствор должен быть бесцветным. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Степень окраски жидкостей».

Вода или Потеря в массе при высушивании. Предельно допустимое содержание воды и навеску субстанции, в которой проводят определение, а также методику определения, указывают в фармакопейной статье или нормативной документации. Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение воды» или ОФС «Потеря в массе при высушивании».

Чистота. Родственные соединения и посторонние примеси. Содержание родственных соединений и посторонних примесей определяться методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в соответствии с ОФС «Хроматография», ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография», а также другими физико-химическими методами.

Методики должны быть приведены в фармакопейной статье или нормативной документации на субстанцию.

В зависимости от вида соединения определяют:

• содержание высокомолекулярных белков (примеси): уровень которых не должен превышать 1,0%. Испытания проводят методом эксклюзионной хроматографии;
• содержание родственных соединений (А21-дезамидоинсулин и другие родственные белки, установленной структуры). Уровень А21-дезамидоинсулина и родственных белков установленной структуры нормируется индивидуально. Содержание А21-дезамидоинсулина не должно превышать 2,0%; родственных белков установленной структуры — не должно превышать 1,0%. Содержание А21-дезамидоинсулина и родственных белков установленной структуры также может нормироваться суммарно. При этом их суммарный уровень не должен превышать 2,0%. Испытание проводят методом обращенно-фазовой ВЭЖХ;
• посторонние примеси (нормированию подлежит содержание единичная примесь и сумма примесей, при этом содержания А21-дезамидоинсулина и родственных белков установленной структуры не учитываются). Испытание проводят методом обращенно-фазовой ВЭЖХ.

Уровень содержания примесей и родственных соединений нормируется в фармакопейной статье или нормативной документации на субстанцию.

Сульфатная зола. Не более 10,0%. Испытание проводят в соответствие с методикой определения, приведенной в фармакопейной статье или нормативной документации на субстанцию.

Цинк. Не более 1,0% в пересчете на сухое вещество. Испытание проводят методом атомной абсорбционной спектрометрии в соответствие с ОФС «Атомная абсорбция» или иным валидированным методом.

Методика определения, приводится в фармакопейной статье или нормативной документации на субстанцию.

Проинсулин. Не более 10 ppm. Испытание проводят в соответствие с методикой определения, приведенной в фармакопейной статье или нормативной документации на субстанцию.

Контроль содержания проинсулина предусматривает в случае, если молекулу инсулина получают отщеплением от молекулы проинсулина (внеклеточная экспрессия).

Одноцепочечный предшественник. Контроль содержания одноцепочечного предшественника предусматриваться в случае, если производство инсулина осуществляется методом раздельного конструирования цепей инсулина (Two-chain method).

Остаточные белки штамма-продуцента. Не более 10 ppm. Остаточные белки клетки-хозяина могут быть определены иммунохимическими методами (например, радиоиммунологическим или ИФА). Методика должна быть приведена в фармакопейной статье или нормативной документации на субстанцию.

Остаточная ДНК штамма-продуцента и плазмидная ДНК. Не более 10 ppm. Определяют методом гибридизации с зондами, меченными биотином, дигоксигенином, другой меткой или другим валидированным методом, например, методом ПЦР или иммуноферментным методом (Treshold system).

Содержание остаточных белков штамм-продуцента и ДНК штамма-продуцента не должно превышать значений, установленных в фармакопейной статье или в нормативной документации, и не превышать показателей, определенных международными требованиями.

Микробиологическая чистота. Субстанция должна выдерживать требования, предъявляемые к фармацевтическим субстанциям, предназначенным для приготовления лекарственных форм для парентерального применения (категория 1.2.Б). Испытания проводят в соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

Бактериальные эндотоксины. Не более 10 ЕЭ/мг. Испытание проводят в соответствии с ОФС «Бактериальные эндотоксины».

Количественное определение. Не менее 27,5 МЕ/мг в пересчете на сухое вещество. Испытания проводят методом ВЭЖХ, в соответствии с ОФС «Хроматография», ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография».

Биологическая активность. Не менее 27,5 МЕ/мг в пересчете на сухое вещество. Определяют по гипогликемическому действию субстанции в сравнении с международным стандартным образцом человеческого инсулина (USP RS или международный стандартный образец или ГСО). Испытание проводят соответствие с ОФС «Биологические испытания инсулина».

Транспортирование и хранение. В герметичном контейнере при температуре, указанной в нормативной документации.

ЛЕКАРСТВЕННЫЙ ПРЕПАРАТ

Лекарственные генно-инженерные препараты инсулина человека выпускают в лекарственных формах для парентерального применения (раствор для подкожного введения).

Требования к испытаниям лекарственных препаратов инсулина человека регламентируются нижеприведенными показателями, а также требованиями ОФС «Лекарственные средства, получаемые методами рекомбинантных ДНК» и ОФС «Лекарственные формы для парентерального применения» и ОФС «Растворы».

Описание. Бесцветный прозрачный раствор без посторонних включений.

Определение проводят визуально.

Подлинность. Подлинность подтверждается методом ВЭЖХ с использованием стандартного образца (пептидным картированием, идентификацией основного вещества), а также определением биологической активности и/или биоидентичности.

Испытания проводят в соответствии с ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография», ОФС «Пептидное картирование» и ОФС «Биологические испытания инсулина».

Методики должны быть приведены в фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственный препарат.

Прозрачность. Должен быть прозрачным. Определение проводят визуально в соответствии с ОФС «Прозрачность и степень мутности жидкостей».

Цветность. Должен быть бесцветным. Определение проводят визуально в соответствии с ОФС «Степень окраски жидкостей».

pH. Приводится допустимый интервал значений pH. Лекарственный препарат должен соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС «Ионометрия».

Извлекаемый объем. Извлекаемый объем должен быть не менее номинального. Определение проводят в соответствии с ОФС «Извлекаемый объем для лекарственных форм для парентерального применения».

Осмолярность. Приводится допустимый интервал значений осмолярности лекарственного препарата. Лекарственный препарат должен выдерживать требования, определенные в фармакопейной статье или нормативной документации. Определение проводят в соответствии с ОФС «Осмолярность».

Примечание: <*> — при необходимости показатель «Осмолярность» может быть заменен на показатель «Осмолярность с приведением обоснования.»

Механические включения. Видимые и невидимые частицы должны соответствовать требованиям, указанным в ОФС «Видимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения и глазных лекарственных формах» и ОФС «Невидимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения», соответственно. Испытание проводят соответствующими методами, указанными в ОФС.

Чистота. Родственные соединения и посторонние примеси. В зависимости от вида соединения определяют:

• содержание высокомолекулярных белков (примеси). Испытания проводят методом эксклюзионной хроматографии;
• содержание родственных соединений, к которым относится А21-дезамидоинсулин и другие родственные белки установленной структуры;
• посторонние примеси.

Уровень содержания примесей и родственных соединений нормируется в фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственный препарат.

Испытание проводят в соответствие с методиками определения, приведенными в фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственный препарат.

Пролонгированное действие. Лекарственный препарат должен соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Испытание проводят в соответствие с методикой определения, приведенной в фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственный препарат.

Контроль пролонгированного действия предусматривается в случае, если лекарственный препарат обладает пролонгированным действием.

Стерильность. Лекарственный препарат должен быть стерильным. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Стерильность» методом прямого посева или мембранной фильтрации.

Бактериальные эндотоксины. Указывают допустимое содержание бактериальных эндотоксинов. Содержание бактериальных эндотоксинов должно соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Испытание проводят в соответствии с ОФС «Бактериальные эндотоксины».

Вещества, вносимые в препарат. Определяют количественное содержание веществ, используемых в качестве консервантов. Содержание консерванта, должно соответствовать нормам, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственный препарат.

Используемый метод, методика определения и нормы определяются типом соединения, входящего в состав лекарственного препарата и приводятся в фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственный препарат. Выбор метода определения должен быть обоснован.

Количественное определение. Содержание действующего вещества должно соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Испытания проводят методом ВЭЖХ, в соответствии с ОФС «Хроматография», ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография».

Биологическая активность. Не менее 27,5 МЕ/мг в пересчете на сухое вещество. Определяют по гипогликемическому действию лекарственного препарата в сравнении с международным стандартным образцом человеческого инсулина (USP RS или международный стандартный образец или ФСО). Испытание проводят по ОФС «Биологические испытания инсулина».

Упаковка и маркировка. В соответствии с ОФС «Лекарственные формы для парентерального применения» и ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственных средств».

Транспортирование и хранение. В соответствии с ОФС «Лекарственные формы для парентерального применения» и ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственных средств». В защищенном от света месте при температуре от 2 до 8 °C, не допускается замораживание, если в фармакопейной статье или нормативной документации не указано иное.

---