ОФС.1.7.1.0012.18. Общая фармакопейная статья. Интерфероны

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 № 749)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание»)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Интерфероны	ОФС.1.7.1.0012.18 Вводится впервые

Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на интерфероны, полученные с использованием технологии рекомбинантной ДНК с применением в качестве экспрессионной системы бактериальных клеток или клеток млекопитающих.

Интерфероны (ИФН) относятся к группе цитокинов и представляют собой глобулярные белки, которые являются полифункциональными биорегуляторами широкого спектра действия.

Основные биологические свойства интерферонов проявляются в их противовирусном, антипролиферативном и иммуномодулирующем действии.

По происхождению различают три типа интерферонов: \text{ИФН}\alpha — лейкоцитарный (продуцируется лейкоцитами, плазмоцитоидными дендритными клетками, моноцитами/макрофагами), \text{ИФН}\beta — фибробластный (продуцируется фибробластами и эпителиальными клетками), \text{ИФН}\gamma — иммунный (продуцируется T-лимфоцитов и натуральными киллерами).

По способу получения ИФН делятся на природные (ИФН первого поколения) и рекомбинантные, полученные с помощью генно-инженерной технологии (ИФН второго поколения).

Природный интерферон человеческий лейкоцитарный представляет собой группу белков (интерфероны альфа-типа), синтезируемых лейкоцитами, полученными из крови клинически здоровых доноров в ответ на воздействие вируса-индуктора интерферона (вирус болезни Ньюкасла или вирус Сендай). Требования к производству и оценке качества препаратов этого типа описаны в ФС «Интерферон человеческий лейкоцитарный».

Требования, приведенные в настоящей фармакопейной статье, могут быть дополнены с учетом специфических свойств лекарственного средства и технологии его производства.

Данная статья не распространяется на модифицированные (пегилированные) интерфероны.

Интерфероны альфа (\text{ИФН }\alpha)

Аминокислотная последовательность

CDLPQTHSLG	SRRTLMLLAQ	MRRISLFSCL	KDRHDFGFPQ
EEFGNQFQKA	ETIPVLHEM	QQIFNLFSTK	DSSAAWDETL
LDKFYTELYQ	QLNDLEACVI	QGVGVTETPL	MKEDSILAVR
KYFQRITLYL	KEKKYSPCAW	EVVRAEIMRS	FSLTSNLQES
LRSKE

Эмпирическая формула: C860H1349N227O255S9.

Рекомбинантные \text{ИФН}\alpha представляют собой негликозилированные белки, состоящие из 165 аминокислот и содержащие две дисульфидные связи: между остатками цистеина в 1-м и 98-м положениях и в 29-м и 138-м положениях. Молекулярная масса негликозилированного белка составляет около 19300 Да. Продуцентом \text{ИФН}\alpha являются генетически модифицированные клетки Esherichia coli, полученные путем трансформации исходного штамма вектором, содержащим ген \text{ИФН}\alpha человека. В структуре молекулы, образующейся при синтезе рекомбинантного белка рибосомой бактериальной клетки, имеется N-концевой метионин в отличие от эндогенного интерферона, который N-концевым аминокислотным остатком содержит цистеин, связанный дисульфидной связью с 98 цистеином белка. Подсемейства \text{ИФН}\alpha 2a и 2b различаются аминокислотами в положениях 23: лизин и аргинин, соответственно.

Интерфероны бета (\text{ИФН }\beta)

Интерферон бета-1a

Аминокислотная последовательность

MSYNLLGFLQ	RSSNFQCQKL	LWQLNGRLEY	CLKDRMNFDI
PEEIKQLQQF	QKEDAALTIY	EMLQNIFAIF	RQDSSSTGWN
ETIVENLLAN	VYHQINHLKT	VLEEKLEKED	FTRGKLMSSL
HLKRYYGRIL	HYLKAKEYSH	CAWTIVRVEI	LRNFYFINRL
TGYLRN

Эмпирическая формула: C908H1406N246O252S7.

Интерферон бета-1a идентичен эндогенному ИФН человека, представляет собой гликозилированный белок, состоящий из 166 аминокислотных остатков с одной внутрицепочечной дисульфидной связью, имеющий один сайт N-гликозилирования по аспарагиновому остатку в позиции 80 и цистеин в позиции 17. Молекулярная масса 22 500 Да. Известны 6 гликоформ \text{ИФН}\beta - 1a , обусловленных дифференциальным гликозилированием сайта и отличающихся количеством олигосахаридов и степенью их сиалирования. Продуцент \text{ИФН}\beta - 1a — генетически модифицированная культура клеток яичника китайского хомячка (CHO).

Интерферон бета-1b

Аминокислотная последовательность

**SYNLLGFLQR    SSNFQSQKLL    WQLNGRLEYC    LKDRMNFDIP    EEIKQLQQFQ**
**KEDAALTIYE        MLQNIFAIFR        QDSSSTGWNE          TIVENLLANV**
**YHQINHLKTV    LEEKLEKEDF    TRGKLMSSLH    LKRYYGRILH    YLKAKEYSHC**
**AWTIVRVELL   RNFYFINRLT   GYLRN**

Эмпирическая формула: C903H1399N245O252S5.

Интерферон бета-1b модифицирован по отношению к природному, представляет собой негликозилированный белок, состоящий из 166 аминокислотных остатков той же последовательности, за исключением позиции 17 — серин. Не содержит N-концевого метионина. Молекулярная масса 18000 — 20000 Да. Продуцент рекомбинантного \text{ИФН}\beta - 1b — клетки Escherichia coli, в геном которых внедрен ген человеческого \text{ИФН}\beta .

Интерферон-гамма (\text{ИФН }\gamma)

Интерферон-гамма (\text{ИФН}\gamma) представляет собой белок, молекула которого состоит из нековалентно связанного димера двух одинаковых мономеров. Состоит из 140 аминокислотных остатков и содержит N-концевой метионин. Молекулярная масса 16 495 Да. Отличается от нативного белка делецией 10 аминокислотных остатков на C-конце молекулы и заменой кластера KRKR на KGSA. Метод получения — рекомбинантная технология.

Эмпирическая формула \text{ИФН}\gamma - 1b : C734H1166N204O216S5.

ПРОИЗВОДСТВО

Производство ИФН осуществляется с применением технологии рекомбинантной ДНК и должно проводиться в условиях соблюдения правил надлежащей производственной практики.

Экспрессирующая конструкция, штамм-продуцент, производство лекарственного средства, включая банки штаммов-продуцентов, должны быть охарактеризованы в объеме и в соответствии с требованиями, изложенными в ОФС «Лекарственные средства, получаемые методами рекомбинантных ДНК».

В качестве клеток-хозяина для создания штамма-продуцента ИФН используются бактериальные клетки или клетки млекопитающих. Производство основано на системе банков клеток-продуцентов — Главного банка клеток (ГБК) и Рабочего банка клеток (РБК).

Используемые в процессе производства ИФН клетки и материалы биологического происхождения должны быть охарактеризованы в объеме и в соответствии с требованиями, изложенными в ОФС «Требования к клеточным культурам — субстратам производства биологических лекарственных препаратов» и ОФС «Лекарственные средства, получаемые методами рекомбинантных ДНК».

ИСПЫТАНИЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ СУБСТАНЦИИ

Требования к испытаниям фармацевтической субстанции регламентируются нижеприведенными показателями, требованиями ОФС «Лекарственные средства, получаемые методами рекомбинантных ДНК».

Описание. Должна соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Определение проводят визуально.

Подлинность. Подтверждается с помощью комплекса методов, позволяющих специфически идентифицировать ИФН с использованием стандартных образцов. Подлинность ИФН должна быть подтверждена биологическими методами по оценке специфической противовирусной активности, в реакции нейтрализации противовирусной активности ИФН моно- или поликлональными антителами против соответствующего типа ИФН, в соответствии с ОФС «Биологические методы испытания препаратов интерферонов с использованием культур клеток» и/или методом иммуноферментного анализа, а также на уровне структуры белка и его пространсляционных модификаций с применением физико-химических методов исследования: пептидным картированием, карбогидратным картированием (для гликозилированных белков), электрофорезом в полиакриламидном геле, изоэлектрическим фокусированием, обращенно-фазовой и эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографией, методом масс-спектрометрического анализа и др.

Выбор методов оценки подлинности должен быть обоснован. Методики должны быть приведены в фармакопейной статье или нормативной документации на субстанцию. Для испытаний могут использоваться методы в соответствии с ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография», ОФС «Капиллярный электофорез», ОФС «Электрофорез в полиакриламидном геле», ОФС «Изоэлектрическое фокусирование», ОФС «Определение подлинности и чистоты биологических лекарственных препаратов методом вестерн-блот», ОФС «Метод иммуноферментного анализа» и другие валидированные методики, указанные в нормативной документации.

Прозрачность. Должна соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Прозрачность и степень мутности жидкостей».

Цветность. Должна соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Степень окраски жидкостей».

pH. Приводится допустимый интервал значений pH. Субстанция должна соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС «Ионометрия».

Чистота. Родственные соединения и посторонние примеси. Чистота субстанции оценивается комплексом обоснованных (не менее 2 — 3) взаимодополняющих методов, позволяющих охарактеризовать содержание остаточных количеств восстановленной формы ИФН, димеров и агрегатов, продуктов деградации (окисленные и дезамидированные формы).

Содержание родственных соединений и посторонних примесей в субстанции оценивают обоснованными методами. Нормативные требования и методика испытаний должны быть приведены в фармакопейной статье или нормативной документации на субстанцию.

Остаточные белки клетки-хозяина. Содержание белков штамма-продуцента должно соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Остаточные белки клетки-хозяина могут быть определены иммунохимическими методами (например, радиоиммунологическим или ИФА). Методика должна быть указана в фармакопейной статье или нормативной документации на субстанцию.

Остаточная ДНК штамма-продуцента. Содержание остаточных белков клеток-хозяина и ДНК штамма-продуцента не должно превышать значений, установленных в фармакопейной статье или в нормативной документации, и не превышать показателей, определенных международными требованиями.

Определение проводят методом гибридизации с зондами, меченными биотином, дигоксигенином или другой меткой. Возможно использование готовых наборов реагентов, с применением валидированной методики.

Микробиологическая чистота. Должна соответствовать требованиям, предъявляемым к фармацевтическим субстанциям, предназначенным для приготовления лекарственных форм для парентерального применения. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

Стерильность. Субстанция должна быть стерильной, если хранится после стерилизующей фильтрации. Испытания стерильности проводят методом прямого посева или методом мембранной фильтрации в соответствии с ОФС «Стерильность».

Бактериальные эндотоксины. Указывают допустимое содержание бактериальных эндотоксинов и метод определения. Содержание бактериальных эндотоксинов должно соответствовать нормам, определенным в фармакопейной статье или нормативной документации на субстанцию. Испытание проводят в соответствии с ОФС «Бактериальные эндотоксины».

Пирогенность (если применимо). Субстанция должна соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Пирогенность».

Аномальная токсичность. Субстанция должна быть нетоксична. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Аномальная токсичность», если нет других указаний в нормативной документации.

Белок. Содержание белка должно соответствовать нормам, определенным фармакопейной статьей или нормативной документацией на субстанцию. Испытания проводят любым пригодным методом, например, в соответствии с ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография», ОФС «Хроматография», ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой области», ОФС «Определение белка» или в соответствии с валидированной методикой, приведенной в фармакопейной статье или нормативной документации на фармацевтическую субстанцию. Выбор метода определения белка должен быть обоснован.

Специфическая активность. Субстанция должна обладать противовирусной активностью и выдерживать требования, определенные в фармакопейной статье или нормативной документации. Количественное определение активности ИФН проводят с использованием биологического метода in vitro на соответствующей линии клеток, чувствительных к ИФН в соответствии с ОФС «Биологические методы испытания препаратов интерферона с использованием культур клеток».

Методика испытания должна быть приведена в фармакопейной статье или нормативной документации.

Удельная активность. Величина показателя должна соответствовать нормам, определенным в фармакопейной статье или нормативной документации на субстанцию. Определяют расчетным методом как частное от деления величины специфической активности (МЕ/мл) на величину содержания белка (мг/мл).

Транспортирование, хранение. В герметичном контейнере при температуре, указанной в нормативной документации. Для замороженного раствора недопустимо повторное замораживание и оттаивание.

ИСПЫТАНИЯ ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА

Лекарственные препараты на основе рекомбинантных ИФН выпускают в различных формах: капли назальные, капли глазные, лиофилизат для приготовления раствора для инъекций, лиофилизат для приготовления суспензии для приема внутрь, лиофилизат в капсулах, раствор для инъекций, суппозитории, мази, гели.

Форма выпуска препарата определяет перечень показателей качества и методы их определения.

Препараты ИФН для парентерального введения широко используются в практике здравоохранения для лечения многих тяжелых вирусных заболеваний, в том числе вирусных гепатитов B, C, D, рассеянного склероза, а также большого круга онкологических заболеваний.

Препараты для местного применения (мази, суппозитории, капли и т.д.) при ряде нозологических форм способны обеспечить накопление больших концентраций препарата непосредственно в очаге поражения при отсутствии побочных эффектов, свойственных парентеральному введению высоких доз интерферона. За счет высокой концентрации в очаге инфекции достигается выраженный местный противовирусный и иммуностимулирующей эффект. Системное всасывание препаратов незначительное.

Низкая биодоступность лекарственных средств при интраназальном введении связана с функционированием особого семейства белков из 25 протеинов, входящих в состав слизистой оболочки полости носа и контролирующих транспорт всех молекулярных и клеточных объектов, проникающих через слизистую.

Лекарственные формы препаратов ИФН для ректального применения эффективны для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний урогенитального тракта, а также в составе комплексной терапии для лечения других инфекционных заболеваний вирусной этиологии. Эти препараты оказывают местное и системное действие, их биодоступность составляет более 80%. При ректальном введении отсутствуют побочные эффекты, возникающие при парентеральном введении препаратов ИФН, не образуются антитела, нейтрализующие противовирусную активность.

Препараты для местного применения и ректального применения в большинстве своем являются комбинированными и, в зависимости от состава препарата, нормативная документация должна содержать показатели, характеризующие «Подлинность» и «Количественное содержание» всех основных действующих веществ.

Требования к испытаниям лекарственных препаратов ИФН регламентируются нижеприведенными показателями, а также требованиями ОФС «Лекарственные средства, получаемые методами рекомбинантных ДНК» и ОФС на соответствующую лекарственную форму (ОФС «Лекарственные формы для парентерального применения», ОФС «Аэрозоли и спреи», ОФС «Глазные лекарственные формы», ОФС «Мази» и др.).

Описание. Приводится описание свойств соответствующей лекарственной формы препарата соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации.

Подлинность. Подлинность подтверждается комплексом (2 — 3) взаимодополняющих методов (один из которых — определение специфической активности), позволяющих специфически идентифицировать ИФН с использованием стандартных образцов. Подлинность ИФН может быть подтверждена биологическим методом в реакции нейтрализации противовирусной активности ИФН моно- или поликлональными антителами против соответствующего типа ИФН (ОФС «Биологические методы испытания препаратов интерферона с использованием культур клеток»), а также следующими физико-химическими методами: изоэлектрическим фокусированием, обращенно-фазовой и эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографией и другими методами с доказанной специфичностью.

Выбор методов оценки подлинности должен быть обоснован. Методики должны быть приведены в фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственный препарат. Для испытаний могут использоваться методы в соответствии с ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография», ОФС «Изоэлектрическое фокусирование», ОФС «Определение подлинности и чистоты биологических лекарственных препаратов методом вестерн-блот», ОФС «Метод иммуноферментного анализа» и другие валидированные методики, указанные в нормативной документации.

Время восстановления препарата (для лиофилизированных форм). Время восстановления лекарственного препарата указывается в фармакопейной статье или нормативной документации. Условия проведения испытания и методы должны быть указаны в фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственный препарат.

Прозрачность. Должен соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Прозрачность и степень мутности жидкостей».

Цветность. Должен соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Степень окраски жидкостей».

pH. Приводится допустимый интервал значений pH. Лекарственный препарат должен соответствовать нормам, определенным в фармакопейной статье или нормативной документации. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС «Ионометрия».

Извлекаемый объем (для парентеральных форм). Извлекаемый объем должен быть не менее номинального и должен соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье и нормативной документации. Определение проводят в соответствии с ОФС «Извлекаемый объем для лекарственных форм для парентерального применения».

Герметичность (если применимо). Лекарственный препарат должен выдерживать требования, определенные в фармакопейной статье или нормативной документации. Методика испытания должна быть приведена в нормативной документации.

Осмолярность (Осмоляльность) (если применимо). Лекарственный препарат должен соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Определение проводят в соответствии с ОФС «Осмолярность».

Примечание

При необходимости показатель «Осмолярность» может быть заменен на показатель «Осмоляльность» с приведением обоснования замены.

Механические включения. Видимые механические включения должны соответствовать требованиям, указанным в ОФС «Видимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения и глазных лекарственных формах».

Невидимые механические включения должны соответствовать требованиям ОФС «Невидимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения».

Испытания проводят в соответствии с указанными ОФС.

Чистота. Родственные соединения и посторонние примеси (если применимо). Определение проводится комплексом взаимодополняющих методов (не менее 2 — 3), выбор которых должен быть обоснован. Требования по содержанию родственных соединений и посторонних примесей должны гарантировать безопасность и эффективность лекарственного препарата.

Содержание родственных соединений и посторонних примесей может определяться с помощью электрофореза в полиакриламидном геле в восстанавливающих и невосстанавливающих условиях; изоэлектрофокусирования; обращенно-фазовой и эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографии и других методов с доказанной специфичностью и точностью.

Испытания проводят в соответствии с ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография», ОФС «Электрофорез в полиакриламидном геле», ОФС «Изоэлектрическое фокусирование».

Методики испытания должны быть приведены в нормативной документации на лекарственный препарат.

Стерильность. Лекарственный препарат должен быть стерильным. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Стерильность» методом прямого посева или мембранной фильтрации. В нормативной документации должно быть указание о наличии/отсутствии антимикробного действия препарата в условиях проведения испытания. В случае проведения испытания методом прямого посева должны быть указаны питательные среды для проведения испытаний, соотношение количества испытуемого препарата и питательной среды, условия инкубации. Для метода мембранной фильтрации при необходимости должна быть приведена методика пробоподготовки препарата к испытанию, с указанием промывочной жидкости и количества промывок мембранного фильтра.

Бактериальные эндотоксины. Указывают допустимое содержание бактериальных эндотоксинов и методы определения. Содержание должно соответствовать нормам, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации на препарат. Испытание проводят в соответствии с ОФС «Бактериальные эндотоксины».

Аномальная токсичность. Лекарственный препарат должен быть нетоксичным. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Аномальная токсичность».

Белок. Содержание белка не должно превышать значений, указанных в фармакопейной статье или нормативной документации. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография», ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой области» и ОФС «Определение белка» или в соответствии с другой валидированной методикой, приведенной в фармакопейной статье или нормативной документации. Выбор метода определения белка должен быть обоснован.

Вещества, вносимые в препарат. Определяют количественное содержание веществ, используемых в качестве стабилизатора.

Полисорбаты. Определение проводится для препаратов ИФН, в состав которых входят соединения указанного класса. Содержание полисорбата должно соответствовать нормам, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации.

Содержание полисорбата может быть определено методами обращенно-фазовой хроматографии, газовой хроматографии, спектрометрический метод или иной метод с доказанной специфичностью и точностью.

Методика определения, параметры пригодности системы и нормы содержания определяются типом полисорбата, входящего в состав ИФН, и используемым методом испытания.

Выбор метода определения полисорбата должен быть обоснован. Методика должна быть приведена в фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственный препарат.

Специфическая активность. Лекарственный препарат должен соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации.

Количественное определение активности ИФН проводят с использованием биологического метода in vitro на соответствующей линии клеток, чувствительных к интерферону, в соответствии с ОФС «Биологические методы испытания препаратов интерферона с использованием культур клеток», если в фармакопейной статье или нормативной документации не указано иное.

Упаковка и маркировка. В соответствии с ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственных средств» и ОФС для соответствующей лекарственной формы препарата (ОФС «Лекарственные формы для парентерального применения» и др.).

Транспортирование, хранение. В защищенном от света месте при температуре от 2 до 8 °C, не допускается замораживание в соответствии с ОФС «Лекарственные формы для парентерального применения» и ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственных средств». Контролируемые условия указывают в фармакопейной статье или нормативной документации.

---