Изменение № 1 ГОСТ 32219-2013 «Молоко и молочные продукты. Иммуноферментные методы определения наличия антибиотиков»

(принято Протоколом Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации от 12.12.2017 № 104-П)

Принято Протоколом Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации от 12 декабря 2017 г. № 104-П

ИЗМЕНЕНИЕ № 1 ГОСТ 32219-2013 «МОЛОКО И МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ. ИММУНОФЕРМЕНТНЫЕ МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАЛИЧИЯ АНТИБИОТИКОВ»

МКС 67.100.10

Принято Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол № 104-П от 12.12.2017)

Зарегистрировано Бюро по стандартам МГС № 13965

За принятие изменения проголосовали национальные органы по стандартизации следующих государств: AM, KG, RU, UZ, BY [коды альфа-2 по МК (ИСО 3166) 004]

Дату введения в действие настоящего изменения устанавливают указанные национальные органы по стандартизации <1>

---

<1> Дата введения в действие на территории Российской Федерации — 2018-07-01.

Титульный лист и первая страница. Наименование стандарта. Заменить слово: «Иммуноферментные» на «Иммунологические».

Раздел 1. Первый абзац. Заменить слова: «коровье молоко (далее — молоко)» на «молоко и сыворотку, в т.ч. сухую (далее — продукт)»;

четвертый абзац после слов «одновременного определения» дополнить словом: «наличия».

Раздел 2. Дополнить ссылками:

«ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования»

ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 12.4.021-75 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования

ГОСТ 19881-74 Анализаторы потенциометрические для контроля pH молока и молочных продуктов. Общие технические условия

ГОСТ 26809.1-2014 Молоко и молочная продукция. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу. Часть 1. Молоко, молочные, молочные составные и молокосодержащие продукты

ГОСТ 27752-88 Часы электронно-механические кварцевые настольные, настенные и часы-будильники. Общие технические условия

ГОСТ 33957-2016 Сыворотка молочная и напитки на ее основе. Правила приемки, отбор проб и методы контроля»;

ссылку на ГОСТ 12.1.019-79 дополнить знаком сноски — <*>;

дополнить сноской:

«--------------------------------»

<*> На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019-2009»;

ссылка на ГОСТ 28498-90. Наименование. Заменить слово: «определений» на «испытаний».

Пункт 3.2 после значения «66 °C» дополнить словами: «с отклонением от заданной температуры +/- 1 °C».

Пункт 3.10. Шестое перечисление после значения «0,2 см3» дополнить словами: «или 0,3 см3»;

седьмое перечисление. Заменить слова: «в соответствии с требованиями, предъявляемыми к тест-набору № 3» на «, включающий пеналы с пластинами микропробирок со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом; индикаторными полосками хроматографической бумаги; пипетками вместимостью 0,2 см3 с наконечниками; контрольные растворы: пробирки или флаконы со смесью сухого молока с концентрацией пенициллина-G 0,004 мг/кг, окситетрациклина 0,01 мг/кг, стрептомицина 0,2 мг/кг, хлорамфеникола 0,0003 мг/кг и красителя („Positive Standard“); пробирки и флаконы со смесью сухого молока без антибиотиков и красителя („Negative Standard“)»;

дополнить перечислениями:

«- тест-набор № 9 <9> для одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы, включающий пластину микропробирок со специфическими рецепторами, меченными коллоидным золотом; индикаторные полоски хроматографической бумаги; пипетку вместимостью 0,2 см3 с наконечниками (дополнительно);»

• тест-набор № 10 <10> для одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа, тетрациклиновой группы, левомицетина и стрептомицина, включающий пеналы с пластинами микропробирок со специфическими рецепторами, меченными коллоидным золотом; индикаторные полоски хроматографической бумаги; пипетку вместимостью 0,2 см3 с наконечниками (дополнительно)»;

сноски к пункту 3.10 изложить в новой редакции:

«--------------------------------»

<1> Тест-набор «СНАП Бета-Лактам СТ» (IDEXX, США).

<2> Тест-набор «Delvotest BLF» (DSM Food Specialties B.V., Нидерланды).

<3> Тест-набор «TwinsensorBT» (Unisensor, Бельгия).

<4> Тест-набор «СНАП Дуо Бета-Тетра СТ» (IDEXX, США).

<5> Тест-набор «Betastar Combo» (Neogen Corporation, США).

<6> Тест-набор «Reveal for CAP/STREP» (Neogen Corporation, США).

<7> Тест-набор «4sensorBTCS» (Unisensor, Бельгия).

<8> Тест-набор «Betastar 4D» (Neogen Corporation, США).

<9> Тест-набор «PROQUI-TEST R 10 ppb» (Proquiga Biotech, SA, Испания).

<10> Тест-набор «PROQUI-TEST 4» (Proquiga Biotech, SA, Испания).

Сноски <1> — <10> с указанными тест-наборами являются рекомендуемыми к применению».

Раздел 3 дополнить пунктами 3.11 — 3.16:

«3.11 Буфер для восстановления сухой сыворотки Unisensor Dilution Buffer (Unisensor, Бельгия).»

3.12 Раствор гидроксида натрия молярной концентрации c (NaOH) = 1 моль/дм3.

3.13 Анализатор потенциометрический по ГОСТ 19881 2-го класса точности диапазоном измерений от 5,5 до 8,0 ед. pH с погрешностью +/- 0,05 ед. pH.

3.14 Криостат, позволяющий поддерживать температуру (4 +/- 2) °C и (6 +/- 2) °C.

3.15 Дозаторы автоматические или механические одноканальные или многоканальные переменной вместимости 0,01 — 0,1 и 0,1 — 1 см3, с допускаемым относительным СКО не более 8,0%.

3.16 Часы 2-го класса точности по ГОСТ 27752«.»

Раздел 4 изложить в новой редакции (кроме заголовка):

«Отбор проб продукта — по ГОСТ 26809.1, ГОСТ 33957 и нормативным документам, действующим на территории государств, принявших стандарт.»

Для восстановления сухой сыворотки готовят раствор буфера: при температуре (40 +/- 2) °C буфер по 3.11 разводят дистиллированной водой в соотношении 1:1 (V/V). 1,5 г сухой сыворотки добавляют к 8,5 см3 раствора буфера и измеряют значение pH полученного раствора. Если значение менее 6 ед. pH, то кислотность раствора приводят к значению 6 — 7 ед. pH при помощи раствора гидроксида натрия по 3.12».

Подпункт 5.2.1.2. Второй абзац. Заменить слово: «молока» на «продукта»;

четвертый абзац после слов «считывают результат» дополнить словами: «способом, рекомендуемым изготовителем тест-набора».

Подпункт 5.2.1.3. Третий, пятый, шестой абзацы. Заменить слово: «молоке» на «продукте».

Подраздел 5.2 дополнить пунктом 5.2.4:

«5.2.4 Метод с использованием тест-набора № 9»

Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.

5.2.4.1 Подготовка к определению

Тест-набор № 9 по 3.10 хранят в холодильнике при температуре (6 +/- 2) °C не более 12 мес с даты производства. Перед началом работы необходимое количество микропробирок извлекают из тест-набора.

5.2.4.2 Проведение определения

Пипетку вместимостью 0,2 см3 наполняют анализируемым молоком, выливают в микропробирку и перемешивают с ее содержимым, наполняя и сливая его с помощью пипетки пять раз, до образования розового цвета.

Индикаторную полоску хроматографической бумаги помещают в микропробирку на 5 — 10 с, затем извлекают и кладут на чистую сухую поверхность. По истечении 5 — 7 мин считывают результат.

5.2.4.3 Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появившихся на индикаторной полоске хроматографической бумаги в виде линий в соответствии с А.5.1 (приложение А).

Зона верхней части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения по 5.2.4.2 окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.

Зона определения антибиотиков тетрациклиновой группы на индикаторной полоске хроматографической бумаги расположена под контрольной зоной первой. Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа — под контрольной зоной второй.

Бульшая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует о том, что концентрация определяемых антибиотиков в анализируемом молоке менее предела обнаружения.

Меньшая или равная интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие их окрашивания свидетельствуют о том, что концентрация определяемых антибиотиков в анализируемом молоке больше или равна пределу обнаружения».

Подпункт 5.4.1.2. Второй абзац. Заменить слово: «молока» на «продукта»;

четвертый абзац после слов «считывают результат» дополнить словами: «способом, рекомендуемым изготовителем тест-набора».

Подпункт 5.4.1.3. Третий, четвертый, пятый, шестой абзацы. Заменить слово: «молоке» на «продукте».

Подпункт 5.4.2.2 изложить в новой редакции:

«5.4.2.2 Проведение определения»

Пипеткой вносят 0,3 см3 анализируемого молока во флакон.

Флакон помещают в термостат или на водяную баню. Во флакон, находящийся в термостате (на водяной бане), помещают индикаторную полоску хроматографической бумаги и выдерживают при температуре (47,5 +/- 1) °C в течение 10 мин. Затем индикаторную полоску хроматографической бумаги извлекают из флакона и считывают результат способом, рекомендуемым изготовителем тест-набора».

Подраздел 5.4 дополнить пунктом 5.4.3:

«5.4.3 Метод с использованием тест-набора № 10»

Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа, тетрациклиновой группы, стрептомицина и левомицетина со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.

5.4.3.1 Подготовка к определению

Тест-набор № 10 по 3.10 хранят в холодильнике при температуре (6 +/- 2) °C не более 12 мес с даты производства. Перед началом работы необходимое количество микропробирок извлекают из тест-набора.

5.4.3.2 Проведение определения

Пипетку вместимостью 0,2 см3 наполняют анализируемым молоком, выливают в микропробирку, перемешивают с ее содержимым, наполняя и сливая его с помощью пипетки пять раз, до образования розового цвета, и выдерживают в течение 3 мин.

Индикаторную полоску хроматографической бумаги помещают в микропробирку на 7 — 8 мин, затем извлекают, кладут на чистую сухую поверхность и считывают результат.

5.4.3.3 Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появившихся на индикаторной полоске хроматографической бумаги в виде линий в соответствии с А.9 (приложение А).

Зона верхней части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения по 5.4.3.2 окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.

Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа на индикаторной полоске хроматографической бумаги расположена под контрольной зоной первой. Зона определения антибиотиков тетрациклиновой группы — под контрольной зоной второй. Зона определения стрептомицина — под контрольной зоной третьей. Зона определения левомицетина — под контрольной зоной четвертой.

Бульшая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует о том, что концентрация определяемых антибиотиков в анализируемом молоке менее предела обнаружения.

Меньшая или равная интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие их окрашивания свидетельствуют о том, что концентрация определяемых антибиотиков в анализируемом молоке больше или равна пределу обнаружения».

Раздел 6. Таблицу 1 изложить в новой редакции:

«Таблица 1»

Наименование антибиотика	Наименьший предел определения антибиотиков с использованием тест-наборов, мг/кг
	№ 1	№ 2	№ 3	№ 4	№ 5	№ 6	№ 7	№ 8	№ 9	№ 10
Амоксициллин	0,0035	0,004	0,003	0,003	0,002	-	0,002	0,002	0,003	0,003
Ампициллин	0,0035	0,004	0,003	0,003	0,002	-	0,003	0,003	0,003	0,003
Бензициллин	0,003	-	0,003	-	-	-	0,003	-	-	-
Гетациллин	0,01	-	0,005	-	-	-	0,005	-	-	-
Дигидрострептомицин	-	-	-	-	-	-	0,05	-	-	0,1
Диклоксациллин	0,02	0,03	0,006	0,011	0,002	-	0,006	0,003	0,006	0,003
Доксициклин	-	-	0,0025	-	0,002	-	0,002	0,002	0,006	0,006
Клоксациллин	0,022	0,03	0,006	0,018	0,002	-	0,006	0,003	0,003	0,003
Левомицетин (хлорамфеникол)	-	-	-	-	-	0,0003	0,0003	0,0003	-	0,0003
Нафциллин	0,052	-	0,03	0,046	0,0075	-	0,03	0,01	0,01	0,01
Оксациллин	0,024	0,03	0,012	0,032	0,003	-	0,012	0,003	0,003	0,003
Окситетрациклин	-	-	0,0075	0,01	0,01	-	0,007	0,01	0,01	0,01
Пенициллин G	0,002	0,004	0,003	0,001	0,002	-	0,003	0,003	0,002	0,0015
Пенициллин V	0,003	-	0,003	-	-	-	0,003	-	-	-
Пиперациллин	0,006	-	0,005	-	-	-	0,005	-	-	-
Прокаин-пенициллин	0,002	-	0,003	-	-	-	0,003	-	-	-
Стрептомицин	-	-	-	-	-	0,2	0,15	0,2	-	0,1
Тетрациклин	-	-	0,01	0,01	0,01	-	0,01	0,01	0,008	0,008
Тикарциллин	0,04	-	-	-	-	-	-	-	-	-
Хлортетрациклин	-	-	0,006	0,026	0,006	-	0,005	0,006	0,004	0,004
Цефадроксил	0,03	-	-	-	-	-	-	-	-	-
Цефазолин	0,013	0,05	-	-	0,015	-	-	0,02	0,005	-
Цефалексин	0,025	0,1	-	0,01	0,4	-	-	-	-	-
Цефалоний	0,04	-	0,003	-	-	-	0,003	-	-	-
Цефалониум	0,04	0,02	0,003	0,04	0,003	-	0,003	0,003	0,004	0,004
Цефапирин	0,011	-	-	0,008	0,004	-	-	0,004	0,004	0,004
Цефацетрил	0,05	-	-	0,009	-	-	-	-	-	-
Цефкином	0,02	0,02	-	0,01	0,006	-	-	0,006	0,005	0,005
Цефоксазол	0,05	-	-	-	-	-	-	-	-	-
Цефоперазон	0,01	0,05	0,003	0,004	0,003	-	0,003	0,004	0,005	0,004
Цефотаксим	0,01	-	-	-	-	-	-	-	-	-
Цефрадин	0,03	-	-	-	-	-	-	-	-	-
Цефтиофур	0,011	0,1	-	0,002	0,05	-	0,01	0,015	0,01	0,01
Цефуроксим	0,01	-	-	-	-	-	-	-	-	-

«.»

Стандарт дополнить разделами 7 и 8:

«7. Требования, обеспечивающие безопасность»

При выполнении работ необходимо, чтобы помещение лаборатории было оборудовано общей приточно-вытяжной вентиляцией в соответствии с требованиями ГОСТ 12.4.021 и содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не превышало норм, установленных ГОСТ 12.1.005.

Требования техники безопасности при работе с химическими реактивами — в соответствии с ГОСТ 12.1.007; требования техники безопасности при работе с электроустановками — в соответствии с ГОСТ 12.1.019.

Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004 и должно быть оснащено средствами пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009.

8. Требования к оператору

К проведению определения наличия антибиотиков допускаются лица, имеющие специальное образование по профилю выполняемых работ, прошедшие обучение приемам работы с оборудованием, освоившие выполнение предусмотренных методикой операций, ранее не принимавшие антибактериальные и противовирусные препараты в течение периода их полного выведения из организма в соответствии с инструкцией к конкретному препарату».

Приложение А дополнить пунктами А.5.1 и А.9:

«А.5.1 Примеры результатов определения наличия антибиотиков с использованием тест-набора № 9 приведены на рисунке А.5.1.»

1 — антибиотики отсутствуют; 2 — присутствуют антибиотики бета-лактамного типа; 3 — присутствуют антибиотики тетрациклиновой группы; 4 — присутствуют антибиотики бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы; 5 — недействительный результат

Рисунок А.5.1»;

«А.9 Примеры результатов определения наличия антибиотиков с использованием тест-набора № 10 приведены на рисунке А.9.»

1 — антибиотики отсутствуют; 2 — присутствуют антибиотики бета-лактамного типа; 3 — присутствуют антибиотики тетрациклиновой группы; 4 — присутствует стрептомицин; 5 — присутствует левомицетин; 6 — недействительный результат

Рисунок А.9».

---