ФС.2.1.0600. Фармакопейная статья. Кладрибин

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Кладрибин Кладрибин Cladribinum	ФС.2.1.0600
	Вводится впервые

C10H12ClN5O3 [4291-63-8]	М.м. 285,69

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

9-(2-Деокси- \beta -D-эритро-пентофуранозил)-2-хлор-9H-пурин-6-амин.

Содержит не менее 97,0% и не более 102,0% кладрибина C10H12ClN5O3 в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок.

<*> Проявляет полиморфизм.

---

<*> Приводится для информации.

Растворимость. Растворим в диметилсульфоксиде, мало растворим в воде и метаноле, практически нерастворим в ацетонитриле.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца кладрибина.

Если спектры различаются, испытуемую субстанцию и стандартный образец по отдельности растворяют в минимальных объемах метанола, выпаривают на водяной бане досуха при температуре 45 °C, высушивают при 105 °C в течение 2 ч и записывают спектры сухих остатков.

ИСПЫТАНИЯ

Удельное вращение. От -21,0 до -27,0 в пересчете на безводное вещество (1% раствор субстанции в диметилсульфоксиде, ОФС «Оптическое вращение»).

<**> Прозрачность раствора. Растворяют 0,15 г субстанции в 50 мл воды, обрабатывают ультразвуком до растворения. Раствор должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей»).

<**> Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании «Прозрачность раствора», должен быть бесцветным (ОФС «Степень окраски жидкостей», метод 2).

---

<**> Испытание проводят для субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.

Родственные примеси. Примеси A, B, C, D. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Подвижная фаза А (ПФА). Вода.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Ацетонитрил.

Подвижная фаза В (ПФВ). В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 800 мл воды, прибавляют 30 мл фосфорной кислоты концентрированной и доводят объем раствора водой до метки.

Растворитель. Ацетонитрил — вода 10:90.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают 25 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в растворителе и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор сравнения А. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объем раствора растворителем до метки.

Раствор сравнения Б. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл раствора сравнения А и доводят объем раствора растворителем до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца примеси C, растворяют в 10 мл раствора сравнения А и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор для идентификации примесей. Растворяют 3 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца для идентификации пиков (содержит примеси A, B, C и D) в 2,0 мл растворителя.

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5,0 мл раствора сравнения Б и доводят объем раствора растворителем до метки.

Примечание

Примесь A: 9-(2-деокси- \beta -D-эритро-пентофуранозил)-9H-пурин-2,6-диамин [4546-70-7].

Примесь B: 9-(2-деокси- \beta -D-эритро-пентофуранозил)-2-метокси-9H-пурин-6-амин [24757-70-8].

Примесь C: 2-хлор-7H-пурин-6-амин [1839-18-5].

Примесь D: 2-хлор-9-(2-деокси- \alpha -D-эритро-пентофуранозил)-9H-пурин-6-амин [5542-92-7].

Хроматографические условия

Колонка	250 x 4,6 мм, силикагель октилсилильный, деактивированный по отношению к основаниям для хроматографии, 5 мкм;
Температура колонки	25 °C;
Скорость потока	0,8 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 252 нм;
Объем пробы	20 мкл.

Режим хроматографирования

Время, мин	ПФА, %	ПФБ, %	ПФВ, %
0 — 10	80 \rightarrow 70	10 \rightarrow 20	10
10 — 25	70 \rightarrow 20	20 \rightarrow 70	10
25 — 30	20	70	10

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор для идентификации примесей, раствор сравнения Б и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Кладрибин — 1 (около 10 мин); примесь A — около 0,33; примесь B — около 0,44; примесь C — около 0,73; примесь D — около 0,92.

Идентификация примесей. Для идентификации пиков примесей A, B, C и D используют относительное время удерживания соединений, хроматограмму раствора сравнения Б и хроматограмму, прилагаемую к фармакопейному стандартному образцу для идентификации примесей A, B, C и D.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (RS) между пиками примеси C и кладрибина должно быть не менее 4,5.

Поправочные коэффициенты. Для расчета содержания примесей B и C, площади пиков этих примесей умножаются на соответствующие поправочные коэффициенты: примесь B — 1,7; примесь C — 0,8.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

• площадь пика каждой из примесей A и C не должна более чем в три раза превышать площадь пика кладрибина на хроматограмме раствора сравнения Б (не более 0,3%);
• площадь пика каждой из примесей B и D не должна более чем в два раза превышать площадь пика кладрибина на хроматограмме раствора сравнения Б (не более 0,2%);
• площадь пика любой другой примеси не должна превышать площадь пика кладрибина на хроматограмме раствора сравнения Б (не более 0,1%);
• сумма площадей пиков всех примесей не должна превышать десятикратную площадь пика кладрибина на хроматограмме раствора сравнения Б (не более 1,0%).

Не учитывают пики, площадь которых менее площади пика кладрибина на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы (менее 0,05%).

Примесь E. Определение проводят методом ТСХ (ОФС «Тонкослойная хроматография»).

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля F254.

Подвижная фаза (ПФ). Аммиака раствор концентрированный 25% — спирт 96% — этилацетат 20:40:40.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 2 мл помещают 40 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в диметилформамиде и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца примеси E. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 5 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца примеси E (2-деокси-D-эритро-пентофураноза [1831121-84-6]), растворяют в 10 мл диметилформамида и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 3,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора диметилформамидом до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают 10 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца примеси E, растворяют в диметилформамиде и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. Смешивают полученный раствор и испытуемый раствор 9:1.

Реактив для детектирования. Растворяют 0,5 г тимола в 100 мл смеси растворителей спирт 96% — серная кислота концентрированная 95:5.

На линию старта пластинки наносят по 5 мкл испытуемого раствора (100 мкг), раствора стандартного образца примеси E (0,3 мкг) и раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы. Пластинку с нанесенными пробами высушивают в потоке теплого воздуха до удаления следов растворителей, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80 — 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат на воздухе, затем нагревают при температуре 45 °C в течение 10 мин, опрыскивают реактивом для детектирования, выдерживают в сушильном шкафу при температуре 110 °C в течение 20 мин или до появления зон адсорбции и просматривают в УФ-свете при длине волны 254 нм.

Хроматографическая система считается пригодной, если на хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы четко видны две зоны адсорбции.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора зона адсорбции, находящаяся на уровне зоны адсорбции примеси E, по совокупности величины и интенсивности окраски не должна превышать зону адсорбции на хроматограмме раствора стандартного образца примеси E (не более 0,3%).

Вода. Не более 0,5% (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют 0,1 г (точная навеска) субстанции.

Остаточные органические растворители. В соответствии с требованиями ОФС «Остаточные органические растворители».

<**> Бактериальные эндотоксины. Не более 41,67 ЕЭ на 1 мг кладрибина (ОФС «Бактериальные эндотоксины»). Для проведения испытаний готовят исходный раствор субстанции с концентрацией 0,5 мг/мл.

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси со следующими изменениями.»

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 20 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в растворителе и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца кладрибина. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 20 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца кладрибина, растворяют в растворителе и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Хроматографируют раствор стандартного образца кладрибина и испытуемый раствор.

Содержание кладрибина C10H12ClN5O3 в субстанции в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 100 \cdot 100}{S_{0} \cdot a \cdot 100 \cdot (100 - W)} ,

где S1 — площадь пика кладрибина на хроматограмме испытуемого раствора;

S0 — площадь пика кладрибина на хроматограмме раствора стандартного образца кладрибина;

a1 — навеска субстанции, мг;

a0 — навеска фармакопейного стандартного образца кладрибина, мг;

W — суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %.

P — содержание основного вещества в фармакопейном стандартном образце кладрибина, %.

ХРАНЕНИЕ

В защищенном от света месте при температуре от 2 до 8 °C.

---