ФС.2.1.0339. Фармакопейная статья. Эритромицин
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377)
(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)
Примечание
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте https://minzdrav.gov.ru/ по состоянию на 23.08.2023. В соответствии с Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377 данный документ введен в действие с 01.09.2023. Взамен ФС 42-3577-98.
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
| Эритромицин Эритромицин Erythromycinum | ФС |
| Взамен ФС 42-3577-98 |
 | |||||
| Эритромицин A | R=OH | R1=CH3 | C37H67NO13 | [114-07-8] | М.м. 733,9 |
| Эритромицин B | R=H | R1=CH3 | C37H67NO12 | [527-75-3] | М.м. 717,9 |
| Эритромицин C | R=OH | R1=H | C36H65NO13 | [1675-02-1] | М.м. 719,9 |
ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Смесь антибиотиков-макролидов, продуцируемых штаммом Streptomyces erythreus, основным компонентом является эритромицин A: (3R,4S,5S,6R,7R,9R,11R,12R,13S,14R)-7,12,13-Тригидрокси-4-[(2,6-дидезокси-3-C-метил-3-O-метил- \alpha -рибо-L-гексопиранозил)окси]-3,5,7,9,11,13-гексаметил-6-{[3,4,6-тридезокси-3-(диметиламино)- \beta -D-ксило-гексопиранозил]окси}-14-этил-1-оксациклотетрадекан-2,10-дион.
Содержит не менее 93,0% и не более 102,0% суммы эритромицинов A, B и C, из них эритромицинов B и C не более 5% каждого в пересчете на безводное и не содержащее остаточных органических растворителей вещество. Содержит не менее 930 мкг/мг и не более 1020 мкг/мг в пересчете на безводное вещество.
СВОЙСТВА
Описание. Белый или светло-желтый порошок или бесцветные или светло-желтые кристаллы.
<*> Гигроскопичен, проявляет полиморфизм.
<*> Приводится для информации.
Растворимость. Легко растворим в этаноле 96%, растворим в метаноле, мало растворим в воде.
ИДЕНТИФИКАЦИЯ
1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»).
Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца эритромицина A.
Если спектры различаются, по 50 мг субстанции и фармакопейного стандартного образца эритромицина A растворяют отдельно в 1 мл метиленхлорида, упаривают и сушат при температуре 60 °C в течение 3 ч при остаточном давлении не более 0,67 кПа (5 мм. рт. ст.).
Не учитывают полосы поглощения в области от 1980 до 2050 см-1.
2. Тонкослойная хроматография (ОФС «Тонкослойная хроматография»).
Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля.
Подвижная фаза. Тщательно перемешивают 4 объема 2-пропанола, 8 объемов раствора ацетата аммония раствора 15%, предварительно доведенного до pH 9,6 аммиака раствором концентрированным 25%, и 9 объемов этилацетата. После расслаивания смеси используют верхний слой.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 10,0 мг субстанции, растворяют в метаноле и доводят объем раствора до метки тем же растворителем.
Раствор стандартного образца эритромицина A. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 10 мг фармакопейного стандартного образца эритромицина A, растворяют в метаноле и доводят объем раствора до метки тем же растворителем.
Раствор стандартного образца спирамицина. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 10 мг фармакопейного стандартного образца спирамицина, растворяют в метаноле и доводят объем раствора до метки тем же растворителем.
На линию старта пластинки наносят по 10 мкл испытуемого раствора (10 мкг) и растворов стандартных образцов эритромицина A (10 мкг) и спирамицина (5 мкг). Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80 — 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей, опрыскивают спиртовым сернокислым раствором анисового альдегида, сушат при температуре 110 °C в течение 5 мин и просматривают в видимом свете.
Результат. Основная зона адсорбции на хроматограмме испытуемого раствора по положению, величине и интенсивности окраски должна соответствовать основной зоне адсорбции на хроматограмме раствора стандартного образца эритромицина A и отличаться по положению и окраске от основной зоны адсорбции на хроматограмме раствора стандартного образца спирамицина.
3. Качественная реакция. К 5,0 мг субстанции прибавляют 5 мл раствора ксантгидрола и нагревают на водяной бане; появляется красное окрашивание.
4. Качественная реакция. Растворяют 10 мг субстанции в 5 мл 25% хлористоводородной кислоты; через 10 — 20 мин появляется желтое окрашивание.
ИСПЫТАНИЯ
Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).
Все растворы используют свежеприготовленными.
Смесь растворителей. Метанол — фосфатный буферный раствор pH 7,0 1:3.
Буферный раствор. 35,0 г дикалия гидрофосфата растворяют в 900 мл воды, при необходимости доводят pH до 9,0 2 М фосфорной кислотой, и доводят объем раствора водой до 1000 мл.
Подвижная фаза (ПФ). В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 50 мл буферного раствора, 400 мл воды, 165 мл 2-метил-2-пропанола, 30 мл ацетонитрила и доводят объем раствора водой до метки.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 40 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в смеси растворителей и доводят объем раствора той же смесью до метки.
Раствор стандартного образца эритромицина A. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 40 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца эритромицина A, растворяют в смеси растворителей и доводят объем раствора той же смесью до метки.
Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 10 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца эритромицина B и 10 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца эритромицина C, растворяют в смеси растворителей и доводят объем раствора той же смесью до метки.
Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 5 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца примеси B, растворяют в 20 мл стандартного раствора, прибавляют 1,0 мл раствора стандартного образца эритромицина A и доводят объем раствора стандартным раствором до метки.
Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 3,0 мл раствора стандартного образца эритромицина A и доводят объем смесью растворителей до метки.
Раствор для идентификации пиков. Распределяют 40 мг фармакопейного стандартного образца эритромицина A по дну бюкса тонким (не более 1 мм) слоем, нагревают при температуре 130 °C в течение 4 ч, охлаждают и растворяют в 10,0 мл смеси растворителей.
Эритромицин B: (3R,4S,5S,6R,7R,9R,11R,12S,13R,14R)-7,12-дигидрокси-4-[(2,6-дидезокси-3-C-метил-3-O-метил- \alpha -рибо-L-гексопиранозил)окси]-3,5,7,9,11,13-гексаметил-6-{[3,4,6-тридезокси-3-(диметиламино)- \beta -D-ксило-гексопиранозил]окси}-14-этил-1-оксациклотетрадекан-2,10-дион [527-75-3].
Эритромицин C: (3R,4S,5S,6R,7R,9R,11R,12R,13S,14R)-7,12,13-тригидрокси-4-[(2,6-дидезокси-3-C-метил- \alpha -рибо-L-гексопиранозил)окси]-3,5,7,9,11,13-гексаметил-6-{[(3,4,6-тридезокси-3-(диметиламино)- \alpha -D-ксило-гексопиранозил]окси}-14-этил-1-оксациклотетрадекан-2,10-дион [1675-02-1].
Примесь B: (3R,4S,5S,6R,7R,9R,11R,12R,13S,14R)-7,12,13-тригидрокси-4-[(2,6-дидезокси-3-C-метил-3-O-метил- \alpha -рибо-L-гексопиранозил)окси]-3,5,7,9,11,13-гексаметил-6-{[3,4,6-тридезокси-3-(метиламино)- \beta -D-ксило-гексопиранозил]окси}-14-этил-1-оксациклотетрадекан-2,10-дион [992-62-1].
Примесь E: (2R,3R,4S,5R,8R,9S,10S,11R,12R)-3,4-дигидрокси-9-[(2,6-дидезокси-3-C-метил-3-O-метил- \alpha -L-рибо-гексопиранозил)окси]-2,4,8,10,12,14-гексаметил-11-{[3,4,6-тридезокси-3-(диметиламино)- \beta -D-ксило-гексопиранозил]oxy}-5-этил-6,15-диоксабицикло[10.2.1]пентадец-1(14)-ен-7-он [33396-29-1].
Примесь F: (2R,3R,6R,7S,8S,9R,10R)-3-[(2R,3R)-2,3-Дигидроксипентан-2-ил]-7-[(2,6-дидезокси-3-C-метил-3-O-метил- \alpha -L-рибо-гексопиранозил)окси]-2,6,8,10,12-пентаметил-9-{[3,4,6-тридезокси-3-(диметиламино)- \beta -D-ксило-гексопиранозил]окси}-4,13-диоксабицикло[8.2.1]тридец-1(12)-ен-5-он [105882-69-7].
Хроматографируют раствор для идентификации пиков, раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор стандартного образца эритромицина A, раствор сравнения и испытуемый раствор.
Относительное время удерживания соединений. Эритромицин A — 1 (около 15 мин); примесь E — около 4.3; эритромицин B — около 1,8; примесь F — около 1,5; эритромицин C — около 0,5; примесь B — около 0,45.
Идентификация примесей. Для идентификации эритромицинов B и C и примеси B используют хроматограммы растворов для проверки разделительной способности хроматографической системы и стандартного раствора, примесей E и F — по хроматограмме раствора для идентификации и относительным временам удерживания соединений.
Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы:
- разрешение (R) между пиками примеси B и эритромицина C должно быть не менее 0,8;
- разрешение (R) между пиками примеси B и эритромицина A должно быть не менее 5,5.
Поправочные коэффициенты. Для расчета содержания следующих примесей площади пиков умножаются на соответствующие поправочные коэффициенты: примесь E — 0,09; примесь F — 0,15.
Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:
- площадь пика любой примеси не должна превышать площадь пика эритромицина A на хроматограмме раствора сравнения (не более 3%);
- сумма площадей пиков всех примесей не должна более чем в 2,3 раза превышать площадь пика эритромицина A на хроматограмме раствора сравнения (не более 7%).
Не учитывают пики, площадь которых составляет менее 0,02 площади пика эритромицина A на хроматограмме раствора сравнения (менее 0,06%), и пики эритромицинов B и C.
Тиоцианат-ионы. Не более 0,3%. Определяют методом спектрофотометрии (ОФС «Спектрометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).
Все растворы готовят непосредственно перед использованием и защищают от света.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 0,1 г субстанции, растворяют в 20 мл метанола, прибавляют 1,0 мл железа(III) хлорида раствора 9% и доводят объем раствора метанолом до метки.
Эталонный раствор (готовят в двух повторностях). В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 0,1 г предварительно высушенного при температуре 105 °C в течение 1 ч калия тиоцианата, растворяют в метаноле и доводят объем раствора до метки тем же растворителем. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора метанолом до метки. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 5,0 мл полученного раствора, прибавляют 1,0 мл 9% раствора хлорида железа(III) и доводят объем раствора метанолом до метки.
Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл железа(III) хлорида раствора 9% и доводят объем раствора метанолом до метки.
Измеряют оптическую плотность испытуемого и эталонных растворов при длине волны 492 нм относительно раствора сравнения.
Пригодность системы. Система считается пригодной, если отношение S находится в пределах от 0,985 до 1,015:
S = \frac{A_{1} \cdot a_{2}}{A_{2} \cdot a_{1}} ,
где A1 и A2 — оптическая плотность эталонных растворов первой и второй повторности, соответственно;
a1 и a2 — навески калия тиоцианата при приготовлении эталонных растворов первой и второй повторности, соответственно, г.
Содержание тиоцианат-ионов в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:
X = \frac{A \cdot (\frac{a_{1}}{A_{1}} + \frac{a_{2}}{A_{2}})}{a \cdot 2} \cdot \frac{58,08 \cdot 50 \cdot 5 \cdot 5 \cdot 100}{97,18 \cdot 50 \cdot 50 \cdot 50} ,
где A — оптическая плотность испытуемого раствора;
58,08 — относительная молекулярная масса тиоцианат-иона;
97,18 — относительная молекулярная масса тиоцианата калия.
Вода. Не более 6,5% (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют 0,2 г (точная навеска) субстанции и в качестве растворителя раствор имидазола в метаноле 0,1 г/мл.
Сульфатная зола. Не более 0,2% (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1,0 г (точная навеска) субстанции.
Тяжелые металлы. Не более 0,002%. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжелые металлы» (метод 3Б) в зольном остатке, полученном после сжигания 1,0 г субстанции, с использованием эталонного раствора 2.
Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».
Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
1. ВЭЖХ. Определение проводят в условиях испытания «Родственные примеси».
Содержание эритромицина A C37H67NO13 в субстанции в процентах (X) в пересчете на безводное и не содержащее остаточных органических растворителей вещество вычисляют по формуле:
X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot 10 \cdot P \cdot 100}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 10 \cdot (100 - W)} ,
где S1 — площадь пика эритромицина A на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 — площадь пика эритромицина A на хроматограмме раствора стандартного образца эритромицина A;
a0 — навеска фармакопейного стандартного образца эритромицина A, мг;
W — суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей, %;
P — содержание эритромицина A в фармакопейном стандартном образце эритромицина A, %.
Содержание эритромицина B C37H67NO12 и эритромицина C C36H65NO13 в субстанции в процентах (X) в пересчете на безводное и не содержащее остаточных органических растворителей вещество вычисляют по формуле:
X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot 10 \cdot P \cdot 100}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 50 \cdot (100 - W)} ,
где S1 — площадь пика эритромицина B или эритромицина C, соответственно, на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 — площадь пика эритромицина B или эритромицина C, соответственно, на хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы;
a0 — навеска фармакопейного стандартного образца эритромицина B или эритромицина C, соответственно, мг;
W — суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей, %;
P — содержание эритромицина B или эритромицина C в фармакопейном стандартном образце эритромицина B или эритромицина C, соответственно, %.
2. Микробиологический метод. Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение антимикробной активности антибиотиков методом диффузии в агар».
ХРАНЕНИЕ
В герметично укупоренной упаковке, в защищенном от света месте.