---
title: "\"МУК 4.2.3435-17. 4.2. Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы. Микробиологическое измерение концентрации Paenibacillus mucilaginosus Pm 2906 ВКПМ В-12259 в воздухе рабочей зоны. Методические указания\""
number: "МУК 4.2.3435-17"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-2-3435-17"
---

## "МУК 4.2.3435-17. 4.2. Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы. Микробиологическое измерение концентрации Paenibacillus mucilaginosus Pm 2906 ВКПМ В-12259 в воздухе рабочей зоны. Методические указания"

# "МУК 4.2.3435-17. 4.2. Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы. Микробиологическое измерение концентрации Paenibacillus mucilaginosus Pm 2906 ВКПМ В-12259 в воздухе рабочей зоны. Методические указания"

(утв. Роспотребнадзором 22.02.2017)


<a id="p100001"></a>Утверждаю
Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный врач
Российской Федерации
**А.Ю.ПОПОВА**
22 февраля 2017 года


#### <a id="p100002"></a>4.2 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ

**И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ**

<a id="p100003"></a>**МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИЗМЕРЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ PAENIBACILLUS**
**MUCILAGINOSUS PM 2906 ВКПМ В-12259 В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ**

<a id="p100004"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.2.3435-17**

1. <a id="p100005"></a>Разработаны и подготовлены ФГБОУ ВО "Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова" Минздрава России (Н.И. Шеина).
2. <a id="p100006"></a>Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 22 декабря 2016 г. N 2).
3. <a id="p100007"></a>Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 22 февраля 2017 г.
4. <a id="p100008"></a>Введены впервые.


## 1. <a id="p100009"></a>Общие положения и область применения


<a id="p100010"></a>1.1. Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода микробиологического количественного анализа концентрации Paenibacillus mucilaginosus Pm 2906 ВКПМ В-12259 в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 50 до 500 000 клеток в 1 м3 воздуха.

#### <a id="p100011"></a>1.2 Методические указания носят рекомендательный характер.



## 2. <a id="p100012"></a>Биологическая характеристика штамма Paenibacillus mucilaginosus Pm 2906 ВКПМ В-12259 и его гигиенический норматив в воздухе рабочей зоны


<a id="p100013"></a>Штамм Paenibacillus mucilaginosus Pm 2906 выделен из окультуренных почв методом многоступенчатой аналитической селекции, не является генетически модифицированным штаммом. Предполагается использовать для производства бактериальных удобрений, а также для профилактики и лечения грибковых заболеваний в растениеводстве. Производственная активность штамма не менее 1,2 x 108 кл/мл.

<a id="p100014"></a>Таксономическое положение штамма


| <a id="p100015"></a>Царство | <a id="p100016"></a>Bacteria |
| --- | --- |
| <a id="p100017"></a>Подцарство | <a id="p100018"></a>Firmicutes |
| <a id="p100019"></a>Класс | <a id="p100020"></a>Bacilli |
| <a id="p100021"></a>Порядок | <a id="p100022"></a>Bacillales |
| <a id="p100023"></a>Семейство | <a id="p100024"></a>Paenibacillaceae |
| <a id="p100025"></a>Род | <a id="p100026"></a>Paenibacillus (Ash et al. 1994) |
| <a id="p100027"></a>Вид | <a id="p100028"></a>mucilaginosus |
| <a id="p100029"></a>Штамм | <a id="p100030"></a>Pm 2906 |


<a id="p100031"></a>Paenibacillus (лат.) - род аэробных грамположительных спорообразующих палочковидных бактерий. Ранее представители этого рода входили в рРНК третью группу рода Bacillus, в 1993 году Эш, Прист и Коллинс предложили вывести представителей группы 3 в отдельный род Paenibacillus. Название рода произошло от латинского слова "paene" ("почти") - в названии рода отражено сходство с родом Bacillus (название рода можно буквально перевести как "почти бациллы").
<a id="p100032"></a>Род представлен палочковидными бактериями, образующими термоустойчивые эндоспоры. Некоторые виды подвижны и имеют жгутики. Большинство представителей - мезофилы, есть термофильные представители. Представители рода обитают в почве, ризосфере растений, есть эндофитные представители, колонизирующие ткани растений. Многие представители продуцируют антимикробиальные вещества, проявляющие бактерицидное и фунгицидное действие.
<a id="p100033"></a>Штамм Paenibacillus mucilaginosus Pm 2906 характеризуется следующими культурально-морфологическими признаками: на среде Эшби наблюдаются слизистые, прозрачные, бесцветные или светло-серые колонии, выпуклые или слегка приплюснутые, блестящие с ровными краями.
<a id="p100034"></a>Микроскопически различаются неподвижные крупные палочковидные клетки правильной формы с округлыми краями, располагаются одиночно или парами, окруженные слизистой оболочкой, образуют эндоспоры.
<a id="p100035"></a>Для культивирования используется агаризованная среда Эшби, оптимальная температура (30 +/- 2) °C.
<a id="p100036"></a>Физиолого-биохимические признаки: в качестве углерода усваивает глюкозу, сахарозу, мальтозу, лактозу, гидролизует крахмал. В качестве источника азота может быть использован аммонийный азот, карбамид, нитраты. Штамм обладает способностью растворять нерастворимые или малорастворимые соединения фосфора и калия (трикальцийфосфат, силикаты).
<a id="p100037"></a>Штамм Paenibacillus mucilaginosus Pm 2906 не является зоо- и фитопатогенным, не патогенен для человека (СП 1.3.2322-08), депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под номером ВКПМ В-12259.
<a id="p100038"></a>Предельно допустимая концентрация (ПДК) в воздухе рабочей зоны - 50 000 кл/м3.


## 3. <a id="p100039"></a>Пределы измерений


<a id="p100040"></a>Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 50 до 500 000 клеток в 1 м3 воздуха при доверительной вероятности 0,95.


## 4. <a id="p100041"></a>Методы измерений


<a id="p100042"></a>Прямой метод основан на аспирации из воздуха рабочей зоны бактерий на среду Эшби и подсчете количества выросших колоний по типичным культурально-морфологическим признакам.


## 5. <a id="p100043"></a>Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы


<a id="p100044"></a>При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы, реактивы и питательные среды.


#### <a id="p100045"></a>5.1 Средства измерений



| <a id="p100046"></a>Барометр-анероид с диапазоном измерения атмосферного давления 5 - 790 мм рт. ст. и с пределом допустимой погрешности +/- 2,5 мм рт. ст. | <a id="p100047"></a>ТУ 2504-1799-75 |
| --- | --- |
| <a id="p100048"></a>Весы лабораторные аналитические, наибольший предел взвешивания 110 г, предел допустимой погрешности +/- 0,2 мг | <a id="p100049"></a>ГОСТ Р 53228-08 |
| <a id="p100050"></a>Колбы мерные 2-100-2, 2-250-2, 2-1000-2 | <a id="p100051"></a>[ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) |
| <a id="p100052"></a>Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0, 2,0, 5,0, 10 см3 | <a id="p100053"></a>[ГОСТ 29227-91](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91) |
| <a id="p100054"></a>Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25 и 50 см3 | <a id="p100055"></a>[ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) |
| <a id="p100056"></a>Термометр лабораторный шкальный, пределы измерения 0 - 55 °C | <a id="p100057"></a>ТУ 25-2021.003-88 |
| <a id="p100058"></a>Аспирационный аппарат и устройство для отбора проб воздуха |  |


<a id="p100059"></a>*Примечание.* Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.


#### <a id="p100060"></a>5.2 Вспомогательные устройства и материалы



<table>
<colgroup><col width="70%"><col width="30%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100061"></a>Шкаф сушильный стерилизационный, позволяющий поддерживать температуру (160 +/- 5) °C</td><td><a id="p100062"></a>ТУ 9452-010-00141798-02</td></tr>
<tr><td><a id="p100063"></a>Термостаты, позволяющие поддерживать рабочую температуру (30 +/- 2) °C и (37 +/- 2) °C</td><td><a id="p100064"></a>ТУ 9452-002-00141798-97</td></tr>
<tr><td><a id="p100065"></a>Автоклав электрический</td><td><a id="p100066"></a>ГОСТ 9586-75</td></tr>
<tr><td><a id="p100067"></a>Стерилизаторы паровые медицинские</td><td><a id="p100068"></a><a href="https://bukva.ai/docs/gost-r-en-13060-2011">ГОСТ Р ЕН 13060-11</a>, <a href="https://bukva.ai/docs/gost-r-51935-2002">ГОСТ Р 51935-02</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100069"></a>Дистиллятор</td><td><a id="p100070"></a>ТУ 4952-007-33142130-2000</td></tr>
<tr><td><a id="p100071"></a>Облучатель бактерицидный настенный</td><td><a id="p100072"></a>ТУ 9444-015-03965956-08</td></tr>
<tr><td><a id="p100073"></a>Холодильник бытовой</td><td><a id="p100074"></a>ГОСТ 26678-85</td></tr>
<tr><td><a id="p100075"></a>Микроскоп биологический с иммерсионной системой</td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100076"></a>Лупа с увеличением x 10</td><td><a id="p100077"></a>ГОСТ 25706-83</td></tr>
<tr><td><a id="p100078"></a>Пробирки типов П1, П2</td><td><a id="p100079"></a>ГОСТ 25336-82</td></tr>
<tr><td><a id="p100080"></a>Спиртовки лабораторные стеклянные</td><td><a id="p100081"></a>ГОСТ 23932-90</td></tr>
<tr><td><a id="p100082"></a>Чашки биологические (Петри) или одноразовые из полимерных материалов</td><td><a id="p100083"></a>ГОСТ 23932-90</td></tr>
<tr><td><a id="p100084"></a>Воронки конусные диаметром 40 - 45 мм</td><td><a id="p100085"></a>ГОСТ 25336-82</td></tr>
<tr><td><a id="p100086"></a>Груша резиновая</td><td><a id="p100087"></a>ТУ 9398-005-0576-9082-03</td></tr>
<tr><td><a id="p100088"></a>Петля бактериологическая</td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100089"></a>Марля медицинская</td><td><a id="p100090"></a>ГОСТ 9412-77</td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p100091"></a><a id="p100092"></a>Вата медицинская гигроскопическая<br><a href="https://bukva.ai/docs/gost-5556-81">ГОСТ 25556-81</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100093"></a>Бумага фильтровальная лабораторная</td><td><a id="p100094"></a>ГОСТ 12026-76</td></tr>
<tr><td></td><td><a id="p100095"></a>Примечание. Допускается применение оборудования и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.</td></tr>
</table>



#### <a id="p100096"></a>5.3 Реактивы и питательные среды



<table>
<colgroup><col width="70%"><col width="30%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100097"></a>Агар микробиологический</td><td><a id="p100098"></a><a href="https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-17206-96">ГОСТ 17206-96</a></td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p100099"></a><a id="p100100"></a>Вода дистиллированная<br>ГОСТ 6709-90</td></tr>
<tr><td><a id="p100101"></a>Глюкоза</td><td><a id="p100102"></a><a href="https://bukva.ai/docs/gost-6038-79">ГОСТ 6038-79</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100103"></a>Калий сернокислый, хч</td><td><a id="p100104"></a><a href="https://bukva.ai/docs/gost-4145-74">ГОСТ 4145-74</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100105"></a>Калий фосфорнокислый двузамещенный, хч</td><td><a id="p100106"></a><a href="https://bukva.ai/docs/standart-gost-2493-75">ГОСТ 2493-75</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100107"></a>Кальций углекислый, хч</td><td><a id="p100108"></a><a href="https://bukva.ai/docs/standart-gost-4530-76">ГОСТ 4530-76</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100109"></a>Магний сернокислый, хч</td><td><a id="p100110"></a><a href="https://bukva.ai/docs/gost-4523-77">ГОСТ 4523-77</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100111"></a>Маннит</td><td><a id="p100112"></a>ГОСТ 8321-74</td></tr>
<tr><td><a id="p100113"></a>натрий хлористый, хч</td><td><a id="p100114"></a>ГОСТ 4233-77</td></tr>
<tr><td><a id="p100115"></a>Сахароза</td><td><a id="p100116"></a>ГОСТ 5833-75</td></tr>
<tr><td><a id="p100117"></a>Спирт этиловый технический</td><td><a id="p100118"></a><a href="https://bukva.ai/docs/gost-17299-78">ГОСТ 17299-78</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100119"></a>Спирт этиловый ректификованный</td><td><a id="p100120"></a><a href="https://bukva.ai/docs/gost-r-51652-2000">ГОСТ Р 51652-2000</a> или ГОСТ 18300-87</td></tr>
<tr><td></td><td><a id="p100121"></a>Примечание. Допускается использование других питательных сред и диагностических препаратов с аналогичными характеристиками.</td></tr>
</table>



## 6. <a id="p100122"></a>Требования безопасности


<a id="p100123"></a>При выполнении измерений концентрации штамма в воздухе рабочей зоны соблюдают требования, изложенные в следующих документах.
<a id="p100124"></a>6.1. Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней: СП 1.3.2322-08.
<a id="p100125"></a>6.2. Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней. Дополнения и изменения N 1 к СП 1.3.2322-08; СП 1.3.2518-09.
<a id="p100126"></a>6.3. Правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88.
<a id="p100127"></a>6.4. Электробезопасность при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.
<a id="p100128"></a>Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.


## 7. <a id="p100129"></a>Требования к квалификации операторов


<a id="p100130"></a>К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедших соответствующую подготовку и имеющих навыки работы в области микробиологических исследований.


## 8. <a id="p100131"></a>Условия измерений


<a id="p100132"></a>Приготовление сред, подготовку к анализу проводят в следующих условиях:


| <a id="p100133"></a>- температура воздуха | <a id="p100134"></a>(20 +/- 5) °C; |
| --- | --- |
| <a id="p100135"></a>- атмосферное давление | <a id="p100136"></a>(760 +/- 20) мм рт. ст.; |
| <a id="p100137"></a>- влажность воздуха | <a id="p100138"></a>не более 80%. |



## 9. <a id="p100139"></a>Приготовление питательных сред


<a id="p100140"></a>Для приготовления агаризованной среды Эшби используют компоненты следующего состава: маннит, сахароза или глюкоза - 20,0 г, калий сернокислый - 0,2 г, калий фосфорнокислый двузамещенный - 0,2 г, кальций углекислый - 5,0 г, магний сернокислый - 0,2 г, натрий хлористый - 0,2 г, агар-агар - 15,0 г. Сухие компоненты растворяют в 1 000 см3 дистиллированной воды, тщательно перемешивают и нагревают до полного растворения агара.
<a id="p100141"></a>Приготовленную среду разливают в стерильные колбы по 250 - 500 см3 и автоклавируют при 121 °C в течение 15 мин.
<a id="p100142"></a>Готовые среды хранят в защищенных от света условиях при температуре не выше 8 °C в течение 14 дней, не более.


## 10. <a id="p100143"></a>Проведение измерения



#### <a id="p100144"></a>10.1 Отбор проб воздуха


<a id="p100145"></a>Отбор проб воздуха проводят с учетом требований ГОСТ 12.1.005-88 с изменением N 1 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны" и [ГОСТ 8.563-96](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-329) "Методики выполнения измерений".
<a id="p100146"></a>Для этого воздух аспирируют при помощи пробоотборника на поверхность плотной питательной среды в соответствии с технической документацией (инструкцией) на прибор. Время аспирации и объем отбираемого воздуха зависят от предполагаемой концентрации микроорганизма.
<a id="p100147"></a>Аппарат перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают 96%-м этиловым спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора, наружную и внутреннюю стенки крышки. На подвижный диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо (количество питательной среды в чашки вносят в соответствии с инструкцией к прибору). После отбора пробы воздуха и остановки диска прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.


#### <a id="p100148"></a>10.2 Выполнение анализа


<a id="p100149"></a>При выполнении анализа воздуха агаризованную среду Эшби расплавляют, остужают до 50 - 60 °C и разливают в чашки Петри.
<a id="p100150"></a>Контроль чистоты розлива проводят в соответствии с [п. 7.1.1](https://bukva.ai/docs/muk-4-2-2316-08#p100342) МУК 4.2.2316-08. Для этого чашки с застывшей средой помещают в термостат при температуре 37 °C не менее чем на 18 часов. Проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха. Разлитую в чашки питательную среду хранят при температуре 2 - 8 °C не более 10 дней.
<a id="p100151"></a>После отбора проб воздуха чашки Петри помещают в термостат с температурой (30 +/- 2) °C. Через 1 - 2 суток проводят подсчет выросших колоний по культурально-морфологическим признакам.
<a id="p100152"></a>Ростовые свойства используемой питательной среды должны быть проверены до проведения анализа воздуха в соответствии с требованиями к ростовым свойствам питательных сред, руководствуясь [МУК 4.2.2316-08](https://bukva.ai/docs/muk-4-2-2316-08). Для этого эталонный музейный штамм Paenibacillus mucilaginosus Pm 2906 ВКПМ В-12259 высевается на 2 - 3 чашки используемой среды.
<a id="p100153"></a>Лиофилизованную культуру музейного штамма необходимо использовать 2 - 3 пассажа во избежание потери заданных ей ростовых свойств.


## 11. <a id="p100154"></a>Вычисление результатов измерения


<a id="p100155"></a>Расчет концентрации клеток проводят по формуле:

<a id="p100156"></a> $K = \frac{\text{П } \cdot 1000}{\text{С } \cdot \text{Т}} \text{кл}./\text{м}^{3}$ , где

<a id="p100157"></a>К - концентрация Paenibacillus mucilaginosus Pm 2906 ВКПМ В-12259 в воздухе, кл/м3;
<a id="p100158"></a>П - количество типичных колоний, выросших на чашке Петри;
<a id="p100159"></a>1 000 - коэффициент пересчета на 1 м3 воздуха;
<a id="p100160"></a>С - скорость аспирации воздуха, л/мин;
<a id="p100161"></a>Т - время аспирации, мин.


## 12. <a id="p100162"></a>Оформление результатов измерений


<a id="p100163"></a>Результаты измерений оформляют протоколом по нижеприведенной форме.

<a id="p100164"></a>Протокол N ____
количественного микробиологического анализа Paenibacillus
mucilaginosus Pm 2906 ВКПМ В-12259 в воздухе рабочей зоны

1. <a id="p100165"></a>Дата проведения анализа ________________________________________________
2. <a id="p100166"></a>Рабочее место (профессия работающего) __________________________________
3. <a id="p100167"></a>Место  отбора  пробы  (название   и   адрес  организации,  производство,
   технологическая стадия, точка отбора пробы) ____________________________
4. <a id="p100168"></a>Вид пробоотборника _____________________________________________________
5. <a id="p100169"></a>Дата последней метрологической поверки оборудования для отбора проб ____
6. <a id="p100170"></a>Питательная среда, время инкубации _____________________________________
7. <a id="p100171"></a>Результаты испытания ростовых свойств питательной среды ________________
8. <a id="p100172"></a>Количественная    и   качественная   характеристика   выросших   колоний
   (количество типичных колоний) __________________________________________
9. <a id="p100173"></a>Результаты  идентификации микроорганизмов Paenibacillus mucilaginosus Pm
   2906 ВКПМ В-12259 (микроморфологические признаки) ______________________
10. <a id="p100174"></a>Результаты расчета концентрации штамма ________________________________
11. <a id="p100175"></a>Соотношение полученных результатов с уровнем $\text{ПДК}_{\text{в}.\text{р}.\text{з}.}$ __________________
12. <a id="p100176"></a>Отбор пробы проведен (Ф.И.О., должность, дата, подпись) _______________
    _______________________________________________________________________
13. <a id="p100177"></a>Идентификация   штамма   и   расчет   концентрации  проведены  (Ф.И.О.,
    должность, дата, подпись) _____________________________________________



<a id="p100178"></a>

---