МУК 4.1.4272-26. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств азоксистробина и его геометрического Z-изомера R 230310 в зерне чечевицы, проса, сорго, корнеплодах столовой свеклы и свекольном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания по методам контроля
(утв. Роспотребнадзором 10.04.2026)
Примечание
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте https://www.rospotrebnadzor.ru/ по состоянию на 30.06.2026. Документ введен в действие с 10.09.2026.
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 10 апреля 2026 года
Дата введения 10 сентября 2026 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ АЗОКСИСТРОБИНА И ЕГО ГЕОМЕТРИЧЕСКОГО Z-ИЗОМЕРА R 230310 В ЗЕРНЕ ЧЕЧЕВИЦЫ, ПРОСА, СОРГО, КОРНЕПЛОДАХ СТОЛОВОЙ СВЕКЛЫ И СВЕКОЛЬНОМ СОКЕ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО МЕТОДАМ КОНТРОЛЯ МУК 4.1.4272-26
1. Разработаны ФГБОУ ВО РГАУ — МСХА имени К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России (А.В. Довгилевич, Е.В. Довгилевич, Ю.Н. Савушкин, О.В. Шибика, А.С. Поликарпов, Е.Н. Тестова).
2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой «10» апреля 2026 г.
I. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ И ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ
1.1. Настоящие методические указания по методам контроля (далее — МУК) описывают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее — ВЭЖХ) для определения массовых концентраций азоксистробина и его геометрического Z-изомера R 230310 в зерне чечевицы, проса, сорго, корнеплодах столовой свеклы и свекольном соке в диапазоне 0,01 — 0,10 мг/кг — без учета разбавления и 0,01 — 5,0 мг/кг — с учетом разбавления в 50 раз.
1.2 МУК носят рекомендательный характер.
II. ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА
2.1. Азоксистробин — метил (E)-2-{2-[6-(2-циано-фенокси)пиримидин-4-илокси]фенил}-3-метоксиакрилат <1>. Брутто-формула: C22H17N3O5. CAS № 131860-33-8. Молекулярная масса: 403,4.
<1> В соответствии с классификацией Международного союза теоретической и прикладной химии (ИЮПАК) (англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, далее — IUPAC).
2.2 Физические и химические свойства азоксистробина.
Белое кристаллическое вещество, без запаха. Давление насыщенного пара 1,1 x 10-13 мПа (при температуре плюс 20 °C). Температура плавления плюс 166 °C. Коэффициент распределения в системе октанол/вода: KowlogP = 2,64 (при температуре плюс 25 °C). Растворимость в воде (г/дм3): 6,2 (при pH 5,2); 6,7 (при pH 7,0); 5,9 (при pH 9,2) (при температуре плюс 25 °C). Растворимость в органических растворителях (г/дм3): дихлорметан — 400; ацетонитрил — 340; этилацетат — 130; ацетон — 86; толуол — 55; метанол — 20; н-октанол — 1,40; гексан — 0,057 (при температуре плюс 20 °C).
Гидролитически стабилен в водных растворах при pH 3 — 10 при комнатной температуре, в т.ч. при концентрациях менее 1 мкг/кг.
Основным путем разложения азоксистробина на поверхности почвы является фотолиз с образованием геометрического Z-изомера R 230310.
2.3 Краткая токсикологическая характеристика азоксистробина.
Острая пероральная токсичность (ЛД50) для крыс — более 5000 мг/кг. Острая дермальная токсичность (ЛД50) для крыс — 2000 мг/кг. Острая ингаляционная токсичность (ЛК50) для крыс — от 698 до 962 мг/м3 воздуха (при 4 часовой экспозиции). Не обладает генотоксическим, канцерогенным и нейротоксическим действием.
2.4 Область применения азоксистробина.
Азоксистробин — фунгицид из группы стробилуринов защитного, куративного и искореняющего действия с трансламинарными и системными свойствами. Подавляет прорастание спор и роста мицелия, обладает антиспорулянтной активностью. Эффективен против штаммов патогенных грибов, устойчивых к ингибиторам C14-деметилазы, фениламидам, дикарбоксимидам и бензимидазолам.
2.5. Геометрический Z-изомер азоксистробина R 230310 — метил (Z)-2-{2-[6-(2-цианофенокси)пиримидин-4-илокси] фенил}-3-метоксиакрилат <2>. Брутто-формула: C22H17N3O5. CAS № 143130-94-3. Молекулярная масса: 403,4 г/моль.
2.6. Физические и химические свойства геометрического Z-изомера азоксистробина R 230310.
Желтое кристаллическое вещество, без запаха.
Физико-химические свойства близки к физико-химическим свойствам азоксистробина.
2.7. Краткая токсикологическая характеристика и область применения геометрического Z-изомера азоксистробина аналогичны азоксистробину.
III. ПОГРЕШНОСТЬ ИЗМЕРЕНИЙ
3.1. При соблюдении условий проведения анализа и методики, изложенной в настоящих МУК, погрешность <3> (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.
<3> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст (далее - ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002).
Метрологические характеристики
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Показатель точности (границы относительной погрешности, P = 0,95), \pm \delta , % | Показатель повторяемости (среднеквадратичное отклонение повторяемости), \sigma_{r} , % | Показатель воспроизводимости (среднеквадратичное отклонение воспроизводимости), \sigma_{R} , % | Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определений), r, % | Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в разных лабораториях) R, %, (P = 0,95) |
| Азоксистробин | ||||||
| Зерно чечевицы | 0,01 — 5,0 | 50 | 2,4 | 3,4 | 7 | 9 |
| Зерно проса | 0,01 — 5,0 | 50 | 5,1 | 7,2 | 14 | 20 |
| Зерно сорго | 0,01 — 5,0 | 50 | 6,9 | 9,7 | 19 | 27 |
| Корнеплоды столовой свеклы | 0,01 — 5,0 | 50 | 4,9 | 6,9 | 14 | 19 |
| Свекольный сок | 0,01 — 5,0 | 50 | 5,9 | 8,3 | 16 | 23 |
| Z-изомер R 230310 | ||||||
| Зерно чечевицы | 0,01 — 5,0 | 50 | 3,3 | 4,6 | 9 | 13 |
| Зерно проса | 0,01 — 5,0 | 50 | 5,0 | 7,0 | 14 | 19 |
| Зерно сорго | 0,01 — 5,0 | 50 | 8,4 | 11,8 | 23 | 33 |
| Корнеплоды столовой свеклы | 0,01 — 5,0 | 50 | 5,8 | 8,1 | 16 | 23 |
| Свекольный сок | 0,01 — 5,0 | 50 | 6,7 | 9,3 | 19 | 26 |
| Примечание: диапазон определяемых концентраций, указанный в таблице 3.1, приведен с учетом разбавления образца в 50 раз. | ||||||
IV. МЕТОД ИЗМЕРЕНИЙ
4.1. Измерения массовых концентраций азоксистробина и его Z-изомера R 230310 выполняют методом ВЭЖХ с использованием диодно-матричного детектора.
4.2. Определение азоксистробина и его Z-изомера R 230310 в исследуемой продукции проводится после экстракции веществ из образцов ацетонитрилом, дальнейшей очистки экстракта в системе несмешивающихся растворителей и очистки экстракта на колонке с оксидом алюминия.
4.3 Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы — 1 нг.
4.4. Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение — методом абсолютной калибровки.
4.5. В условиях проведения анализа и методики, изложенной в настоящих МУК, метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором состава подвижной фазы и выбором хроматографических колонок различной полярности.
V. СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, РЕАКТИВЫ, ВСПОМОГАТЕЛЬНОЕ ОБОРУДОВАНИЕ, УСТРОЙСТВА И МАТЕРИАЛЫ
5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы, приведенные в таблицах 5.1 - 5.3.
| Наименование средства измерения | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| Хроматограф жидкостный с диодно-матричным детектором | Внесено в Реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Весы аналитические | Наибольший предел взвешивания 110 г, дискретность 0,0001 г, класс точности специальный (I), ГОСТ OIML R 76-1-2011 |
| Весы лабораторные | Наибольший предел взвешивания 400 г, предел допустимой погрешности +/- 0,3 г, класс точности средний (III), ГОСТ OIML R 76-1-2011 |
| Колбы мерные | Тип 2-10-2, 2-25-2, 2-100-2, 2-250-2, 2-500-2 и 2-1000-2, ГОСТ 1770-74 |
| Меры массы | ГОСТ OIML R 111-1-2009 |
| Пипетки градуированные | Тип 1-2-2-1, 1-2-2-2, 1-2-2-5 и 1-2-2-10, ГОСТ 29227-91 |
| Прибор/приборы для измерения атмосферного давления, температуры и относительной влажности воздуха | Внесено в Реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Цилиндры мерные | Тип 1-10-2, 1-25-2, 1-50-2, 1-100-2, 1-250-2, 1-500-2, 1-1000-2, ГОСТ 1770-74 |
| Примечание: допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками. | |
| Наименование реактивов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| Азоксистробин | Аналитический стандарт с содержанием основного вещества не менее 95,0% |
| R 230310 | Аналитический стандарт с содержанием основного вещества не менее 95,0% |
| Ацетонитрил | Содержание основного вещества не менее 99,8% |
| Вода дистиллированная | ГОСТ Р 58144-2018 |
| Вода для лабораторного анализа | ГОСТ Р 52501-2005 |
| Гелий очищенный | Содержание основного вещества не менее 99,9% |
| н-Гексан | Содержание основного вещества не менее 99% |
| Калий марганцовокислый | Чистый для анализа, ГОСТ 20490-75 |
| Кальций хлористый гранулированный, безводный | Содержание основного вещества не менее 99% |
| Натрий сернокислый | Химически чистый, ГОСТ 4166-76 |
| Натрий хлористый | Химически чистый, ГОСТ 4233-77 |
| Сорбент для твердофазной экстракции на основе оксида алюминия | Нейтральная, размер частиц 50 — 200 мкм |
| Примечание: допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей. | |
Вспомогательное оборудование, устройства и материалы
| Наименование вспомогательного оборудования, устройств и материалов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| Аллонж прямой стеклянный | Тип АО, ГОСТ 25336-82 |
| Банки полипропиленовые с крышками для экстракции | Вместимость 250 см3 |
| Ванна ультразвуковая | Рабочая частота 50 Гц |
| Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная | ГОСТ 5556-2022 |
| Виалы с завинчивающейся или запрессовывающейся крышкой с тефлоновой резиновой прокладкой, для жидких проб | Вместимость 2 см3 |
| Виалы стеклянные с крышкой с тефлоновой прокладкой | Вместимость не менее 40 см3 |
| Воронки делительные | Тип ВД, объем 250 см3, ГОСТ 25336-82 |
| Воронки лабораторные | Тип В, ГОСТ 25336-82 |
| Колбы конические | Тип П или Кн, объем 100 и 250 см3, ГОСТ 25336-82 |
| Колбы круглодонные (для упаривания) | Тип К, Гр или О, объем 100 и 250 см3, ГОСТ 25336-82 |
| Колонка хроматографическая стальная | С сорбентом с привитыми неполярными группами C18; длина 150 мм, внутренний диаметр 4,6 мм, размер частиц 5 мкм |
| Колонки хроматографические, стеклянные или пластиковые для очистки экстракта | Длина 150 — 250 мм, диаметр 15 мм |
| Мельница лабораторная | - |
| Насос мембранный вакуумный | Обеспечивающий вакуум — до 10 мбар |
| Предколонка хроматографическая стальная | С сорбентом с привитыми неполярными группами C18; длина 12,5 мм, внутренний диаметр 4,6 мм, размер частиц 5 мкм |
| Ротационный вакуумный испаритель | С регулируемой скоростью вращения штока, с водяной баней с антикоррозионным покрытием с диапазоном температур плюс 20 — 100 °C |
| Стаканы лабораторные | Тип В, номинальная вместимость 100 — 800 см3, ГОСТ 25336-82 |
| Терка для овощей | - |
| Установка для перегонки растворителей при атмосферном давлении | С круглодонной колбой из термически стойкого стекла типа ТС вместимостью 4000 см3 и приемной конической колбой вместимостью 1000 см3 |
| Фильтры бумажные | Обеззоленные, нейтральные, быстро фильтрующие, типа «Красная лента», диаметром 11 см, зольность одного фильтра 0,00072 г |
| Фильтры мембранные для очистки растворителей | Диаметр 47 мм, размер пор 0,45 мкм |
| Холодильная/морозильная камера | ГОСТ 26678-85 |
| Электроплитка бытовая с закрытой спиралью | ГОСТ 14919-83 |
| Примечание: допускается использование вспомогательного оборудования, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками. | |
VI. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ
6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019-2017, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.
6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009-83. Организуется обучение работников безопасности труда.
6.3. Измерения в соответствии с настоящими МУК может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
VII. УСЛОВИЯ ИЗМЕРЕНИЙ
7.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс 15 — 30 °C и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
VIII. ПОДГОТОВКА К ВЫПОЛНЕНИЮ ИЗМЕРЕНИЙ
8.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: подготовка лабораторной посуды, очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, проверка хроматографического поведения веществ на колонках с оксидом алюминия, установление градуировочных характеристик.
8.2. Подготовка лабораторной посуды. Вся посуда и стеклянное оборудование должны быть тщательно вымыты. Для мойки используют растворы подходящих детергентов. После мойки в растворе любого моющего средства посуду и оборудование промывают водопроводной водой, ополаскивают дистиллированной водой и тщательно высушивают.
8.3 Подготовка и очистка органических растворителей.
8.3.1. Ацетонитрил. Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Ацетонитрил перегоняют при температуре плюс 81,0 — 82,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 81,0 — 82,0 °C, отбрасывают.
8.3.2. Гексан. Гексан, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем гексан сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Гексан перегоняют при температуре плюс 68,5 — 69,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 68,5 — 69,0 °C, отбрасывают.
8.3.3. Бидистиллированная вода. Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 4000 см3 от аппарата для перегонки растворителей, добавляют марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм3 и кипятят в течение 6 часов. Собирают фракции, отогнанные при температуре плюс 99,5 — 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 99,5 — 100,0 °C, отбрасывают.
8.4 Приготовление рабочих растворов.
8.4.1. Приготовление смеси ацетонитрила с бидистиллированной водой в соотношении 1:1 (по объему). В коническую колбу вместимостью 100 см3 помещают 50 см3 ацетонитрила и добавляют 50 см3 бидистиллированной воды. Раствор в колбе перемешивают и используют для приготовления градуировочных стандартов и разведения проб. Раствор хранят при комнатной температуре не более семи дней.
8.4.2. Приготовление 2% водного раствора натрия сернокислого. Переносят (20,0 +/- 0,3) г натрия сернокислого в мерную колбу вместимостью 1000 см3, добавляют 800 см3 дистиллированной воды, помещают колбу в ультразвуковую ванну до полного растворения и доводят водой объем в колбе до метки. Приготовленный раствор используют при экстракции веществ из образцов свекольного сока и хранят при комнатной температуре в течение 12 месяцев.
8.5. Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ. Для приготовления подвижной фазы используют свежеперегнанный ацетонитрил и бидистиллированную воду, которые предварительно фильтруют через мембранные фильтры для очистки растворителей.
В плоскодонную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 500 см3 бидистиллированной воды и 500 см3 ацетонитрила. Смесь тщательно перемешивают.
При использовании градиентного режима хроматографирования компоненты подвижной фазы помещают в разные емкости.
В случае отсутствия в составе хроматографической системы автоматического дегазатора через раствор подвижной фазы пропускают газообразный гелий со скоростью 20 см3/минуту в течение 5 минут, после чего его помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 минуту.
Приготовленный раствор подвижной фазы хранится при комнатной температуре не более пяти дней.
8.6. Приготовление растворов аналитического стандарта азоксистробина и его геометрического Z-изомера R 230310.
8.6.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией азоксистробина 100,0 мкг/см3. Взвешивают (0,0100 +/- 0,0010) г азоксистробина в мерной колбе вместимостью 100 см3. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом.
8.6.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией геометрического Z-изомера азоксистробина R 230310 100,0 мкг/см3. Взвешивают (0,0100 +/- 0,0010) г геометрического Z-изомера азоксистробина R 230310 в мерной колбе вместимостью 100 см3. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом.
Стандартные растворы № 1 — 2 используют для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочных характеристик и хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C в течение 6 месяцев.
8.6.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией азоксистробина и его геометрического Z-изомера R 230310 по 10,0 мкг/см3. В мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают по 1,0 см3 стандартных растворов № 1 — 2, доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор № 3 используют для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочных характеристик и хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C в течение 30 дней.
8.6.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией азоксистробина и его геометрического Z-изомера R 230310 по 1,0 мкг/см3. Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу вместимостью 10 см3 и доводят объем до метки смесью, приготовленной по п. 8.4.1.
8.6.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией азоксистробина и его геометрического Z-изомера R 230310 по 0,5 мкг/см3. Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 5 см3, помещают в мерную колбу вместимостью 10 см3 и доводят объем до метки смесью, приготовленной по п. 8.4.1.
8.6.6. Стандартный раствор № 6 с концентрацией азоксистробина и его геометрического Z-изомера R 230310 по 0,2 мкг/см3. Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 2 см3, помещают в мерную колбу вместимостью 10 см3 и доводят объем до метки смесью, приготовленной по п. 8.4.1.
8.6.7. Стандартный раствор № 7 с концентрацией азоксистробина и его геометрического Z-изомера R 230310 по 0,1 мкг/см3. Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу вместимостью 10 см3 и доводят объем до метки смесью, приготовленной по п. 8.4.1.
8.6.8. Стандартный раствор № 8 с концентрацией азоксистробина и его геометрического Z-изомера R 230310 по 0,05 мкг/см3. Из стандартного раствора № 7 отбирают пипеткой 5 см3, помещают в мерную колбу вместимостью 10 см3 и доводят объем до метки смесью, приготовленной по п. 8.4.1.
Стандартные растворы № 4 — 8 используют для установления градуировочных характеристик и хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C в течение 30 дней.
8.6.9. Стандартные растворы азоксистробина и его геометрического Z-изомера R 230310 по 50,0; 1,0; 0,5; 0,2; и 0,1 мкг/см3 для внесения в контрольные образцы матриц. Методом последовательного разведения ацетонитрилом стандартных растворов № 1 — 2 готовят растворы, содержащие по 50,0; 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см3 каждого вещества, и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы матриц.
Стандартные растворы для внесения хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C в течение 30 дней.
8.7. Установление и контроль стабильности градуировочных характеристик.
8.7.1. Установление градуировочных характеристик. Градуировочную характеристику устанавливают методом абсолютной калибровки по 5 растворам для градуировки, приготовленным по п.п. 8.6.4 - 8.6.8.
В инжектор хроматографа вводят по 20 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.3. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.
8.7.2. Контроль стабильности градуировочных характеристик. Контроль стабильности градуировочных характеристик проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.
При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения растворов для градуировки с концентрацией 0,05 и 1,0 мкг/см3.
Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение (1):
\frac{|X - C| \times 100}{C} \leq 10, (1)
где: X — концентрация азоксистробина и (или) его геометрического Z-изомера R 230310 при контрольном измерении, мкг/см3;
C — известная концентрация азоксистробина и (или) его геометрического Z-изомера R 230310 в градуировочном растворе, мкг/см3;
10 — допустимая величина расхождения градуировочной характеристики, %.
Если величина расхождения превышает 10%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов веществ, предусмотренных настоящими МУК. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново в соответствии с п. 8.7.1.
8.8. Подготовка колонки с оксидом алюминия (3 г) для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения азоксистробина и его геометрического Z-изомера R 230310 на ней.
8.8.1. Подготовка колонки с оксидом алюминия для очистки экстрактов. В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помещают (3,0 +/- 0,3) г оксида алюминия и, аккуратно постукивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента. Непосредственно перед использованием колонку промывают 10 см3 ацетонитрила, слив отбрасывают.
8.8.2. Проверка хроматографического поведения азоксистробина и его геометрического Z-изомера R 230310 на колонке с оксидом алюминия. В круглодонную колбу для упаривания вместимостью 100 см3 вносят 1 см3 стандартного раствора азоксистробина и его геометрического Z-изомера R 230310 в ацетонитриле с концентрацией каждого вещества по 1 мкг/см3 и упаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Сухой остаток растворяют в 10 см3 ацетонитрила, тщательно обмывают стенки колбы и наносят раствор на подготовленную колонку. Элюат собирают в чистую круглодонную колбу для упаривания вместимостью 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Исходную колбу последовательно обмывают двумя порциями по 10 см3 каждая ацетонитрила и вносят их на колонку. Элюат после прохождения каждой порции растворителей собирают в отдельные круглодонные колбы для упаривания вместимостью 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Сухой остаток каждой фракции растворяют в 2 см3 смеси, приготовленной по п. 8.4.1, и 20 мм3 хроматографируют.
Определяют фракции, содержащие азоксистробин и его геометрический Z-изомер R 230310, полноту смывания с колонки и необходимый объем элюента.
Проверку хроматографического поведения азоксистробина и его геометрического Z-изомера R 230310 на колонках с оксидом алюминия следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.
8.9 Подготовка и кондиционирование хроматографической колонки.
Хроматографическую колонку устанавливают в термостат хроматографа и стабилизируют ее при температуре плюс 30 °C в течение 3 — 4 часов, промывая подвижной фазой, приготовленной по п. 8.5 (смесь ацетонитрила с водой в соотношении 50:50, по объему), при скорости подачи растворителя 1,0 см3/минуту.
IX. ОТБОР И ХРАНЕНИЕ ПРОБ
9.1. Отбор проб производится в соответствии с методическими документами <4>, а также документами по стандартизации <5>.
<4> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 № 2051-79; Методические указания по регистрационным испытаниям пестицидов в части биологической эффективности. Общая часть, утвержденные Научно-техническим советом Минсельхоза России, протокол от 08.05.2024 № 12.
<5> ГОСТ 13586.3-2015 «Зерно. Правила приемки и методы отбора проб», введенный приказом Росстандарта от 31.08.2015 № 1236-ст; ГОСТ 10418-88 «Чечевица мелкосеменная. Требования при заготовках и поставках», введенный постановлением Госстандарта СССР от 21.12.1988 № 4357; ГОСТ 8759-92 «Сорго. Требования при заготовках и поставках», введенный постановлением Госстандарта СССР от 17.01.1992 № 28; ГОСТ 22983-2016 «Просо. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 23.11.2016 № 1755-ст; ГОСТ 32285-2013 «Свекла столовая свежая, реализуемая в розничной торговой сети. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 17.12.2013 № 2279-ст; ГОСТ 1722-85 «Свекла столовая свежая, заготовляемая и поставляемая. Технические условия», введенный постановлением Госстандарта СССР от 20.12.1985 № 4419; ГОСТ 32100-2013 «Консервы. Продукция соковая. Соки, нектары и сокосодержащие напитки овощные и овощефруктовые. Общие технические условия», введенный приказом Росстандарта от 28.06.2013 № 331-ст.
9.2. Отобранные пробы зерна чечевицы, проса и сорго подсушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.
9.3. Отобранные пробы корнеплодов столовой свеклы хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре не выше минус 18 °C не более 2 лет.
9.4. Отобранные пробы свекольного сока хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 5 суток.
X. ВЫПОЛНЕНИЕ ИЗМЕРЕНИЙ
10.1 Зерно чечевицы, проса, сорго, корнеплоды столовой свеклы.
10.1.1. Экстракция и очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей. Навеску измельченной матрицы массой (10,0 +/- 0,3) г помещают в полипропиленовую банку для экстракции вместимостью 250 см3, прибавляют 30 см3 ацетонитрила и помещают на 5 минут в ультразвуковую ванну. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр низкой плотности «красная лента» в делительную воронку вместимостью 250 см3. Экстракцию повторяют еще два раза в тех же условиях, используя по 30 см3 ацетонитрила. Экстракты фильтруют, объединяют в делительной воронке вместимостью 250 см3.
К ацетонитрильному экстракту прибавляют 50 см3 гексана и встряхивают делительную воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (гексан) отбрасывают, а нижний слой (ацетонитрил) возвращают в делительную воронку и повторяют процедуру очистки еще раз, используя 50 см3 гексана. Верхний слой (гексан) отбрасывают, а нижний слой (ацетонитрил) собирают в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 250 см3, пропуская его через слой безводного сульфата натрия, и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
10.1.2. Очистка экстракта на колонке с оксидом алюминия. Сухой остаток в колбе, полученный по п. 10.1.1, растворяют в 10 см3 ацетонитрила, тщательно обмывают стенки колбы и вносят раствор на подготовленную по п. 8.8.1 колонку с оксидом алюминия. Элюат собирают в чистую круглодонную колбу для упаривания вместимостью 100 см3.
Исходную колбу обмывают 10 см3 ацетонитрила и вносят раствор на колонку. Элюат собирают, объединяя с предыдущим в круглодонной колбе для упаривания вместимостью 100 см3, и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
10.1.3. Сухой остаток растворяют в 1 см3 смеси, приготовленной по п. 8.4.1, помещают в виалу и анализируют в условиях хроматографирования, указанных в п. 10.3.
10.2 Свекольный сок.
10.2.1. Экстракция. Навеску сока массой (10,0 +/- 0,3) г помещают в стакан вместимостью 100 см3. К навеске сока добавляют 30 см3 2% водного раствора натрия сернокислого, приготовленного по п. 8.4.2, перемешивают и переносят в делительную воронку вместимостью 250 см3.
Азоксистробин и его геометрический Z-изомер экстрагируют двумя порциями ацетонитрила по 50 см3 каждая, встряхивая делительную воронку по 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (ацетонитрил) собирают в коническую колбу вместимостью 250 см3 с 10 г сухого хлористого натрия, перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 10 минут.
Объединенный экстракт из колбы переносят в делительную воронку вместимостью 250 см3 (не растворившуюся соль оставляют в колбе), оставляют до полного разделения слоев и нижний (водный) слой отбрасывают. Верхний (ацетонитрильный) слой промывают двумя порциями гексана по 50 см3 каждая, встряхивая делительную воронку по 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (гексан) отбрасывают, а нижний слой (ацетонитрил) собирают через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 250 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
10.2.2. Далее проводят очистку экстракта в соответствии с п. 10.1.2.
10.2.3. Сухой остаток растворяют в 1 см3 смеси, приготовленной по п. 8.4.1, помещают в виалу и анализируют в условиях хроматографирования, указанных в п. 10.3.
10.3 Условия хроматографирования.
10.3.1. Измерения выполняют на жидкостном хроматографе с диодно-матричным детектором при следующих режимных условиях <6>:
- колонка хроматографическая стальная, заполненная сорбентом с привитыми неполярными группами C18;
- предколонка хроматографическая стальная, заполненная сорбентом с привитыми неполярными группами C18;
- температура колонки: плюс 30 °C;
- подвижная фаза: смесь ацетонитрила с водой в соотношении 50:50 (по объему) при хроматографировании в изократическом режиме;
- скорость потока элюента: 1,0 см3/минуту;
- длина волны: 255 нм;
- чувствительность не менее 10 единиц абсорбции на шкалу;
- объем вводимой пробы: 20 мм3.
<6> Примечание: параметры хроматографирования могут различаться в зависимости от марки и модели прибора.
Образцы, дающие пики больше, чем стандартный раствор азоксистробина и/или его геометрического Z-изомера с концентрацией 1 мкг/см3, соответственно разбавляют смесью, приготовленной по п. 8.4.1, но не более чем в 50 раз. В этом случае разбавление учитывают в конечной формуле расчета содержания азоксистробина и его геометрического Z-изомера в пробах.
XI. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ АНАЛИЗА
11.1. Концентрацию азоксистробина или его геометрического Z-изомера R 230310 в пробах (X, мг/кг) рассчитывают без учета полноты извлечения вещества из проб по формуле (2) <7>:
X_{1} = \frac{A \cdot V \cdot \text{К}_{p}}{m} , (2)
где: A — концентрация азоксистробина или его геометрического Z-изомера R 230310 в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площадей хроматографических пиков, мкг/см3;
V — объем раствора, подготовленного для хроматографирования, см3 (для всей исследуемой продукции равен 1 см3);
m — масса анализируемого образца, г;
Кр — коэффициент разбавления (если экстракт подвергался разбавлению).
<7> Примечание: идентификация и расчет концентрации вещества в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.
11.2 Проверка приемлемости результатов параллельных определений.
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости, условие (3):
\frac{2*|X_{1} - X_{2}|*100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r, (3)
где: X1, X2 - результаты параллельных определений, мг/кг;
r — значение предела повторяемости (таблица 3.1), где r = 2,8 \cdot \sigma_{r} .
При невыполнении условия (3) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
XII. ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ
12.1 Результат анализа представляют в виде выражения (4):
(\overline{X} \pm \Delta),\text{мг}/\text{кг} , при вероятности P = 0,95, (4)
где: \overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг, рассчитанная по формуле (5):
\Delta = \delta \cdot \overline{X}/100, (5)
где: \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 3.1), %.
Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.
Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: «содержание азоксистробина или его геометрического Z-изомера R 230310 в пробе — менее 0,01 мг/кг» <8>.
<8> Примечание: 0,01 мг/кг — предел количественного определения концентрации азоксистробина или его геометрического Z-изомера R 230310 в исследуемой продукции.
XIII. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ
13.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с документами по стандартизации <9>.
<9> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002; ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст.
Периодичность и формы контроля определяются системой менеджмента качества лаборатории.
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ССЫЛКИ
1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».
2. Федеральный закон от 19.07.1997 № 109-ФЗ «О безопасном обращении с пестицидами и агрохимикатами».
3. Методические указания по регистрационным испытаниям пестицидов в части биологической эффективности. Общая часть.
4. ГОСТ Р 8.563-2009 «Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений».
5. ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения».
6. ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений».
7. ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений».
8. ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений».
9. ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений».
10. ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике».
11. ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».
12. ГОСТ 12.1.019-2017 «Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
13. ГОСТ 12.1.004-91 «Пожарная безопасность. Общие требования».
14. ГОСТ 12.4.009-83 «Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».
15. ГОСТ OIML R 76-1-2011 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».
16. ГОСТ OIML R 111-1-2009 «Гири классов E1, E2, F1, F2, M1, M1-2, M2, M2-3 и M3. Часть 1. Метрологические и технические требования».
17. ГОСТ 1770-74 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».
18. ГОСТ 29227-91 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».
19. ГОСТ 25336-82 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».
20. ГОСТ 26678-85 «Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия».
21. ГОСТ 14919-83 «Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия».
22. ГОСТ Р 58144-2018 «Вода дистиллированная. Технические условия».
23. ГОСТ Р 52501-2005 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».
24. ГОСТ 5556-81 «Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия».
25. ГОСТ 20490-75 «Калий марганцовокислый. Технические условия».
26. ГОСТ 4166-76 «Натрий сернокислый. Технические условия».
27. ГОСТ 4233-77 «Натрий хлористый. Технические условия».
28. ГОСТ 13586.3-2015 «Зерно. Правила приемки и методы отбора проб».
29. ГОСТ 10418-88 «Чечевица мелкосеменная. Требования при заготовках и поставках».
30. ГОСТ 8759-92 «Сорго. Требования при заготовках и поставках».
31. ГОСТ 22983-2016 «Просо. Технические условия».
32. ГОСТ 32285-2013 «Свекла столовая свежая, реализуемая в розничной торговой сети. Технические условия».
33. ГОСТ 1722-85 «Свекла столовая свежая, заготовляемая и поставляемая. Технические условия».
34. ГОСТ 32100-2013 «Консервы. Продукция соковая. Соки, нектары и сокосодержащие напитки овощные и овощефруктовые. Общие технические условия».
35. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов.