МУК 4.1.3792-22. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточного содержания стероидных гормонов в рыбе и морепродуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с масс-спектрометрическим анализом (ВЭЖХ-МС/МС). Методические указания
Актуально на 31.10.2026.
Как цитировать: "МУК 4.1.3792-22. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточного содержания стероидных гормонов в рыбе и морепродуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с масс-спектрометрическим анализом (ВЭЖХ-МС/МС). Методические указания". МУК 4.1.3792-22. https://bukva.ai/docs/muk-4-1-3792-22
(утв. Роспотребнадзором 27.10.2022)
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 27 октября 2022 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНОГО СОДЕРЖАНИЯ СТЕРОИДНЫХ ГОРМОНОВ В РЫБЕ И МОРЕПРОДУКТАХ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ В СОЧЕТАНИИ С МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКИМ АНАЛИЗОМ (ВЭЖХ-МС/МС)
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.3792-22
Методические указания разработаны ФГБУН «Федеральный исследовательский центр питания, биотехнологии и безопасности пищи» (В.А. Тутельян, Д.Б. Никитюк, С.А. Хотимченко, И.Е. Соколов, О.В. Багрянцева, З.Г. Гурэу, А.Д. Малинкин, А.И. Колобанов); ФГАОУ ВО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет) (Е.В. Елизарова).
I. Общие положения и область применения
1.1. Настоящие методические указания (далее — МУК) устанавливают методику определения остаточных количеств стероидных гормонов в рыбе, используемых в процессе ее выращивания в условиях аквакультуры и прудах в соответствии с законодательными требованиями по использованию водных объектов рыбохозяйственного значения для целей рыболовства <1>, методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее — ВЭЖХ) в сочетании с масс-спектрометрическим анализом (далее — ВЭЖХ-МС/МС).
<1> Федеральный закон от 02.07.2013 № 148-ФЗ «Об аквакультуре (рыбоводстве) и о внесении изменений в отдельные законодательные акты Российской Федерации».
1.2. МУК предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, а также могут быть использованы для производственного контроля испытательными лабораториями, аккредитованными в установленном порядке <2>.
<2> Федеральный закон от 28.12.2013 № 412-ФЗ «Об аккредитации в национальной системе аккредитации»; Решение Совета Евразийской экономической комиссии от 05.12.2018 № 100 «О Порядке включения аккредитованных органов по оценке соответствия (в том числе органов по сертификации, испытательных лабораторий (центров)) в единый реестр органов по оценке соответствия Евразийского экономического союза, а также его формирования и ведения».
1.3 МУК носят рекомендательный характер.
II. Физико-химические свойства стероидных гормонов
2.1. Эстрон — женский половой стероидный гормон. Систематическое название — 1,3,5-эстратриен-3-ол-17-он <3>. Химическая формула: C18H22O2. Молекулярный вес: 270,37 г/моль. Регистрационный номер CAS: 53-16-7. Синонимы: 3-Hydroxy-1,3,5(10)-estratrien-17-one; 1,3,5(10)-Estratrien-3-ol-17-one; Folliculin.
<3> В соответствии с Международным союзом теоретической и прикладной химии (англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC, далее — ИЮПАК).
Дигидротестостерон — биологически более активная форма стероидного гормона тестостерона. Систематическое название — 5\alpha - \text{дигидротестостерон} - D3 (16,16,17-D3) <4>. Химическая формула: C19H30O2. Молекулярный вес: 290,45 г/моль. Регистрационный номер CAS: 521-18-6.
17\alpha - \text{метилтестостерон} — синтетический стероидный гормон, метилпроизводное тестостерона. Систематическое название — 17-метилтестостерон, 17\alpha - \text{метиландростен} - 4 - \text{ол} - 17\beta - \text{он} - 3 <5>. Химическая формула: C20H30O2. Молекулярный вес: 302,45 г/моль. Регистрационный номер CAS: 58-18-4. Синонимы: Mesterone; 17\alpha - Methyl - 4 - androsten - 17\beta - ol - 3 - one ; 17\beta - Hydroxy - 17\alpha - methyl - 4 - androsten - 3 - one ; Methyltestosterone.
Местанолон — андроген, анаболический стероидный гормон. Химическая формула C20H32O2. Молекулярный вес: 304,47 г/моль. Регистрационный номер CAS: 521-11-9. Синонимы: Methylandrostanolone, Mestanolone, 5\alpha - Androstane - 17\alpha - methyl - 17\beta - ol - 3 - one , 17\alpha - Methyldihydrotestosterone , 17\beta - Hydroxy - 17\alpha - methyl - 5\alpha - androstan - 3 - one , Mestaline, 17\alpha - Methylandrostan - 17\beta - ol - 3 - one .
Химические названия и химические формулы веществ изображены на рис. 1.
Рис. 1. Структурные формулы эстрона, дигидростерона, 17\alpha - \text{метилстерона} , местанолона
III. Метод измерений
3.1. Метод основан на экстракции стероидных гормонов из гомогенизированного мяса рыбы раствором муравьиной кислоты в ацетонитриле с последующей твердофазной экстракцией и дериватизацией раствором гидроксиламина в метиловом спирте. Количественное определение производных гормонов производится при помощи метода ВЭЖХ-МС/МС с использованием внешней калибровки.
IV. Метрологические характеристики
4.1. При соблюдении всех регламентируемых условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерения при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.
Метрологические характеристики
V. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в табл. 2 - 4.
| Наименование средств измерения | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
|---|---|
| Хроматограф жидкостный с масс-спектрометрическим детектором | Внесено в реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Весы лабораторные аналитические | Наибольший предел взвешивания 110 г, дискретность 0,0001 г, класс точности специальный (I) по ГОСТ Р 53228 |
| Дозаторы медицинские лабораторные | ДПОП-1-10-100, ДПОП-1-100-1000, ДПОП-1-1000-10000 по ГОСТ 28311 |
Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
Вспомогательное оборудование и материалы
| Наименование вспомогательного оборудования, устройств, материалов | Обозначение документов, технических характеристик |
|---|---|
| Центрифуга лабораторная термостатируемая | С максимальной скоростью не менее 14000 об/мин для микроцентрифужных пробирок объемом 1,5 — 2 см3 и не менее 7000 об/мин для центрифужных пробирок объемом 15, 50 см3. Диапазон рабочих температур от плюс 4 до 25 °C |
| Пробирки центрифужные | Полипропиленовые с винтовой крышкой вместимостью 15 и 50 см3 |
| Пробирки микроцентрифужные типа «Эппендорф» | Полипропиленовые с герметичной крышкой вместимостью от 1,5 до 2 см3 |
| Гомогенизатор лабораторный | - |
| Концентратор лабораторный | Концентрирование в токе азота. Максимальная рабочая температура не менее плюс 40 °C |
| Ложки и шпатели | По ГОСТ 9147 |
| Хроматографическая колонка | Заполненная обращенно-фазным сорбентом C18, зернение не более 3,5 мкм |
| Наконечники для дозаторов медицинских лабораторных | Номинальный объем 0,01 — 0,1 см3; 0,05 — 1 см3; 1 — 10 см3 |
| Хроматографические виалы | С винтовой крышкой, вместимостью 2 см3 |
| Перемешивающее устройство типа «вортекс» | Диапазон вращающего момента не меньше 1000 — 3000 об/мин |
| Лабораторный мультиротатор | С программируемыми типами вращения |
| Шейкер-инкубатор | Максимальная рабочая температура не менее плюс 40 °C |
| Ультразвуковая ванна | Частота не менее 35 Гц |
| Колбы мерные | Тип 2-10-2, 2-100-2, 2-1000-2 по ГОСТ 1770 |
| Холодильник комбинированный лабораторный | Минимальная температура в холодильной камере не выше плюс 4 °C Минимальная температура в морозильной камере не выше минус 25 °C |
Примечание. Допускается использование вспомогательных средств измерений, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
| Наименование реактивов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| 1 | 2 |
| Азот газообразный | Особой чистоты (далее — ОСЧ) (I и II сорт) по ГОСТ 9293 |
| Аргон в баллонах | По нормативным документам |
| Ацетонитрил для хроматографии | ОСЧ |
| Вода для лабораторного анализа Бидистиллированная по ГОСТ 52501 | |
| Метиловый спирт для хроматографии | ОСЧ |
| Муравьиная кислота для хроматографии | Чистый для анализа (далее — ЧДА) |
| Натрий хлористый (NaCl) | ХЧ по ГОСТ 4233 |
| Магний сернокислый (MgSO4) | ХЧ по ГОСТ 4523 |
| Гидроксиламина гидрохлорид (NH2OH·HCl) | ЧДА по ГОСТ 5456 |
| Первичные и вторичные амины (PSA) | Средний размер частиц не более 40 мкм |
| Силикагель с привитыми октадецильными группами C18 (C18) | Средний размер частиц не более 40 мкм |
| Эстрон (аналитический стандарт) | Содержание основного вещества не менее 98,0% |
| Дигидротестостерон (аналитический стандарт) | Содержание основного вещества не менее 99,5% |
| 17\alpha - \text{метилтестостерон} (аналитический стандарт) | Содержание основного вещества не менее 97,4% |
| Местанолон (аналитический стандарт) | Содержание основного вещества не менее 98,0% |
| Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей. | |
VI. Безопасность проведения измерений и квалификация операторов
6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать технику безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также технику безопасности, изложенную в технической документации на прибор.
6.2. Помещение должно соответствовать пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.
6.3. Помещение, в котором проводится определение стероидных гормонов, оборудуется приточно-вытяжной вентиляцией. Все операции по подготовке образцов к анализу необходимо проводить в вытяжном шкафу. Анализ содержания стероидных гормонов в подготовленных образцах проводится в специализированном проветриваемом помещении, оснащенном вытяжкой, при температуре не более плюс 25 °C с целью защиты дыхания.
6.4. К выполнению измерений и обработке их результатов допускают специалистов, имеющих высшее или среднее специальное образование, имеющих опыт работы в химико-аналитической лаборатории. Измерения в соответствии с настоящими методическими указаниями может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе с масс-спектрометрическим детектором, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
VII. Отбор проб
7.1. Отбор проб рыбы для проведения анализа осуществляется по ГОСТ 31339. Подготовка к анализу средней пробы рыбы (свежая, охлажденная, мороженая) осуществляется по ГОСТ 7636.
VIII. Условия измерений
8.1 Условия проведения измерений.
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс 15 — 30 °C и относительной влажности не более 85%;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе и масс-спектрометре проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к приборам.
IX. Подготовка к выполнению измерений
9.1 Приготовление компонентов подвижной фазы для ВЭЖХ.
9.1.1 Приготовление компонента A подвижной фазы.
Для приготовления компонента A подвижной фазы (0,1%-й (объем) раствор муравьиной кислоты в воде): в мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 300 — 400 см3 бидистиллированной воды, вносят 1 см3 муравьиной кислоты, перемешивают, доводят водой до метки, вновь перемешивают.
Приготовленный раствор подвижной фазы хранят при температуре плюс 4 — 8 °C не более пяти рабочих дней.
9.1.2 Приготовление компонента B подвижной фазы.
Для приготовления компонента B подвижной фазы (0,1%-й (объем) раствор муравьиной кислоты в метиловом спирте): в мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 300 — 400 см3 метилового спирта, вносят 1 см3 муравьиной кислоты, перемешивают, доводят метиловым спиртом до метки, вновь перемешивают.
Приготовленный раствор подвижной фазы хранят при температуре плюс 4 — 8 °C не более 1 месяца.
9.2 Приготовление растворов.
9.2.1. Приготовление раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле с объемной долей 1% (1%-й раствор).
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 30 — 40 см3 ацетонитрила, вносят 1 см3 муравьиной кислоты, перемешивают, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают.
Приготовленный раствор подвижной фазы хранят при температуре плюс 4 — 8 °C не более 1 месяца.
9.2.2. Приготовление 100 мМ раствора гидроксиламина гидрохлорида в метиловом спирте.
В мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят 0,07 г гидроксиламина гидрохлорида, помещают 3 — 4 см3 метилового спирта, перемешивают, доводят метиловым спиртом до метки, вновь перемешивают.
Приготовленный раствор хранят при температуре плюс 4 — 8 °C не более 1 месяца.
9.2.3 Подготовка сернокислого магния.
Используемый при проведении экстракции в качестве сорбента сернокислый магний в пределах срока годности необходимо высушивать для удаления влаги. Сорбент прокаливают при температуре плюс 180 — 200 °C в течение 6 — 10 часов и хранят в эксикаторе над безводным хлористым кальцием.
Критерием годности реактива служит отсутствие дополнительного водного слоя при проведении стадии экстракции до температуры плюс 30 — 40 °C и через 2 — 3 минуты перемешивания реакционной массы.
9.3. Приготовление индивидуальных, стоковых и градуировочных растворов, матричных градуировочных стандартов.
9.3.1. Приготовление индивидуальных стандартных растворов стероидных гормонов.
Для приготовления индивидуальных стандартных растворов стероидных гормонов эстрона, дигидротестостерона, 17\alpha - \text{метилтестостерона} и местанолона в ацетонитриле с концентрацией 1 мг/см3 в мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят 10 мг каждого стандартного образца стероидных гормонов, помещают 3 — 4 см3 ацетонитрила, перемешивают, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают.
Индивидуальные стандартные растворы стероидных гормонов хранят при температуре минус 24 — 18 °C не более 6 месяцев.
9.3.2 Приготовление стокового раствора стероидных гормонов.
Для приготовления стокового раствора стероидных гормонов эстрона, дигидротестостерона, 17\alpha - \text{метилтестостерона} и местанолона в ацетонитриле с концентрацией 10 мкг/см3 в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 3 — 4 см3 ацетонитрила, 0,1 см3 каждого стандартного раствора (по п. 9.3.1), перемешивают, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают.
Стоковый раствор стероидных гормонов хранят при температуре минус 24 — 18 °C не более 3 месяцев.
9.3.3 Приготовление градуировочных растворов стероидных гормонов.
Градуировочные растворы стероидных гормонов эстрона, дигидротестостерона, 17\alpha - \text{метилтестостерона} и местанолона в ацетонитриле с концентрацией 10, 20, 50, 100, 200, 400 и 500 нг/см3 готовятся последовательным разведением стокового раствора (по п. 9.3.2) в микроцентрифужных пробирках объемом 1,5 — 2 см3. Для построения градуировочной кривой необходимо не менее 6 контрольных точек.
Градуировочные растворы стероидных гормонов хранят при температуре плюс 4 — 8 °C не более 1 дня.
9.3.4. Приготовление матричных градуировочных стандартов стероидных гормонов.
Для построения градуировочной характеристики берут «чистые» пробы, не содержащие определяемые аналиты более 0,2 мкг/кг (например, мясо морских рыб (минтай, треска, горбуша)). Пробу измельчают в лабораторном гомогенизаторе до однородного состояния. Добавляют градуировочные растворы стероидных гормонов в ацетонитриле (по п. 9.3.3) из расчета 0,1 см3 на каждые 5 г образца с перемешиванием 1 мин на устройстве типа «вортекс».
Матричные градуировочные стандарты хранят при температуре плюс 4 — 8 °C не более 1 дня.
9.4 Контроль стабильности градуировочной характеристики.
9.4.1 Контроль стабильности градуировочной характеристики.
Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов. При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух матричных градуировочных стандартов, содержание стероидных гормонов в которых входит в диапазон линейности градуировочной характеристики от 0,2 — 10 мкг/кг. Градуировочная зависимость считается стабильной, если рассчитанное значение квадрата коэффициента корреляции для градуировочной кривой составляет не менее 0,99.
9.4.2 Построение градуировочной кривой.
Построение градуировочной кривой проводится по отношению площади хроматографического пика фрагментного иона (S., I*сек) к массовой концентрации (мкг/кг) в 6 градуировочных стандартах по п. 10.2. Зависимость линейная, взвешивание равное (рис. 2 - 5). Построение графиков может проводиться при помощи встроенной программы обработки данных ВЭЖХ-МС/МС или при помощи других программ расчета градуировочных характеристик.
Рис. 2. Градуировочная кривая стероидного гормона эстрона, построенная по отношению площади хроматографического пика (S., I*сек) фрагментного иона 253 Да к массовой концентрации (мкг/кг)
Рис. 3. Градуировочная кривая стероидного гормона дигидротестостерона, построенная по отношению площади хроматографического пика (S., I*сек) фрагментного иона 255 Да к массовой концентрации (мкг/кг)
Рис. 4. Градуировочная кривая стероидного гормона 17\alpha - \text{метилтестостерона} , построенная по отношению площади хроматографического пика (S., I*сек) фрагментного иона 124 Да к массовой концентрации (мкг/кг)
Рис. 5. Градуировочная кривая стероидного гормона местанолона, построенная по отношению площади хроматографического пика (S., I*сек) фрагментного иона 229 Да к массовой концентрации (мкг/кг)
9.5 Подготовка проб рыбы к анализу.
9.5.1. Навеску проб рыбы, измельченных с помощью гомогенизатора градуировочного стандарта, массой 5 г помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см3. Вносят 10 см3 бидистиллированной воды, перемешивают и помещают в ультразвуковую ванну на 20 минут. Добавляют 10 см3 раствора ацетонитрила (по п. 9.2.1) и перемешивают в течение 30 мин на лабораторном мультиротаторе. В пробу добавляют 1 г NaCl и 4 г MgSO4 (по п. 9.2.3). После добавления солей смесь интенсивно перемешивают в течение 2 мин. Затем пробу центрифугируют в течение 5 мин со скоростью не менее 3500 об/мин при температуре плюс 4 °C. Аликвоту экстракта объемом 6 см3 с помощью пипеточного дозатора помещают в центрифужную пробирку объемом 15 см3, содержащую 150 мг первичных и вторичных аминов (PSA) и 150 мг C18. Перемешивают в течение 1 мин на перемешивающем устройстве типа «вортекс» и центрифугируют в течение 5 мин со скоростью не менее 7000 об./мин при комнатной температуре. Аликвоту экстракта объемом 5 см3 с помощью пипеточного дозатора помещают в центрифужную пробирку объемом 15 см3 и упаривают досуха в лабораторном концентраторе при температуре плюс 40 °C. Затем добавляют 0,5 см3 раствора гидроксиламина гидрохлорида (по п. 9.2.2), перемешивают в течение 1 мин на перемешивающем устройстве типа «вортекс» и инкубируют при температуре плюс 40 °C в течение 20 мин в шейкере-инкубаторе. После инкубации полученный раствор повторно упаривают в лабораторном концентраторе досуха и перерастворяют в 1 см3 ацетонитрила. Помещают в ультразвуковую ванну на 5 мин, затем перемешивают в течение 1 мин на перемешивающем устройстве типа «вортекс». С помощью пипеточного дозатора аликвоту объемом не менее 0,8 см3 помещают в микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 — 2 см3 и центрифугируют в течение 5 мин со скоростью не менее 14000 об/мин при температуре плюс 4 °C. Затем с помощью пипеточного дозатора аликвоту объемом не менее 0,5 см3 помещают в хроматографическую виалу для проведения ВЭЖХ-МС/МС анализа. В инжектор хроматографа вводят не менее 0,005 см3 каждого экстракта в двух повторах и анализируют в условиях по п. 10.2.
X. Проведение измерений
10.1. Для осуществления хроматографического анализа используют жидкостной хроматограф, снабженный бинарным насосом, автосамплером и термостатом колонок. Для осуществления масс-спектрометрического анализа используют подключенный к выходу из хроматографической колонки масс-спектрометр с детектором типа «тройной квадруполь».
10.1.1 Условия проведения измерений ВЭЖХ-МС/МС.
Условия проведения ВЭЖХ-МС/МС измерения приведены в табл. 5.
Условия проведения измерении ВЭЖХ-МС/МС
| Параметр | Значение |
| Бинарный насос | |
| - Состав подвижной фазы | A — водный раствор муравьиной кислоты 0,1% B — метанольный раствор муравьиной кислоты 0,1% |
| - Режим элюирования | Градиентное элюирование: 0 мин — 20% B; 4 мин — 100% B; 8 мин — 100% B; 9 мин — 20% B; 13 мин — 20% B |
| - Скорость потока | 0,4 см3/мин |
| Рабочие параметры: | |
| Температура термостата | 40 °C |
| Объем вводимой пробы | 0,005 см3 |
| Измерение масс <*> | |
| - Источник ионизации | Прогреваемый электроспрей |
| - Режим ионизации | Регистрация положительных ионов |
| - Детектируемые массы, Да | Эстрон [M+NH+H]+: 286 -> 253, 286 -> 157; Дигидротестостерон [M+NH+H]+: 306 -> 255, 306 -> 159; 17\alpha - \text{метилтестостерон} [M+NH+H]+: 318 -> 124, 318 -> 112; Местанолон [M+NH+H]+: 320 -> 229, 320 -> 213 |
| Примечание. <*> Детектирование проводится методом регистрации множественных реакций (англ. Multiple reaction monitoring, MRM). Для стероидных гормонов измеряется сигнал двух фрагментных ионов. Первый, более интенсивный, пик служит для количественного определения концентрации гормонов в рыбе, второй используется для подтверждения правильности определения. Энергия соударения (англ. Collision energy, CE) подбирается экспериментально с использованием стандартного образца. Критерием правильности подбора является достижение максимальной интенсивности каждого из фрагментов. | |
XI. Обработка результатов измерений
11.1 Обработка полученных результатов.
В соответствии с данными, полученными при анализе градуировочных растворов, проводят количественную обработку хроматограмм с использованием программного обеспечения. Метод обработки хроматограмм — внешний стандарт. При матричной градуировке пересчет полученного результата не требуется.
11.2 Расчет содержания стероидных гормонов в образцах.
Массовую долю стероидных гормонов в пробе рыбы (X1, мкг/кг) вычисляют по линейному уравнению вида y = ax + b при помощи встроенной программы обработки данных ВЭЖХ-МС/МС или при помощи других программ расчета градуировочных характеристик.
XII. Проверка приемлемости результатов
12.1. За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:
\frac{2 \cdot |\text{Х}_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(\text{Х}_{1} + X_{2})} \leq r,
где X1, X2 - результаты параллельных определений, мкг/кг;
r — значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8 \cdot \sigma r .
При превышении расчетного значения предела повторяемости (r), измерение следует провести заново, используя свежеприготовленную пробу.
XIII. Оформление результатов
13.1 Результат анализа содержания стероидных гормонов представляют в виде:
(\overline{X} \pm \Delta),\text{мкг}/\text{кг} при вероятности P = 0,95,
где \overline{\text{Х}} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мкг/кг;
\Delta — граница абсолютной погрешности, мкг/кг,
\Delta = \frac{\delta\text{Х}}{100} ,
где \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций (табл. 1), %.
В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: «содержание вещества в пробе — менее 0,2 мкг/кг».
XIV. Контроль качества результатов измерений
14.1. Контроль качества результатов измерений в лаборатории при реализации методики осуществляют по ГОСТ Р ИСО 5725 (1 — 6). Периодичность и формы контроля определяются руководством по качеству.
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ССЫЛКИ
1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».
2. Федеральный закон от 02.06.2013 № 148-ФЗ «Об аквакультуре (рыбоводстве) и о внесении изменений в отдельные законодательные акты Российской Федерации».
3. Технический регламент таможенного союза «О безопасности пищевой продукции» (ТР ТС 021/2011).
4. СанПиН 1.2.3685-21 «Гигиенические нормативы и требования к обеспечению безопасности и (или) безвредности для человека факторов среды обитания».
5. ГОСТ 12.0.004 «Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения».
6. ГОСТ 12.1.004 «Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования».
7. ГОСТ 12.1.007 «Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».
8. ГОСТ 12.1.019 «Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
9. ГОСТ 12.4.009 «Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».
10. ГОСТ 1770 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».
11. ГОСТ 25336 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».
12. ГОСТ 28311 «Дозаторы медицинские лабораторные. Общие технические требования и методы испытаний».
13. ГОСТ 31339 «Рыба, нерыбные объекты и продукция из них. Правила приемки и методы отбора проб».
14. ГОСТ 4233 «Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия».
15. ГОСТ 4523 «Реактивы. Магний серно-кислый 7-водный. Технические условия».
16. ГОСТ 5456 «Реактивы. Гидроксиламина гидрохлорид. Технические условия».
17. ГОСТ 7636 «Рыба, морские млекопитающие, морские беспозвоночные и продукты их переработки. Методы анализа».
18. ГОСТ 9147 «Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия».
19. ГОСТ Р 52501 (ИСО 3696:1987) «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».
20. ГОСТ Р 53228 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».
21. ГОСТ Р ИСО 5725 (1 — 6) «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».