МУК 4.1.3417-17. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств хлорантранилипрола в зеленой массе растений, семенах сои и подсолнечника, в зерне кукурузы и гороха и в растительных маслах методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания

(утв. Роспотребнадзором 14.02.2017)

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 14 февраля 2017 года

4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ХЛОРАНТРАНИЛИПРОЛА В ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ РАСТЕНИЙ, СЕМЕНАХ СОИ И ПОДСОЛНЕЧНИКА, В ЗЕРНЕ КУКУРУЗЫ И ГОРОХА И В РАСТИТЕЛЬНЫХ МАСЛАХ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.3417-17

1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом — МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России (А.В. Довгилевич, О.И. Рыбакова, П.В. Рязанцев, Е.Н. Тестова).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 22 декабря 2016 г. № 2).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 14 февраля 2017 г.

4. Введены впервые.

Свидетельство о метрологической аттестации МВИ № РОСС RU.0001.310430/0253.12.02.2016 от 12.02.2016 г.

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода капиллярной газожидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств хлорантранилипрола в зеленой массе растений, семенах сои и подсолнечника, зерне кукурузы и гороха и в растительных маслах в диапазоне 0,01 — 0,1 мг/кг.

Методические указания носят рекомендательный характер.

Хлорантранилипрол

Название по ИЮПАК: 3-бром-4'-хлор-1-(3-хлор-2-пиридил)-2'-метил-6'-(метилкарбамоил) пиразол-5-карбоксанилид.

Эмпирическая формула: C₁₈H₁₄BrC₂N₅O₂.

Молекулярная масса: 483,15.

Агрегатное состояние: мелкий порошок.

Цвет, запах: белого цвета без запаха.

Структурная формула:

Давление насыщенного пара 6,3 x 10-9 МПа при 25 °C.

Коэффициент распределения в системе октанол/вода при pH 7 и 20 °C: logP Kow = 2,76.

Растворимость в воде (мг/дм3): при pH 4 — 0,972; при pH 7 — 0,88; при pH 9 — 0,971.

Растворимость в органических растворителях (мг/дм3): в ацетоне — 3 446, в метаноле — 1 714, в этилацетате — 1 144, в ацетонитриле — 710.

Хлорантранилипрол быстро разлагается на свету. Полураспад при фотолизе в стерильном буфере pH 7 составляет 0,37 дней при постоянном освещении. При естественном освещении фотолиз хлорантранилипрола медленнее, ДТ50 33 дня.

Вещество долго сохраняется в почве с ДТ50 в лаборатории 200 дней, в поле от 3 до 12 месяцев. Под покровом культур разрушается быстрее.

Стабилен при хранении в течение 2 лет.

Краткая токсикологическая характеристика. Ципросульфамид относится к мало опасным по острой оральной (ЛД50 для крыс более 5 000 мг/кг) и дермальной токсичности (ЛД50 для крыс более 5 000 мг/кг), но к умеренно опасным веществам по ингаляционной токсичности (ЛК50 для крыс (4 часа) более 5 100 мг/дм3).

Область применения. Хлорантранилипрол — инсектицид кишечного действия, нарушающий баланс кальция в миофибриллах мускулов насекомых. Высокоэффективен против широкого спектра чешуекрылых, жесткокрылых, двукрылых вредителей (плодожорки, моли, листовертки, колорадский жук, калифорнийская щитовка, хлопковая совка, кукурузный стеблевой мотылек и др.).

Применяется для защиты кукурузы, сои и подсолнечника от вредителей с нормой расхода 0,02 — 0,03 кг д.в./га, с максимальной кратностью обработок 2. Применяется для борьбы с грызущими насекомыми с нормой расхода 0,01 — 0,06 кг д.в./га в зависимости от культуры в посадках картофеля, винограда, яблоневых садах.

В России установлены следующие гигиенические нормативы:

ДСД — 2,0 мг/кг массы тела человека;

ОДК в почве — 0,2 мг/кг;

ПДК в воде водоемов — 0,2 мг/дм3;

ОБУВ в воздухе рабочей зоны — 1,5 мг/м3;

ОБУВ в атмосферном воздухе — 0,007 мг/м3;

ВМДУ в продукции (мг/кг): зерно хлебных злаков — 0,02.

1. Погрешность измерений

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

Метрологические параметры для хлорантранилипрола

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Таблица 2

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для хлорантранилипрола

2. Метод измерения

Метод основан на определении хлорантранилипрола методом капиллярной газожидкостной хроматографии с использованием детектора по захвату электронов после его экстракции из образцов органическим растворителем, очистки экстракта путем перераспределения между двумя несмешивающимися фазами на колонках с окисью алюминия и концентрирующих патронах № 1, с последующим превращением хлорантранилипрола в его основной метаболит путем дериватизации.

Идентификация проводится по времени удерживания метаболита. Количественное определение — методом абсолютной калибровки, в пересчете на хлорантранилипрол.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность обеспечивается путем подбора капиллярной колонки и условий программирования температуры.

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

3.1 Средства измерений

Примечание. Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2 Реактивы

Примечание. Допускается использование реактивов с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.3 Вспомогательные устройства, материалы

Примечание. Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТу 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТу 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТу 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТу 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТу 12.0.004.

5. Требования к квалификации операторов

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на газовом хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

• процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;
• выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к определению

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка колонок с окисью алюминия для очистки экстракта, подготовка концентрирующих патронов № 1 для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на колонках с окисью алюминия и концентрирующих патронах № 1, установление градуировочной характеристики.

7.1.1 Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см3 аппарата для перегонки растворителей.

Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °C, отбрасывают.

7.1.2 Очистка хлористого метилена

Хлористый метилен промывают равным объемом 5%-го раствора натрия углекислого (безводного), осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 12 — 24 часов. Затем хлористый метилен сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Хлористый метилен перегоняют при температуре 40,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 40,0 °C, отбрасывают.

7.1.3 Приготовление бидистиллированной воды

Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см3 от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм3 и кипятят в течение 6 часов.

Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °C, отбрасывают.

7.1.4 Очистка ацетона

Ацетон помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см3 от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм3.

Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °C отбрасывают.

7.2 Приготовление растворов для проведения анализа

7.2.1 Приготовление рабочих растворов

7.2.1.1. Приготовление 1,0%-го водного раствора аммиака для дериватизации. Мерной пипеткой отбирают 1 см3 25%-го раствора аммиака и переносят в мерную колбу на 25 см3, куда предварительно наливают около 10 см3 бидистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и доводят объем в колбе до метки бидистиллированной водой (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой). Полученный раствор хранят под тягой в течение одного месяца.

7.2.1.2. Приготовление 4 н раствора серной кислоты. Мерным цилиндром отбирают 112 см3 концентрированной серной кислоты и осторожно переносят в мерную колбу на 1 000 см3, куда предварительно наливают около 300 см3 дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).

7.2.2 Приготовление градуировочных растворов

7.2.2.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией хлорантранилипрола 1,0 мг/см3. Взвешивают 50 мг хлорантранилипрола в мерной колбе объемом 50 см3. Навеску растворяют в ацетоне, помещая колбу в ультразвуковую ванну, и доводят объем до метки ацетоном. Полученный стандартный раствор № 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 1 хранится в холодильнике не более 4 месяцев.

7.2.2.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией хлорантранилипрола 10,0 мкг/см3. Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 100 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Полученный стандартный раствор № 2 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 2 хранится в холодильнике не более 30 суток.

7.2.2.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией хлорантранилипрола 1,0 мкг/см3. Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 3 используется для внесения в контрольные образцы и для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики после его дериватизации. Стандартный раствор № 4 хранится в холодильнике не более 10 суток.

7.2.2.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией хлорантранилипрола 0,5 мкг/см3. Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 5 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 4 используется для внесения в контрольные образцы и для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики после его дериватизации. Стандартный раствор № 4 хранится в холодильнике не более 10 суток.

7.2.2.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией хлорантранилипрола 0,2 мкг/см3. Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 2 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 5 используется для внесения в контрольные образцы и для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики после его дериватизации. Стандартный раствор № 5 хранится в холодильнике не более 10 суток.

7.2.2.6. Стандартный раствор № 6 с концентрацией хлорантранилипрола 0,1 мкг/см3. Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 6 используется для внесения в контрольные образцы и для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики после его дериватизации. Стандартный раствор № 6 хранится в холодильнике не более 10 суток.

7.3 Дериватизация (превращение хлорантранилипрола

в метаболит)

7.3.1 Дериватизация стандартных растворов

В четыре виалы объемом 40 см3 помещают по 2 см3 каждого стандартного раствора хлорантранилипрола в ацетоне (N 3, 4, 5 и 6 соответственно), удаляют растворитель током теплого воздуха.

К сухому остатку в виале добавляют 0,8 см3 ацетона и растворяют, помещая виалу в ультразвуковую ванну на 2 минуты. В виалу добавляют 2 см3 1,0%-го водного раствора аммиака и помещают виалу в ультразвуковую ванну еще на 2 минуты. Плотно (!) закрывают виалу крышкой и помещают в нагревательный блок для виал на 2 часа при 75 °C. Далее виалу охлаждают до комнатной температуры, добавляют в нее 10 см3 этилацетата и интенсивно встряхивают смесь. После полного разделения фаз из верхнего этилацетатного слоя аликвоту 5 см3, переносят в концентратор и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °C.

Сухой остаток растворяют в 10 см3 ацетона и 1 мм3 пробы вводят в хроматограф.

Получают 4 раствора для установления градуировочной характеристики с концентрациями: 0,1; 0,05; 0,02; 0,01 мкг/см3, в пересчете на хлорантранилипрол.

7.3.2 Дериватизация проб

К сухому остатку в виале добавляют 0,8 см3 ацетона и растворяют, помещая виалу в ультразвуковую ванну на 2 минуты. В виалу добавляют 2 см3 1,0%-го водного раствора аммиака и помещают виалу в ультразвуковую ванну еще на 2 минуты. Плотно (!) закрывают виалу крышкой и помещают в нагревательный блок для виал на 2 часа при 75 °C. Далее виалу охлаждают до комнатной температуры, добавляют в нее 10 см3 этилацетата и интенсивно встряхивают смесь. После полного разделения фаз из верхнего этилацетатного слоя аликвоту 5 см3, переносят в концентратор и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °C.

Сухой остаток растворяют в 5 см3 ацетона и 1 мм3 пробы вводят в хроматограф.

7.4 Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации хлорантранилипрола в растворе (мкг/см3), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 0,01; 0,02; 0,05 и 0,10 мкг/см3.

В испаритель хроматографа вводят по 1 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.4. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

7.5 Подготовка колонки с окисью алюминия для очистки

экстракта и проверка хроматографического поведения хлорантранилипрола на ней

7.5.1 Подготовка колонки с окисью алюминия для очистки

экстракта

В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помещают 3 г окиси алюминия с зернением 40/250 меш и, аккуратно постукивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента. Непосредственно перед использованием колонку промывают 10 см3 ацетонитрила.

7.5.2 Проверка хроматографического поведения

хлорантранилипрола на колонке с окисью алюминия

В концентратор объемом 100 см3 вносят 1 см3 стандартного раствора хлорантранилипрола в ацетоне с концентрацией 1,0 мкг/см3 и упаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °C. Сухой остаток растворяют в 10 см3 ацетонитрила, помещая виалу в ультразвуковую ванну на 30 с, тщательно обмывают стенки концентратора и наносят на подготовленную колонку. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см3 и упаривают досуха при температуре не выше 35 °C.

Исходную колбу обмывают тремя порциями ацетонитрила объемом 10 см3 каждая и последовательно вносят их на колонку. Каждую порцию собирают отдельно в концентратор объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °C.

Сухой остаток каждой фракции переносят тремя порциями ацетона по 2 см3 каждая в виалы объемом 40 см3, удаляют растворитель током теплого воздуха и проводят дериватизацию, как указано в п. 7.3.1.

Определяют фракции, содержащие хлорантранилипрола, полноту смывания с колонки и необходимый объем элюента.

Изучение поведения хлорантранилипрола на колонке проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии окиси алюминия.

7.6 Подготовка концентрирующих патронов № 1 для очистки

экстракта и проверка хроматографического поведения хлорантранилипрола на них

7.6.1 Подготовка концентрирующего патрона № 1 для очистки

экстракта

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см3/мин.

Патрон № 1 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см3 (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 20 см3 воды. Элюаты отбрасывают.

7.6.2 Проверка хроматографического поведения

хлорантранилипрола на концентрирующем патроне № 1

В концентратор объемом 100 см3 вносят 1 см3 стандартного раствора хлорантранилипрола в ацетоне с концентрацией 1,0 мкг/см3 и выпаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °C. Сухой остаток растворяют в 2 см3 ацетонитрила, тщательно обмывают стенки концентратора, добавляют 8 см3 воды, перемешивают и наносят на подготовленный патрон. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см3 и выпаривают досуха при температуре не выше 35 °C.

Исходный концентратор обмывают 20 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:4, элюат собирают в концентратор объемом 100 см3 и выпаривают досуха при температуре не выше 35 °C. Концентрирующий патрон высушивают под вакуумом в течение двух минут. Исходный концентратор последовательно обмывают четырьмя порциями объемом 10 см3 каждая смеси гексана с этилацетатом в соотношении 1:3. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °C.

Сухой остаток каждой фракции переносят тремя порциями ацетона по 2 см3 каждая в виалы объемом 40 см3, удаляют растворитель током теплого воздуха и проводят дериватизацию, как указано в п. 7.3.1.

Определяют фракции, содержащие хлорантранилипрол, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.

Изучение поведения хлорантранилипрола на концентрирующих патронах № 1 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии патронов.

8. Отбор проб и хранение

Отбор проб проводится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», № 2051-79 от 21.08.79, а также в соответствии с ГОСТом 13586.3-83 «Зерно. Правила приемки и методы отбора проб», ГОСТом 6201-68 «Горох шлифованный. ТУ», ГОСТ Р ИСО 6497-11 «Корма для животных. Отбор проб», ГОСТом 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб», ГОСТом 17109-88 «Соя. Требования при заготовках и поставках», ГОСТом 31760-12 «Масло соевое. ТУ», ГОСТом 22391-89 «Подсолнечник. Требования при заготовках и поставках», ГОСТом 1129-13 «Масло подсолнечное, ТУ», ГОСТом 8808-2000 «Масло кукурузное, ТУ», ГОСТом 31760-12 «Масло соевое. ТУ», ГОСТом 32190-13 «Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб».

Пробы зеленой массы растений хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0 — 4 °C не более суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильнике при температуре -18 °C до 2 лет.

Отобранные пробы зерна кукурузы и гороха, а также семян сои и подсолнечника подсушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.

Пробы растительных масел хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре 4 °C не более 10 суток.

9. Проведение определения

9.1 Зеленая масса растений

9.1.1 Экстракция

Образец измельченной зеленой массы растений массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см3. Хлорантранилипрол экстрагируют 80 см3 этилацетата, помещая пробы в ультразвуковую ванну на 5 минут. Экстракты фильтруют через фильтр низкой плотности в концентратор объемом 250 см3. Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 см3 этилацетата и помещая на 5 минут в ультразвуковую ванну. Экстракты фильтруют, объединяют в концентратор объемом 250 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °C.

9.1.2 Очистка экстракта перераспределением в системе

несмешивающихся растворителей

К сухому остатку в концентраторе, полученному по п. 9.1.1, прибавляют 5 см3 ацетона, 50 см3 воды, перемешивают, тщательно обмывая стенки концентратора, и переносят в делительную воронку объемом 250 см3. Водную фазу подкисляют 4 н серной кислотой до pH 2. Добавляют 50 см3 хлористого метилена, перемешивают, дегазируют (обязательно!!!) и интенсивно встряхивают в течение 2 минут. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) собирают в концентратор объемом 250 см3, пропуская его через слой безводного сульфата натрия. Повторяют экстракцию еще два раза, используя каждый раз по 30 см3 хлористого метилена и встряхивая воронку в течение 2 минут. Хлористый метилен объединяют в концентраторе объемом 250 см3 и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °C.

9.1.3 Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия

Сухой остаток в концентраторе, полученный по п. 9.1.2, растворяют в 10 см3 ацетонитрила, помещают на 30 секунд в ультразвуковую ванну, перемешивают и наносят на заранее подготовленную колонку, элюат собирают в концентратор объемом 100 см3. Исходную колбу обмывают 20 см3 ацетонитрила и вносят на колонку. Элюаты объединяют в концентраторе объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °C.

9.1.4 Дериватизация

Сухой остаток, полученный в п. 9.1.3, растворяют в 2 см3 ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора, переносят в виалу. Процедуру повторят еще два раза, используя по 2 см3 ацетона, удаляют растворитель током теплого воздуха и проводят дериватизацию как указано в п. 7.3.2.

После дериватизации из верхнего слоя (этилацетата) отбирают аликвоту 5 см3, переносят в концентратор объемом 100 см3 и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °C.

Сухой остаток в концентраторе растворяют в 5 см3 ацетона и 1 мм3 пробы вводят в хроматограф.

9.2 Семена сои и подсолнечника, зерно кукурузы и гороха

9.2.1 Экстракция

Образец измельченных семян подсолнечника (сои, зерна кукурузы или гороха) массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 см3, прибавляют 80 см3 ацетона и помещают сначала на 10 минут в ультразвуковую ванну, а затем на аппарат для встряхивания проб на 10 минут. Затем пробу центрифугируют в течение 3 минут при скорости 4 000 оборотов в минуту. Экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 см3 через фильтр низкой плотности. Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 см3 ацетона в тех же условиях. Объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °C.

9.2.2 Очистка экстракта перераспределением в системе

несмешивающихся растворителей

К масляному остатку в концентраторе, полученному по п. 9.2.1, прибавляют 50 см3 гексана, перемешивают, тщательно обмывая стенки концентратора, и переносят в делительную воронку объемом 250 см3. Хлорантранилипрол экстрагируют тремя порциями ацетонитрила объемом по 30 см3, каждый раз интенсивно встряхивая воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (ацетонитрил) объединяют в конической колбе объемом 250 см3. Гексан отбрасывают.

Ацетонитрильный экстракт переносят в чистую делительную воронку объемом 250 см3 и промывают двумя порциями гексана по 30 см3, каждый раз интенсивно встряхивая воронку 2 минуты. Ацетонитрил собирают в концентратор объемом 250 см3, пропуская его через слой безводного сульфата натрия, и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °C.

Далее проводят очистку экстракта по п. 9.1.2 «Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей» и по п. 9.1.3 «Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия».

9.2.3 Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1

Сухой остаток, полученный после очистки экстракта на колонках с окисью алюминия, растворяют в 2 см3 ацетонитрила, помещают на 30 с в ультразвуковую ванну, перемешивают, прибавляют 8 см3 воды, перемешивают и вносят на заранее подготовленный патрон. Элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают 20 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:4 и вносят на патрон, элюат отбрасывают. Концентрирующий патрон высушивают под вакуумом в течение 2 минут.

Хлорантранилипрол элюируют с патрона 30 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 1:3. Элюат собирают в концентраторе объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °C.

Далее проводят дериватизацию как указано в п. 7.3.2.

После дериватизации из верхнего слоя (этилацетата) отбирают аликвоту 5 см3, переносят в концентратор объемом 100 см3 и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °C.

Сухой остаток в концентраторе растворяют в 5 см3 ацетона и 1 мм3 пробы вводят в хроматограф.

9.3 Растительные масла

9.3.1 Экстракция и очистка полученного экстракта в системе

несмешивающихся растворителей

Из пробы растительного масла отбирают в стакан навеску массой 10 г и переносят ее в делительную воронку объемом 250 см3 двумя порциями гексана объемом по 25 см3. Хлорантранилипрол экстрагируют тремя порциями ацетонитрила по 50 см3, каждый раз интенсивно встряхивая воронку в течение 2 минут. Гексановый слой отбрасывают, а ацетонитрильный экстракт возвращают в чистую делительную воронку.

Ацетонитрильный экстракт промывают двумя порциями гексана объемом по 30 см3. Гексан отбрасывают, а ацетонитрил собирают в концентратор объемом 250 см3 через слой безводного сульфата натрия, и выпаривают до маслянистого остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °C.

9.3.2 Очистка экстракта перераспределением в системе

несмешивающихся растворителей

К сухому остатку в концентраторе, полученному по п. 9.3.1, прибавляют 5 см3 ацетона, 50 см3 воды, перемешивают, тщательно обмывая стенки концентратора, и переносят в делительную воронку объемом 250 см3 через фильтр низкой плотности. Водную фазу подкисляют 4 н серной кислотой до pH 2. Добавляют 30 см3 хлористого метилена, перемешивают, дегазируют (обязательно!!!) и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) собирают в концентратор объемом 250 см3, пропуская его через слой безводного сульфата натрия. Повторяют экстракцию еще два раза, используя каждый раз по 30 см3 хлористого метилена и встряхивая воронку в течение 2 мин. Хлористый метилен объединяют в концентраторе объемом 250 см3 и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °C.

Далее проводят очистку экстракта по п. 9.1.3 «Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия» и по п. 9.2.3 «Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1».

После очистки проводят дериватизацию как указано в п. 7.3.2.

После дериватизации из верхнего слоя (этилацетата) отбирают аликвоту 5 см3, переносят в концентратор объемом 100 см3 и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °C.

Сухой остаток в концентраторе растворяют в 5 см3 ацетона и 1 мм3 пробы вводят в хроматограф.

9.4 Условия хроматографирования

Хроматографическая система, включающая:

• хроматограф газовый с детектором по захвату электронов (ЭЗД), снабженный приспособлениями для капиллярной колонки и с возможностью использования автосамплера на 16 проб с дополнительным лотком на 150 виал, с микрошприцем для газовой хроматографии объемом до 10 мм3 для автоматического ввода пробы в хроматографическую систему;
• компьютерное программное обеспечение, контролирующее работу всего прибора, обеспечивающее сбор и хранение всех хроматограмм в процессе проведения хроматографического анализа, обеспечивающее обработку результатов измерений, вывод и расчет хроматограмм и количественный анализ.

Колонка хроматографическая капиллярная из кварцевого стекла с внутренний диаметром 0,32 мм, длиной 30 м, с неподвижной фазой, содержащей 5% фенилсилоксана и 95% метилсилоксана, толщина пленки 0,25 мкм.

Температура детектора — 320 °C, поток газа поддувки (азот) — 25,0 см3/мин.

Температура испарителя — 300 °C, тип газа гелий, режим Split, давление 17,99 psi, деление потока 20:1, общий поток 57,6 см3/мин, поток обдува септы 3,0 см3/мин.

Программированный нагрев колонки с 180 °C (выдержка 1 мин) по 25 град/мин до 270 °C, с 270 °C по 5 град/мин до 300 °C (выдержка 5 мин), режим постоянный поток, поток колонки 2,6 см3/мин, средняя скорость 48,6 см/с.

Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,01 — 0,1 нг.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор IN-EQW78 с концентрацией 0,1 мкг/см3 в пересчете на хлорантранилипрол, соответственно разбавляют.

10. Обработка результатов анализа

Для обработки результатов хроматографического анализа используется компьютерное программное обеспечение химического анализа, которое входит в хроматографическую систему.

Альтернативная обработка результатов.

Содержание хлорантранилипрола рассчитывают по формуле, без учета полноты извлечения вещества из проб:

X = \frac{S_{\text{пр}} \cdot A \cdot V}{100 \cdot S_{\text{ст}} \cdot m} \cdot P , где

X — содержание хлорантранилипрола в пробе, мг/кг;

Sст — высота (площадь) пика стандарта, мВ;

Sпр — высота (площадь) пика образца, мВ;

A — концентрация стандартного раствора, мкг/см3;

V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3;

m — масса анализируемого образца, г;

P — содержание хлорантранилипрола в аналитическом стандарте, %.

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{X_{1} + X_{2}} \leq r , где (1)

X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r — значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8 \times \sigma_{r} .

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

(\overline{X} \pm \Delta),\text{мг}/\text{кг} при вероятности P = 0,95, где

\overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг:

\Delta = \frac{\delta \cdot \overline{X}}{100} , где

\delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание вещества в пробе менее 0,01 мг/кг». <*>

<*> 0,01 мг/кг — предел обнаружения.

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений, а также контроль стабильности градуировочной характеристики осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-02 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13.1 Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

Контроль стабильности градуировочной характеристики для IN-EQW78 в пересчете на хлорантранилипрол проводят при смене основного градуировочного раствора № 1 каждые четыре месяца, при смене основного градуировочного раствора № 2 — каждый месяц, при смене основных градуировочных растворов 3, 4, 5 и 6 — каждые 10 суток, а также в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее трех образцов концентраций для градуировки, содержание IN-EQW78 в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,01 до 0,1 мкг/см3 в пересчете на хлорантранилипрол.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

A = \frac{(X - C) \cdot 100}{C} \leq 7 , где

X — концентрация IN-EQW78 контрольного измерения, мкг/см3;

C — известная концентрация градуировочного раствора IN-EQW78 в ацетоне, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;

7 — погрешность градуировочной характеристики, %.

Если величина расхождения (A) превышает 7%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов IN-EQW78, предусмотренных МВИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно п. 7.4.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Величина добавки Cд должна удовлетворять условию:

\text{С}_{\text{д}} = \Delta_{\text{л},X} + \Delta_{\text{л},X'} , где

\pm \Delta_{\text{л},X},( \pm \Delta_{\text{л},X'}) — характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно) мг/кг, при этом:

\Delta_{\text{л}} = \pm 0,84\Delta , где

\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг:

\Delta = \frac{\delta \cdot \overline{X}}{100} , где

\delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Результат контроля процедуры Кк рассчитывают по формуле:

\text{К}_{\text{к}} = \overline{X}' - \overline{X} - C_{\text{д}} , где

\overline{X}' , \overline{X} , Cд — среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11), содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

\text{К } = \sqrt{\Delta_{\text{л},X'}^{2} + \Delta_{\text{л},X}^{2}}

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Кк) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

|Кк| <= К, (2)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):

\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{X_{1} + X_{2}} \leq R , где (3)

X₁, X₂ - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R — предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Приложение 1

ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ ХЛОРАНТРАНИЛИПРОЛА ИЗ ЗЕЛЕНОЙ МАССЫ РАСТЕНИЙ, СЕМЯН СОИ И ПОДСОЛНЕЧНИКА, ЗЕРНА КУКУРУЗЫ И ГОРОХА И ИЗ РАСТИТЕЛЬНЫХ МАСЕЛ (5 ПОВТОРНОСТЕЙ ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ, P = 0,95)