МУК 4.1.3277-15. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств изопиразама в воде, почве, зерне и соломе хлебных злаков, яблоках и яблочном соке методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания

(утв. Роспотребнадзором 24.06.2015)

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 24 июня 2015 года

4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ИЗОПИРАЗАМА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ ХЛЕБНЫХ ЗЛАКОВ, ЯБЛОКАХ И ЯБЛОЧНОМ СОКЕ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.3277-15

1. Разработаны сотрудниками ФБУН «Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана» Роспотребнадзора (В.Н. Ракитский, Т.В. Юдина, О.Е. Егорченкова, В.М. Волков).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 22 мая 2015 г. № 1).

3. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 24 июня 2015 г.

4. Введены впервые.

Свидетельство об аттестации МВИ № РОСС RU.0001.310430/0207.31.07.14 от 31.07.14.

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода капиллярной газожидкостной хроматографии для измерения концентраций изопиразама в воде в диапазоне 0,0005 — 0,005 мг/дм3, в почве, зерне, яблоках, яблочном соке в диапазоне 0,01 — 0,1 мг/кг, в соломе хлебных злаков в диапазоне 0,04 — 0,4 мг/кг.

Методические указания носят рекомендательный характер.

Изопиразам

Химический класс: карбоксимиды.

Смесь син- и анти-изомеров:

-3-(дифторометил)-1-метил-N-[(1RS,4SR,9RS)-1,2,3,4,-тетрагидро-9-изопропил-1,4-метанонафталин-5-ил]пиразол-4-карбоксамид;

-3-(дифторометил)-1-метил-N-[(1RS,4SR,9RS)-1,2,3,4,-тетрагидро-9-изопропил-1,4-метанонафталин-5-ил]пиразол-4-карбоксамид (IUPAC).

Эмпирическая формула: C₂₀H₂₃F₂N₃O.

Молекулярная масса: 359,4.

Беловатый порошок без запаха. Плотность 1,332 г/см3 при 20 °C. Температура плавления: син-изомер 130,2 °C, анти-изомер 144,5 °C. Температура кипения: термическое разложение начинается при температуре более 274 °C, до достижения точки кипения. Давление паров при 25 °C: 3,32 x 10-5 мПа. Растворимость в органических растворителях (в г/дм3): ацетон — 314; дихлорметан — 330; этилацетат — 179; метанол — 119; толуол — 77,1; н-октанол — 44,1; гексан — 1,17. Растворимость в воде (в мг/дм3 при 25 °C): син-изомер — 0,55; анти-изомер — 1,05. Коэффициент распределения н-октанол/вода: Kow log P = 4,1 (син-изомер), Kow log P = 4,4 (анти-изомер). Гидролитически стабилен при температуре 25 °C и pH 5,7 и 9 (ДТ50 = 30 дней).

Краткая токсикологическая характеристика

Острая оральная токсичность (LD₃₀) (син:анти — 70:30) для крыс > 2 000 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD₅₀) для крыс > 5 000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LK50) для крыс > 5,28 мг/м3.

Область применения

Изопиразам — фунгицид, обладающий контактной активностью с необратимым связыванием с листовой поверхностью, ингибирует рост мицелия в тканях растений, предотвращает спорообразование. Предназначен для защиты плодовых культур от комплекса грибов-патогенов.

1. Метрологические характеристики

При соблюдении всех регламентируемых условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерения при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

Метрологические параметры

Анализируемый объект

Диапазон определяемых концентраций, мг/дм3, мг/кг

Таблица 2

2. Метод измерений

Метод основан на определении изопиразама с использованием капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с масс-селективным (МСД) детектором после извлечения вещества из анализируемых образцов смесью ацетонитрил-вода (80:20, по объему), очистки экстрактов перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и далее на концентрирующих патронах для твердофазной экстракции.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

3.3. Вспомогательные средства измерений, устройства, материалы

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07. Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004-90.

4.3. При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см2), необходимо соблюдать «Правила устройства и безопасной эксплуатации стационарных компрессорных установок, воздухопроводов и газопроводов под давлением», ПБ-03-576-03. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив на нем понижающий редуктор.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, прошедших обучение, освоивших методику, владеющих техникой, имеющих опыт работы на газовом хроматографе и подтвердивших соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности по п. 13.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

\cdot процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;

\cdot выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление градуировочных растворов, раствора внесения, установление градуировочной характеристики, приготовление смесей растворителей для экстракции и очистки экстрактов на патронах, проверка поведения вещества на них, подготовка концентрирующих патронов.

7.1. Очистка органических растворителей

7.1.1 Ацетон

Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия и прокаленным карбонатом калия или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30.

7.1.2 Ацетонитрил

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на 1 дм3 ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 дм3 ацетонитрила 10 г карбоната калия).

7.1.3. н-Гексан

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7.1.4 Этилацетат

7.1.4.1. Приготовление раствора натрия углекислого с массовой долей 5%. Навеску (25 +/- 0,1) г натрия углекислого помещают в мерную колбу вместимостью 500 см3, растворяют в бидистиллированной воде, доводят водой до метки, перемешивают.

7.1.4.2. Очистка растворителя. Растворитель промывают последовательно 5%-м водным раствором натрия углекислого, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над прокаленным карбонатом калия и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30. Хранят в темноте (в емкости из темного стекла) не более месяца.

7.1.5 Хлористый метилен

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

7.2. Приготовление градуировочных растворов и раствора внесения

7.2.1. Исходный раствор изопиразама для градуировки (концентрация 100 мкг/см3). В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 0,01 г изопиразама, растворяют в 50 — 60 см3 ацетона, доводят ацетоном до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в холодильнике при температуре 4 — 6 °C в течение 6 месяцев.

7.2.2. Рабочий раствор № 1 изопиразама для градуировки и внесения (концентрация 10,0 мкг/см3). В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 10,0 см3 исходного градуировочного раствора с концентрацией 100,0 мкг/см3 (п. 7.2.1), доводят до метки ацетоном, тщательно перемешивают, получают рабочий раствор № 1 с концентрацией изопиразама 10,0 мкг/см3.

Раствор хранят в холодильнике при температуре 4 — 6 °C в течение месяца.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом «внесено-найдено» и контроля качества результатов измерений методом добавок.

7.2.3. Рабочие растворы № 2 — 5 изопиразама для градуировки (концентрация 0,05 — 0,5 мкг/см3). В 4 мерные колбы вместимостью 100 см3 помещают 0,5; 1,0; 2,0 и 5,0 см3 рабочего раствора № 1 с концентрацией 10,0 мкг/см3 (п. 7.2.2), доводят до метки ацетоном, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 2 — 5 с концентрациями изопиразама 0,05; 0,1, 0,2 и 0,5 мкг/см3.

Растворы хранят в холодильнике при температуре 4 — 6 °C в течение 14 дней.

7.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую линейную (с угловым коэффициентом) зависимость площади пика от концентрации изопиразама в растворе, устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки.

В испаритель хроматографа вводят по 1 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.6. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений. Устанавливают площади пика изопиразама, на основании которых строят градуировочную зависимость. Градуировочный график проверяют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов. Если значения площадей отличаются более, чем на 10% от параметров градуировочной характеристики, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие растворы для градуировки.

7.4. Приготовление 10%-го раствора гидроксида натрия

В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 10 г гидроксида натрия, растворяют в 60 — 70 см3 деионизованной воды, доводят водой до метки, перемешивают. Хранят в емкости из пропилена не более 3 месяцев.

7.5. Приготовление 2 М раствора соляной кислоты

В мерную колбу вместимостью 500 см3 помещают 200 — 250 см3 деионизованной воды, вносят 83 см3 концентрированной соляной кислоты, доводят водой до метки, перемешивают. Срок хранение не более 3 месяцев.

7.6. Приготовление раствора марганцовокислого калия с массовой долей 0,1% (0,1%-й раствор)

В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 0,1 г марганцовокислого калия, растворяют в 50 — 70 см3 деионизованной воды, доводят водой до метки, тщательно перемешивают. Хранят в емкости из темного стекла не более двух недель.

7.7. Приготовление смесей ацетонитрил-вода для очистки водных образцов на концентрирующих патронах № 1

7.7.1. Смесь ацетонитрил-вода (объемное соотношение 80:20). В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 80 см3 ацетонитрила и 20 см3 воды, перемешивают.

7.7.2. Смесь ацетонитрил-вода (объемное соотношение 25:75). В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 25 см3 ацетонитрила и 75 см3 воды, перемешивают.

7.8. Приготовление смеси гексан-этилацетат для очистки экстрактов на концентрирующих патронах № 2

7.8.1. Смесь гексан-этилацетат (объемное соотношение 90:10). В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 90 см3 гексана и 10 см3 этилацетата, перемешивают.

7.8.2. Смесь гексан-этилацетат (объемное соотношение 80:20). В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 80 см3 гексана и 20 см3 этилацетата, перемешивают.

7.8.3. Смесь гексан-этилацетат (объемное соотношение 1:1). В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 50 см3 гексана и 50 см3 этилацетата, перемешивают.

7.9. Подготовка концентрирующих патронов № 1

Патрон № 1 устанавливают на аллонж с прямым отводом для вакуума <*>. Сверху в патрон устанавливают стеклянную пипетку вместимостью 5 см3, используемую в качестве емкости для элюента.

Концентрирующий патрон № 1 промывают 2 см3 метанола и 2 см3 деионизированной воды, процедуру проводят с использованием вакуума, скорость потока растворителя через патрон не должна превышать 2 см3/мин, при этом нельзя допускать высыхания поверхности патрона. Патрон готовят непосредственно перед использованием.

7.10. Подготовка концентрирующих патронов № 2

Патрон № 2 устанавливают на аллонж с прямым отводом для вакуума <*>. Сверху в патрон устанавливают стеклянную пипетку вместимостью 5 см3, используемую в качестве емкости для элюента.

<*> В отсутствие специального аллонжа, жидкость продавливают через патрон с помощью шприца, скорость продавливания раствора не должна превышать 2 — 3 капли в секунду.

Концентрирующий патрон № 2 промывают 5 см3 этилацетата и 5 см3 смеси гексан-этилацетат (объемное соотношение 90:10), процедуру проводят с использованием вакуума, скорость потока растворителя через патрон не должна превышать 2 см3/мин, при этом нельзя допускать высыхания поверхности патрона. Патрон готовят непосредственно перед использованием.

7.11. Проверка поведения изопиразама на концентрирующем патроне № 1

В круглодонную колбу вместимостью 150 см3 помещают 0,1 см3 рабочего раствора № 1 изопиразама для внесения с концентрацией 10,0 мкг/см3 (п. 7.2.2), упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °C. Сухой остаток растворяют в 1,5 см3 ацетонитрила и 8,5 см3 деионизованной воды, помещая на ультразвуковую баню на 30 с, перемешивают и наносят на подготовленный концентрирующий патрон № 1 (п. 7.9). Патрон № 1 промывают 2 см3 смеси вода-ацетонитрил (75:25, по объему), элюат отбрасывают.

Патрон № 1 высушивают воздухом (с использованием вакуума) в течение 5 минут.

Изопиразам элюируют с патрона № 1 10 см3 метанола, отбирая фракционно (по 5 см3) элюат, упаривают, остатки растворяют в 2 см3 ацетона, анализируют содержание изопиразама по п. 9.6.

Фракции, содержащие изопиразам, объединяют и вновь анализируют. Устанавливают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с патрона и необходимый для очистки объем элюента.

7.12. Проверка поведения изопиразама на концентрирующем патроне № 2

В круглодонную колбу вместимостью 150 см3 помещают 0,1 см3 рабочего раствора № 1 изопиразама для внесения с концентрацией 10,0 мкг/см3 (п. 7.2.2), упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °C. Сухой остаток растворяют в 0,25 см3 этилацетата и 4,75 см3 гексана, помещая на ультразвуковую баню на 30 с, перемешивают и наносят на подготовленный концентрирующий патрон № 2 (п. 7.10). Патрон № 2 промывают 5 см3 смеси гексан-этилацетат (объемное соотношение 8:2), элюат отбрасывают.

Изопиразам элюируют с патрона № 2 10 см3 смеси гексан-этилацетат (объемное соотношение 1:1), отбирая фракционно (по 5 см3) элюат, упаривают, остатки растворяют в 2 см3 ацетона, анализируют содержание изопиразама по п. 9.6.

Фракции, содержащие изопиразам, объединяют и вновь анализируют. Устанавливают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с патрона и необходимый для очистки объем элюента.

Примечание. Проверку хроматографического поведения изопиразама следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.

8. Отбор и хранение проб

Отбор проб производится в соответствии с правилами, определенными: ГОСТ Р 51592-2000 «Вода. Общие требования к отбору проб», ГОСТ 17.4.3.01-83 «Охрана природы. Почвы. Общие требования к отбору проб», ГОСТ 28168-89 «Почвы. Отбор проб», ГОСТ Р 50436-92 (ИСО 950-79) «Зерновые. Отбор проб зерна», ГОСТ 16270-70 «Яблоки свежие ранних сортов созревания. Технические условия», ГОСТ 21122-75 «Яблоки свежие поздних сортов созревания. Технические условия», ГОСТ 27572-87 «Яблоки свежие для промышленной переработки», ГОСТ 26313-84 «Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора проб», а также «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (N 2051-79 от 21.08.1979).

Отобранные пробы воды хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более 5 суток. Перед анализом образцы воды фильтруют через неплотный бумажный фильтр.

Почву подсушивают в темноте до постоянного веса и хранят в защищенном от света месте при комнатной температуре не более месяца. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре -18 °C.

Пробы зерна и соломы хранят в бумажной или тканевой упаковке при комнатной температуре. Перед анализом почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм, зерно и солому измельчают на лабораторных мельницах.

Пробы яблок хранят в полиэтиленовой таре в холодильнике не более 5 дней, для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре -18 °C, соки анализируют в день приготовления. Перед анализом образцы плодов яблок измельчают с помощью гомогенизатора.

9. Выполнение определения

9.1. Вода

Пробу отфильтрованной воды объемом 200 см3 вносят на концентрирующий патрон № 1, подготовленный по п. 7.9, со скоростью пропускания 2 — 3 капли в секунду, используя разряжение, создаваемое водоструйным насосом. Промывают патрон № 1 2 см3 смеси ацетонитрил-вода (объемное соотношение 25:75), элюат отбрасывают. Высушивают патрон № 1 пропусканием воздуха (с использованием вакуума) в течение 5 мин. Изопиразам элюируют с патрона № 1 10 см3 смеси метанола. Пробу переносят в круглодонную колбу вместимостью 50 см3 и упаривают до сухого остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °C, остаток растворяют в 2 см3 ацетона и анализируют на содержание изопиразама по п. 9.6.

9.2. Почва, зерно, солома хлебных злаков, яблоки, яблочный сок

9.2.1 Экстракция

9.2.1.1 Почва, зерно, солома хлебных злаков, яблоки.

Образец почвы, измельченного зерна, яблок массой 20 г, соломы массой 5 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 см3, добавляют смесь ацетонитрил-вода (80:20, по объему) в количестве 90 см3 (для соломы — 120 см3) и помещают на аппарат для встряхивания на 30 минут (почву — на 1 час). Пробе дают отстояться, затем надосадочную жидкость фильтруют на воронке Бюхнера с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, через двойной фильтр средней плотности. Экстракцию повторяют еще два раза, используя 40 см3 смеси ацетонитрил-вода (80:20, по объему), выдерживая каждый раз по 1 мин на ультразвуковой бане и 30 мин на аппарате для встряхивания. Осадок на фильтре промывают 20 см3 той же смеси растворителей.

Объединенный отфильтрованный экстракт переносят в мерный цилиндр на 250 см3, доводят объем до 200 см3 смесью ацетонитрил-вода (80:20, по объему), перемешивают. В колбу для упаривания на 150 см3 помещают 1/2 часть экстракта, упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °C до водного остатка (объем 5 — 10 см3) и подвергают очистке перераспределением в системе несмешивающихся растворителей по п. 9.3, затем на патроне № 1 по п. 9.4. При анализе пробы зерна (сухой остаток) дополнительно очищают по п. 9.5.

9.2.1.2 Яблочный сок.

Пробу сока массой 20 г вносят в коническую колбу на 250 см3, добавляют 70 см3 смеси ацетонитрил-вода (80:20, по объему), интенсивно встряхивают в течение 5 минут, помещают на аппарат для встряхивания на 30 мин и выдерживают 1 час в холодильнике (4 — 6 °C).

Полученный экстракт отфильтровывают на воронке Бюхнера с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, через двойной фильтр средней плотности. Осадок на фильтре повторно дважды промывают 20 см3 смеси ацетонитрил-вода (80:20, по объему).

Объединенный отфильтрованный экстракт переносят в мерный цилиндр на 250 см3, доводят объем экстракта смесью ацетонитрил-вода (80:20, по объему) до 200 см3, перемешивают, 1/2 часть экстракта переносят в колбу для упаривания на 150 см3, упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °C до водного остатка (объем 5 — 10 см3) и подвергают очистке по п. 9.3.

9.3. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

Водную фазу, полученную по п. 9.2, помещают в делительную воронку вместимостью 250 см3, вносят 5 см3 насыщенного раствора хлористого натрия, перемешивают. Затем в воронку добавляют 30 см3 дихлорметана и интенсивно встряхивают 5 мин. После полного разделения фаз нижний дихлорметановый слой переносят в колбу для упаривания вместимостью 150 см3, фильтруя через слой безводного сульфата натрия (толщиной около 1 см), помещенный на бумажном фильтре в химическую воронку.

Экстракцию изопиразама повторяют еще дважды порциями дихлорметана объемом 20 см3, встряхивая в течение 5 мин.

Осушитель на фильтре дополнительно промывают 10 см3 дихлорметана.

Для полного разделения фаз содержимое воронки должно отстояться 10 — 15 мин. Следы дихлорметана в водной фазе недопустимы, поскольку это снижает полноту извлечения вещества.

Объединенную органическую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, упаривают на ротационном испарителе при температуре не выше 35 °C досуха и подвергают дополнительной очистке на патроне по п. 9.4.

9.4. Очистка экстракта на концентрирующем патроне № 1

Сухой остаток в круглодонной колбе, полученный по п. 9.3, растворяют с помощью ультразвуковой бани в 1,5 см3 ацетонитрила, затем добавляют 8,5 см3 деионизованной воды, перемешивают и переносят на подготовленный концентрирующий патрон № 1 (п. 7.9). Патрон промывают 2 см3 смеси вода-ацетонитрил (75:25, по объему), элюат отбрасывают. Патрон № 1 высушивают воздухом (с использованием вакуума) в течение 5 минут.

Изопиразам элюируют 10 см3 метанола в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 150 см3. Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °C. Сухой остаток растворяют в 2 см3 ацетона и анализируют содержание изопиразама по п. 9.6. При анализе пробы зерна (сухой остаток) дополнительно очищают по п. 9.5.

9.5. Очистка экстракта зерна на концентрирующем патроне № 2

Сухой остаток в круглодонной колбе, полученный по п. 9.4, растворяют с помощью ультразвуковой бани в 0,25 см3 этилацетата и 4,75 см3 гексана, помещая на ультразвуковую баню на 30 с, перемешивают и наносят на подготовленный концентрирующий патрон № 2 (п. 7.10).

Патрон № 2 промывают 5 см3 смеси гексан-этилацетат (объемное соотношение 80:20), элюат отбрасывают.

Изопиразам элюируют с патрона № 2 10 см3 смеси гексан-этилацетат (объемное соотношение 1:1), упаривают, остаток растворяют в 2 см3 ацетона, анализируют содержание изопиразама по п. 9.6.

9.6. Условия хроматографирования

9.6.1 Газовый хроматограф с масс-селективным детектором

Хроматографическая капиллярная кварцевая колонка, длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, содержащая сорбент: 5% — фенил- и 95% — диметилполисилоксан (толщина пленки сорбента 0,25 мкм).

Температура детектора: квадруполя — 150 °C, источника — 230 °C,

переходной камеры — 280 °C.

Температура испарителя: 275 °C.

Температура термостата колонки программированная. Начальная температура — 180 °C, выдержка 2 мин, нагрев колонки со скоростью 10 градусов в минуту до температуры 260 °C, выдержка 18 мин.

Газ 1 (гелий): поток в колонке 1,0 см3/мин.

Давление: 99,8 кПа.

Средняя линейная скорость: 38 см/с.

Хроматографируемый объем: 1 мм3.

Режим сканирования — SIM, m/z: 159, 303, 359.

Линейный диапазон детектирования: 0,05 — 0,5 нг.

9.6.2 Хроматограф газовый с электронозахватным детектором

(альтернативный метод)

Хроматографическая капиллярная кварцевая колонка, длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, содержащая сорбент: 14% — цианпропилфенил-, 86% — диметилполисилоксан (толщина пленки сорбента 0,25 мкм).

Температура детектора: 300 °C;

испарителя: 270 °C.

Температура термостата колонки программированная. Начальная температура — 220 °C, выдержка 2 мин, нагрев колонки со скоростью 7 градусов в минуту до температуры 270 °C, выдержка 12 мин.

Газ 1 (азот): давление 109,8 кПа, скорость 27 см/с, поток 0,8 см3/мин.

Хроматографируемый объем: 1 мм3.

Линейный диапазон детектирования: 0,05 — 0,5 нг.

Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор изопиразама с концентрацией 0,5 мкг/см3, разбавляют ацетоном, не более, чем в 50 раз.

10. Обработка результатов анализа

Содержание изопиразама в пробе (X, мг/дм3, мг/кг) рассчитывают по формуле:

X = \frac{A \cdot V \cdot K}{m} ,

где X — содержание изопиразама в пробе, мг/дм3, мг/кг;

A — концентрация изопиразама, найденная по градуировочной характеристике в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см3;

V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3;

m — масса (объем) анализируемого образца, г, см3;

K — коэффициент, учитывающий объем аликвоты экстракта, взятый для анализа. (K = 1 (вода); K = 2 (почва, зерно, солома хлебных злаков, яблоки, яблочный сок).

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r,

где X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/дм3, мг/кг;

r — значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8\sigma_{r} .

При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

(\overline{X} \pm \Delta) , мг/дм3, мг/кг при вероятности P = 0,95,

где \overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/дм3, мг/кг;

\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/дм3, мг/кг:

\Delta = \frac{\delta \cdot X}{100} ,

где \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание вещества в пробе воды — менее 0,0005 мг/дм3, почвы, зерна, яблок и яблочного сока — 0,01 мг/кг, соломы хлебных злаков — менее 0,04 мг/кг»*.

• 0,0005 мг/дм3, 0,01 мг/кг, 0,04 мг/кг — предел обнаружения изопиразама в пробах воды, почвы, зерна, яблок, яблочного сока, соломы хлебных злаков соответственно.

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1 — 6-02 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13.1 Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее трех образцов концентраций для градуировки, содержание изопиразама в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,05 до 0,5 мкг/см3.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

A = \frac{|X - C| \cdot 100}{C} \leq B,

где X — концентрация изопиразама в пробе при контрольном измерении, мкг/см3;

C — известная концентрация градуировочного раствора изопиразама, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;

B — норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (B = 10% при P = 0,95).

Если величина расхождения (A) превышает 10%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов изопиразама, предусмотренных МВИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново согласно п. 7.3.

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Величина добавки Cд должна удовлетворять условию:

C_{\text{д}} \geq \Delta_{\text{л},\text{Х}} + \Delta_{\text{л},\text{Х }\prime},

где \pm \Delta_{\text{л},\text{Х}} ( \pm \Delta_{\text{л},\text{Х }\prime}) — характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно) мг/дм3, мг/кг, при этом:

\Delta_{\text{л}} = \pm 0,84\Delta,

где \Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг:

\Delta = \frac{\delta \cdot \text{Х}}{100} ,

где \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Результат контроля процедуры Кк рассчитывают по формуле:

\text{К}_{\text{к}} = \overline{\text{Х}}\prime - \overline{\text{Х}} - \text{С}_{\text{д}},

где \overline{\text{Х}}\prime , \overline{\text{Х}} , Cд — среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/дм3, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

\text{К } = \sqrt{\Delta_{\text{л},\text{Х }\prime}^{2} + \Delta_{\text{л},\text{Х}}^{2}} .

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Кк) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

|Кк| <= К, (1)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (1) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (1) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):

\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq R, (2)

где X1, X2 — результаты измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), мг/дм3, мг/кг;

R — предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.