МУК 4.1.3100-13. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств бифеназата и D 3598 в воде, почве, яблоках и яблочном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 08.08.2013)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299).
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
8 августа 2013 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ БИФЕНАЗАТА И D 3598 В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЯБЛОКАХ И ЯБЛОЧНОМ СОКЕ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.3100-13
1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом — МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научным консультационным центром «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 30 мая 2013 г. № 1).
3. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 8 августа 2013 г.
4. Введены в действие с момента утверждения.
Свидетельство о метрологической аттестации от 4.10.2012 № 01.00282-2008/0133.04.10.12.
Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовых концентраций бифеназата и D 3598 в воде в диапазоне 0,005 — 0,05 мг/куб. дм и в почве в диапазоне 0,01 — 0,1 мг/кг, а также уровня их остаточных количеств в яблоках и яблочном соке в диапазоне 0,01 — 0,1 мг/кг.
Методические указания носят рекомендательный характер.
Название действующего вещества по ИСО: бифеназат.
Название действующего вещества по ИЮПАК: Изопропил 3-(4-метоксибифенил-3-ил)карбазат.
Эмпирическая формула: C_{17}H_{20}N_{2}O_{3}.
Агрегатное состояние: кристаллическое вещество.
Цвет, запах: белый, без запаха.
Давление паров: 1 \times 10^{- 2}\text{мРа} (25 °C).
Коэффициент распределения октанол-вода: logK_{ow} = 3,4 (25 °C, pH 7).
Температура плавления: 123 — 125 °C.
Растворимость в воде (мг/куб. дм, при 20 °C): 2,06.
Растворимость в органических растворителях (г/куб. дм, 20 °C): этилацетат — 102; ацетонитрил — 95,6; метанол — 44,7; толуол — 24,0; н-гексан — 0,232.
Бифеназат стабилен не более 1 года при температуре 20 °C и относительной влажности 50%.
Подвергается гидролизу (при 25 °C): DT_{50} составляет 9 — 10 дней (pH 4); 5,4 дня (pH 5); 0,8 дня (pH 7), 0,08 дня (pH 9) и фотолизу (25 °C, pH 5): DT_{50} составляет 17 ч.
Бифеназат — основание с pKa — 12,94 (23 °C).
Основной метаболит бифеназата — D 3598.
N-(4-метоксибифенил-3-ил)диазенкарбоновой кислоты изопропиловый эфир.
Эмпирическая формула: C_{17}H_{18}N_{2}O_{3}.
Другие физико-химические свойства D 3598 не представлены.
Краткая токсикологическая характеристика. Бифеназат относится к мало опасным веществам по острой пероральной ( \text{ЛД}_{50} для крыс составляет более 5000 мг/кг) и дермальной ( \text{ЛД}_{50} для крыс составляет более 2000 мг/кг) токсичности, но к умеренно опасным по ингаляционной токсичности ( \text{ЛК}_{50} для крыс (4 ч) — более 4400 мг/куб. м воздуха). Вызывает слабое покраснение кожи и глаз у кроликов, раздражает кожу и слизистую оболочку глаз. Не является мутагеном. Не обладает тератогенной активностью для крыс и кроликов, не является канцерогеном для крыс и мышей.
Область применения. Бифеназат — несистемный акарицид с контактным действием и продолжительным последействием, рекомендуется к применению для борьбы с насекомыми на стадии яиц и личинок на плодовых деревьях (яблони, груши, цитрусовые), орехах, овощах, декоративных культурах, хлопке и кукурузе.
В России для бифеназата установлены следующие гигиенические нормативы: ВДСД — 0,01 мг/кг массы человека; ВМДУ для импортной продукции (мг/кг): хлопок (семена) — 0,3; изюм, перец сладкий, плодовые косточковые, клубника — 2,0; овощи со съедобными плодами, тыквенные, томат — 0,5; виноград, плодовые семечковые — 0,7; хмель сухой — 20,0; перец Чили — 3,0; орехи — 0,2; мясо млекопитающих (кроме морских), молочный жир — 0,05; молоко, птица (мясо, субпродукты) — 0,01; мята — 40,0; яйца, субпродукты (млекопитающих) — 0,001; миндаль в шелухе — 10,0.
1. Погрешность измерений
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 и 2 для соответствующих диапазонов концентраций.
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/куб. дм) | Показатель точности (граница относительной погрешности), \pm \delta , %, P = 0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, \sigma_{r} , % | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % | Норматив оперативного контроля точности, K, мг/кг (мг/куб. дм) (P = 0,95, m = 2) |
| Вода | 0,005 — 0,01 вкл. | 40 | 2,36 | 6,56 | 9,19 | 0,47 · X <*> |
| 0,01 — 0,05 вкл. | 30 | 1,50 | 4,17 | 5,84 | 0,36 · X <*> | |
| Почва | 0,01 — 0,1 вкл. | 50 | 1,53 | 4,25 | 5,96 | 0,59 · X <*> |
| Яблоки | 0,01 — 0,1 вкл. | 50 | 4,26 | 11,84 | 16,58 | 0,59 · X <*> |
| Яблочный сок | 0,01 — 0,1 вкл. | 50 | 2,19 | 6,09 | 8,52 | 0,59 · X <*> |
| <*> X — среднее значение массовой концентрации бифеназата в пробе (мг/куб. дм, мг/кг). | ||||||
МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ ДЛЯ D 3598 (В ВИДЕ БИФЕНАЗАТА)
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/куб. дм) | Показатель точности (граница относительной погрешности), \pm \delta , %, P = 0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, \sigma_{r} , % | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % | Норматив оперативного контроля точности, K, мг/кг (мг/куб. дм) (P = 0,95, m = 2) |
| Вода | 0,005 — 0,01 вкл. | 40 | 1,48 | 4,11 | 5,76 | 0,47 · X <*> |
| 0,01 — 0,05 вкл. | 30 | 0,94 | 2,61 | 3,66 | 0,36 · X <*> | |
| Почва | 0,01 — 0,1 вкл. | 50 | 1,97 | 5,48 | 7,67 | 0,59 · X <*> |
| Яблоки | 0,01 — 0,1 вкл. | 50 | 1,65 | 4,59 | 6,42 | 0,59 · X <*> |
| Яблочный сок | 0,01 — 0,1 вкл. | 50 | 2,35 | 6,53 | 9,15 | 0,59 · X <*> |
| <*> X — среднее значение массовой концентрации D 3598 (в виде бифеназата) в пробе (мг/куб. дм, мг/кг). | ||||||
Полнота извлечения веществ, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 3 и 4.
ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, СТАНДАРТНОЕ ОТКЛОНЕНИЕ,
ДОВЕРИТЕЛЬНЫЙ ИНТЕРВАЛ СРЕДНЕГО РЕЗУЛЬТАТА ДЛЯ БИФЕНАЗАТА
ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, СТАНДАРТНОЕ ОТКЛОНЕНИЕ,
ДОВЕРИТЕЛЬНЫЙ ИНТЕРВАЛ СРЕДНЕГО РЕЗУЛЬТАТА ДЛЯ D 3598
(В ВИДЕ БИФЕНАЗАТА)
2. Метод измерений
Метод основан на определении бифеназата и D 3598 с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной фазе с использованием ультрафиолетового детектора после его экстракции из образцов органическим растворителем, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами и на концентрирующих патронах № 1 и 2. D 3598 определяют в виде бифеназата после восстановления его аскорбиновой кислотой.
Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение — методом абсолютной калибровки.
В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором состава подвижной фазы и выбором колонок различной полярности.
3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы
3.1. Средства измерений
| Весы аналитические класса точности — специальный (I), с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и дискретностью 0,0001 г | ГОСТ Р 53228-08 |
| Весы лабораторные общего назначения класса точности — средний (III) с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г | ГОСТ Р 53228-08 |
| Колбы мерные на 10, 25, 50, 100, 500 и 1000 куб. см | ГОСТ 1770-74 |
| Микрошприц объемом 100 куб. мм со шкалой деления 0,001 куб. см и погрешностью менее 1% от номинального объема | |
| Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 куб. см pH-метр/милливольтметр с диапазоном измерения 0 — 14 pH; +/- 1999 мВ | ГОСТ 29227-91 |
| Хроматографическая система, включающая: - хроматограф жидкостный, снабженный термостатом для колонок с диапазоном температур от 15 до 80 °C, с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны и чувствительностью не ниже 0,005 единиц адсорбции на шкалу; - компьютерное программное обеспечение, контролирующее работу всего прибора, обеспечивающее сбор и хранение всех хроматограмм в процессе проведения хроматографического анализа, обеспечивающее обработку результатов измерений, вывод и расчет хроматограмм и количественный анализ | |
| Цилиндры мерные на 10, 25 и 50 куб. см | ГОСТ 1770-74 |
| Примечание. Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками. | |
3.2. Реактивы
| Бифеназат, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 99,8% | |
| D 3598, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 99,95% | |
| Ацетон, ос.ч. | ТУ 6-09-3513-86 |
| Ацетонитрил, ос.ч., УФ-200 нм | ТУ 6-09-2167-84 |
| Вода дистиллированная и (или) бидистиллированная (вода дистиллированная, перегнанная повторно в стеклянной емкости) | ГОСТ 6709-72 |
| Гелий, очищенный | ТУ 51-940-80 |
| n-Гексан, х.ч. | ТУ 6-09-3818-89 |
| Калий марганцовокислый, ч.д.а. | ГОСТ 20490-75 |
| Кальций хлористый, ч. | ТУ 6-09-4711-81 |
| Кислота аскорбиновая | ФС 42-2668-95 |
| Кислота уксусная, ледяная | ГОСТ 61-75 |
| Концентрирующие патроны для твердофазной экстракции с гидрофобным сорбентом с размером частиц 63 — 200 мкм с привитыми гексадецильными (C 16) группами (объем — 1 куб. см, масса сорбента — 0,6 г) (патрон № 1) | ТУ 4215-002-05451931-94 |
| Концентрирующие патроны для твердофазной экстракции со слабоосновным сорбентом с размером частиц 63 — 200 мкм с привитыми аминогруппами (объем — 1 куб. см, масса сорбента — 0,6 г) (патрон № 2) | ТУ 4215-002-05451931-94 |
| Натрий сернокислый, безводный, х.ч. | ГОСТ 4166-76 |
| Натрий хлористый, х.ч. | ГОСТ 4233-77 |
| Полиэтиленгликоль 400, CAS 25322-68-3 | |
| Эфир диэтиловый | ФС 42-3643-98 |
| Примечание. Допускается использование реактивов с аналогичными или лучшими характеристиками. | |
3.3. Вспомогательные устройства и материалы
| Алонж прямой с отводом для вакуума (АО-14/23) для работы с концентрирующими патронами | ГОСТ 25336-82 |
| Аппарат для встряхивания проб с возвратно-поступательным направлением колебаний, с максимальной загрузкой 10 кг, с амплитудой колебаний 30 мм и скоростью от 10 до 300 колебаний в минуту | |
| Банки полипропиленовые с крышками для экстракции вместимостью 250 куб. см | |
| Ванна ультразвуковая с потребляемой мощностью 140 Вт, рабочей частотой 50 Гц, рабочим объемом 4,5 куб. дм | |
| Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная | ГОСТ 5556-81 |
| Воронки делительные на 250 куб. см | ГОСТ 25336-82 |
| Воронки лабораторные стеклянные | ГОСТ 25336-82 |
| Испаритель ротационный вакуумный с ручным подъемником, с диагональным конденсором и объемом испарительной колбы от 50 до 3000 куб. см, с изменяемой скоростью вращения штока испарителя от 5 до 240 об./мин., с водяной баней с антикоррозионным покрытием объемом 5 куб. дм и с диапазоном температур от 20 до 100 °C | |
| Колбы конические плоскодонные на 100, 250 и 1000 куб. см | ГОСТ 25336-82 |
| Колбы круглодонные со шлифом (концентраторы) на 100, 250 куб. см и 4000 куб. см ТС | ТУ 92-891.029-91 |
| Колонка хроматографическая стальная, длиной 250 мм, с внутренним диаметром 4,6 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами C18 | |
| Насос диафрагменный, химически стойкий на 100%, с мощностью электропривода 245 Вт, предельным вакуумом 100 мбар/абс., с избыточным давлением 1 бар и скоростью откачки 34 куб. дм/мин. | |
| Предколонка хроматографическая стальная, длиной 20,0 мм, внутренним диаметром 3,9 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами C8 | |
| Сито лабораторное с полотном из латуни или нержавеющей стали с размером ячеек 1 мм | ГОСТ 3826-82 и ГОСТ 6613-86 |
| Стаканы стеклянные, термостойкие, объемом 50 — 500 куб. см | ГОСТ 25336-82 |
| Установка для перегонки растворителей с круглодонной колбой объемом 4000 куб. см и приемной конической колбой объемом 1000 куб. см | |
| Фильтры обеззоленные нейтральные, быстро фильтрующие, диаметром 11 см, зольность одного фильтра 0,00072 г | ТУ-6-09-1678-86 |
| Фильтры для очистки растворителей, диаметром 20 мм, с отверстиями пор 20 мкм | |
| Центрифуга MPW-350e с числом оборотов 4000 об./мин. и с набором полипропиленовых банок емкостью 200 куб. см | |
| Шприц инъекционный многократного применения объемом 10 куб. см | ГОСТ 22967-90 |
| Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками. | |
4. Требования безопасности
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004-91.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.
6. Условия измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C, относительной влажности не более 80% и нормальном атмосферном давлении;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7. Подготовка к выполнению определений
Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка концентрирующих патронов № 1 и 2 для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на концентрирующих патронах № 1 и 2, установление градуировочной характеристики.
7.1. Подготовка органических растворителей
7.1.1 Очистка ацетонитрила
Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/куб. дм. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 ч. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см аппарата для перегонки растворителей.
Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °C, отбрасывают.
7.1.2 Приготовление бидистиллированной воды
Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцовокислый калий из расчета 1 г/куб. дм и кипятят в течение 6 ч.
Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °C, отбрасывают.
7.2. Приготовление растворов для проведения анализа
7.2.1 Приготовление рабочих растворов
7.2.1.1 Приготовление 1%-го раствора полиэтиленгликоля.
Мерной пипеткой отбирают 1 куб. см полиэтиленгликоля и переносят в мерную колбу на 100 куб. см, добавляют 50 куб. см ацетонитрила. Раствор перемешивают и доводят ацетонитрилом объем в колбе до метки.
7.2.1.2 Приготовление 2%-го раствора сульфата натрия.
В мерную колбу на 1000 куб. см переносят 20 г безводного сульфата натрия, добавляют 200 — 300 куб. см дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения и доводят водой объем в колбе до метки.
7.2.1.3 Приготовление 10%-го раствора аскорбиновой кислоты.
В мерную колбу объемом 10 куб. см помещают 5 куб. см дистиллированной воды, прибавляют 1 г аскорбиновой кислоты, перемешивают до полного растворения и доводят водой объем в колбе до метки. Раствор готовят непосредственно перед применением.
7.2.2 Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ
Для приготовления подвижной фазы используют свежеперегнанный ацетонитрил, очищенную воду и ледяную уксусную кислоту.
В плоскодонную колбу объемом 1000 куб. см помещают 600 куб. см ацетонитрила, 400 куб. см очищенной воды и 5 куб. см ледяной уксусной кислоты. Смесь тщательно перемешивают, пропускают через нее газообразный гелий со скоростью 20 куб. см/мин. в течение 5 мин., после чего помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 мин.
7.2.3 Приготовление смеси для растворения проб
В плоскодонную колбу объемом 100 куб. см помещают 0,1 г аскорбиновой кислоты и 100 куб. см подвижной фазы. Смесь тщательно перемешивают. Хранят в холодильнике не более 7 суток и используют для растворения проб и приготовления градуировочных растворов.
7.2.4 Приготовление градуировочных растворов
7.2.4.1 Приготовление градуировочных растворов бифеназата.
7.2.4.1.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией бифеназата 100,0 мкг/куб. см. Взвешивают 10 мг бифеназата в мерной колбе объемом 100 куб. см. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор № 1 используется для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 1 хранится в холодильнике не более 14 дней.
7.2.4.1.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией бифеназата 10,0 мкг/куб. см. Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 5 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 50 куб. см и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор № 2 используется для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 2 хранится в холодильнике не более 14 дней.
7.2.4.1.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией бифеназата 1,0 мкг/куб. см. Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 5 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 50 куб. см и доводят объем до метки смесью для растворения проб (п. 7.2.3). Стандартный раствор № 3 используется для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 3 хранится в холодильнике не более 7 дней.
7.2.4.1.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией бифеназата 0,5 мкг/куб. см. Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 5 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки смесью для растворения проб (п. 7.2.3). Стандартный раствор № 4 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике не более 7 дней.
7.2.4.1.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией бифеназата 0,2 мкг/куб. см. Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 2 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки смесью для растворения проб (п. 7.2.3). Стандартный раствор № 5 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике не более 7 дней.
7.2.4.1.6. Стандартный раствор № 6 с концентрацией бифеназата 0,1 мкг/куб. см. Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки смесью для растворения проб (п. 7.2.3). Стандартный раствор № 6 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике не более 7 дней.
7.2.4.1.7. Стандартные растворы бифеназата с концентрацией 2,0; 1,0; 0,4 и 0,2 мкг/куб. см для внесения в контрольные образцы. Методом последовательного разведения ацетонитрилом стандартного раствора № 2 готовят растворы, содержащие по 2,0; 1,0; 0,4 и 0,2 мкг/куб. см, и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы. Стандартные растворы в ацетонитриле хранят не более 1 месяца.
7.2.4.2 Приготовление градуировочных растворов D 3598.
7.2.4.2.1. Стандартный раствор № 7 с концентрацией D 3598 100,0 мкг/куб. см. Взвешивают 10 мг D 3598 в мерной колбе объемом 100 куб. см. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор № 7 используется для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 7 хранится в холодильнике не более 14 дней.
7.2.4.2.2. Стандартный раствор № 8 с концентрацией D 3598 10,0 мкг/куб. см. Из стандартного раствора № 7 отбирают пипеткой 5 куб. см, помешают в мерную колбу объемом 50 куб. см и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор № 7 используется для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 7 хранится в холодильнике не более 14 дней.
7.2.4.2.3. Стандартный раствор № 9 с концентрацией D 3598 1,0 мкг/куб. см. Из стандартного раствора № 8 отбирают пипеткой 5 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 50 куб. см и доводят объем до метки смесью для растворения проб (п. 7.2.3). Стандартный раствор № 9 используется для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 9 хранится в холодильнике не более 7 дней.
Стандартный раствор № 9 после приготовления выдерживают при комнатной температуре не менее 3 ч и по истечении этого времени используют его для приготовления градуировочных стандартов № 10, 11 и 12.
7.2.4.2.4. Стандартный раствор № 10 с концентрацией D 3598 0,5 мкг/куб. см. Из стандартного раствора № 9 отбирают пипеткой 5 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки смесью для растворения проб (п. 7.2.3). Стандартный раствор № 10 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике не более 7 дней.
7.2.4.2.5. Стандартный раствор № 11 с концентрацией D 3598 0,2 мкг/куб. см. Из стандартного раствора № 9 отбирают пипеткой 2 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки смесью для растворения проб (п. 7.2.3). Стандартный раствор № 11 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике не более 7 дней.
7.2.4.2.6. Стандартный раствор № 12 с концентрацией D 3598 0,1 мкг/куб. см. Из стандартного раствора № 9 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки смесью для растворения проб (п. 7.2.3). Стандартный раствор № 12 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике не более 7 дней.
7.2.4.2.7. Стандартные растворы D 3598 с концентрацией 2,0; 1,0; 0,4 и 0,2 мкг/куб. см для внесения в контрольные образцы. Методом последовательного разведения ацетонитрилом стандартного раствора № 8 готовят растворы, содержащие по 2,0; 1,0; 0,4 и 0,2 мкг/куб. см, и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы. Стандартные растворы в ацетонитриле хранят не более 1 месяца.
7.3. Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации бифеназата и D 3598 (в виде бифеназата) в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/куб. см.
В инжектор хроматографа вводят по 20 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.5. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.
7.4. Подготовка концентрирующего патрона № 2 для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения бифеназата на нем
7.4.1 Подготовка концентрирующего патрона № 2 для очистки экстракта
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин. (1 — 2 кап./с).
Патрон № 2 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 куб. см смеси гексана с ацетоном в соотношении 4:1. Элюат отбрасывают.
Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.
7.4.2 Проверка хроматографического поведения бифеназата на концентрирующем патроне № 2
Из стандартного раствора бифеназата в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/куб. см, отбирают 1 куб. см, помещают в концентратор объемом 100 куб. см, прибавляют 1 куб. см 1%-го раствора полиэтиленгликоля и упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 8 куб. см гексана, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см, прибавляют 1 куб. см 1%-го раствора полиэтиленгликоля, упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 2 куб. см смеси для растворения проб (п. 7.2.3) и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
Исходный концентратор обмывают последовательно двумя порциями, по 10 куб. см каждая, смеси гексана с ацетоном в соотношении 4:1. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 куб. см, прибавляют 1 куб. см 1%-го раствора полиэтиленгликоля, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 2 куб. см смеси для растворения проб (п. 7.2.3) и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
Определяют фракции, содержащие бифеназат, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.
Изучение поведения бифеназата на концентрирующих патронах № 2 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии патронов.
7.5. Подготовка концентрирующего патрона № 1 для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения бифеназата на нем
7.5.1 Подготовка концентрирующего патрона № 1 для очистки экстракта
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин. (1 — 2 кап./с).
Патрон № 1 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 9:1. Элюат отбрасывают.
Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.
7.5.2 Проверка хроматографического поведения бифеназата на концентрирующем патроне № 1
Из стандартного раствора бифеназата в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/куб. см, отбирают 1 куб. см, помещают в концентратор объемом 100 куб. см, прибавляют 1 куб. см 1%-го раствора полиэтиленгликоля и упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 1 куб. см ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 9 куб. см воды, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор, прибавляют 1 куб. см 1%-го раствора полиэтиленгликоля, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 2 куб. см смеси для растворения проб (п. 7.2.3) и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
Исходный концентратор обмывают последовательно 10 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:4, 10 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:2 и 15 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом 100 куб. см, прибавляют в каждый концентратор по 1 куб. см 1%-го раствора полиэтиленгликоля, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 2 куб. см смеси для растворения проб (п. 7.2.3) и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
Определяют фракции, содержащие бифеназат, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.
Изучение поведения бифеназата на концентрирующих патронах № 1 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии патронов.
7.6. Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной хроматографии
Хроматографическую колонку с предколонкой устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре 30 °C и скорости потока подвижной фазы 1 куб. см/мин. 3 — 4 ч.
8. Отбор проб и хранение
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», № 2051-79 от 21.08.79, а также в соответствии с ГОСТ Р 51592-2000 «Вода. Общие требования к отбору проб», ГОСТ 17.4.3.01-83 «Почвы. Общие требования к отбору проб», ГОСТ 28168-89 «Почвы. Отбор проб», ГОСТ 27572-87 «Яблоки свежие для промышленной переработки. Технические условия», ГОСТ Р 52184-2003 «Соки плодовые и ягодные натуральные».
Пробы воды хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре 4 °C не более 10 суток.
Для длительного хранения проб почвы почву подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в темной таре в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.
Пробы яблок хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре от 0 до 4 °C не более суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре -18 °C до 2 лет. Перед анализом яблоки размораживают и измельчают на терке.
Пробы яблочного сока хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре 4 °C не более 5 суток.
9. Выполнение определения
9.1. Вода
9.1.1 Экстракция
Пробу воды объемом 100 куб. см помешают в делительную воронку объемом 250 куб. см, прибавляют 5 г хлористого натрия, 1 куб. см свежеприготовленного 10%-го водного раствора аскорбиновой кислоты и перемешивают до полного растворения соли. Бифеназат и D 3598 экстрагируют тремя порциями диэтилового эфира объемом по 30 куб. см, встряхивая каждый раз делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (диэтиловый эфир) собирают в концентраторе объемом 250 куб. см, пропуская его через слой безводного сульфата натрия, прибавляют 1 куб. см 1%-го раствора полиэтиленгликоля и объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 5 куб. см смеси для растворения проб (п. 7.2.3) и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
Для определения D 3598: сухой остаток растворяют в 5 куб. см смеси для растворения проб (п. 7.2.3), выдерживают 3 ч при комнатной температуре для прохождения реакции восстановления D 3598 до бифеназата аскорбиновой кислотой, затем 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
9.2. Почва
9.2.1 Экстракция и очистка полученного экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей
Пробу почвы весом 20 г помешают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 куб. см, прибавляют 10 куб. см 2%-го раствора сульфата натрия, 1 куб. см свежеприготовленного 10%-го водного раствора аскорбиновой кислоты, 75 куб. см ацетонитрила, помещают на 5 мин. в ультразвуковую ванну, а затем на 5 мин. на аппарат для встряхивания проб. Затем пробу центрифугируют в течение 4 мин. на скорости 4000 об./мин. Супернатант фильтруют через фильтр средней плотности в коническую колбу объемом 250 куб. см с 10 г сухого хлористого натрия. Экстракцию повторяют еще один раз, используя 75 куб. см ацетонитрила и помещая на 5 мин. в ультразвуковую ванну, а затем на 5 мин. на аппарат для встряхивания проб. Пробы центрифугируют, фильтруют, экстракты объединяют в конической колбе объемом 250 куб. см с 10 г сухого хлористого натрия, перемешивают и выдерживают при комнатной температуре 10 мин.
Объединенный экстракт из колбы переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см (нерастворившуюся соль оставляют в колбе), оставляют до полного разделения слоев и нижний (водный) слой отбрасывают.
К ацетонитрильному экстракту в делительной воронке прибавляют 50 куб. см гексана и интенсивно встряхивают 2 мин. После полного разделения фаз отбрасывают выделившийся нижний водный слой, ацетонитрильный экстракт собирают через слой безводного сульфата натрия в концентратор объемом 250 куб. см, осушитель обмывают 10 куб. см ацетонитрила, смыв объединяют с основным экстрактом, прибавляют 2 куб. см 1%-го раствора полиэтиленгликоля и объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Верхний гексановый слой отбрасывают.
9.2.2 Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей
Для определения бифеназата: к остатку в концентраторе, полученному по п. 9.2.1, прибавляют 3 куб. см ацетонитрила, обмывают стенки колбы, прибавляют туда же 50 куб. см 2%-го раствора сульфата натрия, перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см.
Для определения D 3598 (либо суммарного содержания бифеназата и D 3598): к остатку в концентраторе, полученному по п. 9.2.1, прибавляют 5 куб. см смеси для растворения проб (п. 7.2.3) и оставляют при комнатной температуре на 3 ч для прохождения реакции восстановления D 3598 до бифеназата аскорбиновой кислотой. После прохождения реакции в концентратор прибавляют 50 куб. см 2%-го раствора сульфата натрия, перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см.
Бифеназат экстрагируют тремя порциями диэтилового эфира объемом по 20 куб. см, встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (диэтиловый эфир) собирают в концентратор объемом 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия, прибавляют 1 куб. см 1%-го раствора полиэтиленгликоля и объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
9.2.3 Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 2
Сухой остаток, полученный по п. 9.2.2, растворяют в 2 куб. см ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 8 куб. см гексана, перемешивают и вносят на подготовленный патрон. Элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см. Исходный концентратор обмывают 10 куб. см смеси гексана с ацетоном в соотношении 4:1, вносят на патрон, элюат объединяют, прибавляют 1 куб. см 1%-го раствора полиэтиленгликоля и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
9.2.4 Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1
Сухой остаток, полученный по п. 9.2.3, растворяют в 1 куб. см ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 9 куб. см воды, перемешивают и вносят на подготовленный патрон. Элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают последовательно 10 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:4 и 10 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:2, элюаты отбрасывают. Бифеназат элюируют с патрона 15 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1. К элюату прибавляют 1 куб. см 1%-го раствора полиэтиленгликоля, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
Сухой остаток растворяют в 2 куб. см смеси для растворения проб (п. 7.2.3) и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
9.3. Плоды яблок
9.3.1 Экстракция
Образец измельченных яблок массой 20 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 250 куб. см, прибавляют 100 куб. см ацетонитрила и помещают на 5 мин. в ультразвуковую ванну, а затем на 5 мин. на аппарат для встряхивания проб. Ацетонитрильный экстракт фильтруют в плоскодонную колбу объемом 250 куб. см с 10 г сухого хлористого натрия, прибавляют туда 1 куб. см свежеприготовленного 10%-го водного раствора аскорбиновой кислоты и выдерживают при комнатной температуре 10 мин. Экстракт из колбы переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см (нерастворившуюся соль оставляют в колбе), оставляют до полного разделения слоев и нижний (водный) слой отбрасывают.
К ацетонитрильному экстракту в делительной воронке прибавляют 50 куб. см гексана и интенсивно встряхивают 2 мин. После полного разделения фаз отбрасывают выделившийся нижний водный слой. Ацетонитрильный экстракт собирают через слой безводного сульфата натрия в концентратор объемом 250 куб. см, осушитель обмывают 10 куб. см ацетонитрила, смыв объединяют с основным экстрактом, прибавляют 2 куб. см 1%-го раствора полиэтиленгликоля и объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Верхний гексановый слой отбрасывают.
Далее проводят очистку экстракта как указано в п. 9.2.2 Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и п. 9.2.3 Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 2.
Сухой остаток растворяют в 2 куб. см смеси для растворения проб (п. 7.2.3) и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
9.4. Яблочный сок
9.4.1 Экстракция
Образец яблочного сока массой 20 г помещают в делительную воронку объемом 250 куб. см, прибавляют туда 20 куб. см 2%-го раствора сульфата натрия, 1 куб. см свежеприготовленного 10%-го водного раствора аскорбиновой кислоты, 100 куб. см ацетонитрила и интенсивно встряхивают воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний водный слой отбрасывают, ацетонитрильный экстракт переносят в плоскодонную колбу объемом 250 куб. см с 10 г сухого хлористого натрия и выдерживают при комнатной температуре 10 мин. Экстракт из колбы переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см (нерастворившуюся соль оставляют в колбе), оставляют до полного разделения слоев и нижний (водный) слой отбрасывают.
К ацетонитрильному экстракту в делительной воронке прибавляют 50 куб. см гексана и интенсивно встряхивают 2 мин. После полного разделения фаз отбрасывают выделившийся нижний водный слой. Ацетонитрильный экстракт собирают через слой безводного сульфата натрия в концентратор объемом 250 куб. см, осушитель обмывают 10 куб. см ацетонитрила, смыв объединяют с основным экстрактом, прибавляют 2 куб. см 1%-го раствора полиэтиленгликоля и объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Верхний гексановый слой отбрасывают.
Далее проводят очистку экстракта как указано в п. 9.2.2 Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и п. 9.2.3 Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 2.
Сухой остаток растворяют в 2 куб. см смеси для растворения проб (п. 7.2.3) и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
9.5. Условия хроматографирования
Хроматографическая система, включающая:
- хроматограф жидкостный, снабженный термостатом для колонок с диапазоном температур от 15 до 80 °C, с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны и чувствительностью не ниже 0,005 единиц адсорбции на шкал;
- компьютерное программное обеспечение, контролирующее работу всего прибора, обеспечивающее сбор и хранение всех хроматограмм в процессе проведения хроматографического анализа, обеспечивающее обработку результатов измерений, вывод и расчет хроматограмм и количественный анализ.
Колонка хроматографическая стальная, длиной 250 мм, с внутренним диаметром 4,6 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами C18.
Предколонка хроматографическая стальная, длиной 20,0 мм, внутренним диаметром 3,9 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами C8.
Подвижная фаза: ацетонитрил-вода-ледяная уксусная кислота в соотношении 600:400:5.
Объем вводимой пробы 20 куб. мм.
Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 2 — 20 нг.
10. Обработка результатов
X = \frac{S_{\text{пр}} \cdot A \cdot V}{100 \cdot S_{\text{ст}} \cdot m} \cdot P,
где X — содержание бифеназата или D 3598 в пробе, мг/кг или мг/куб. дм;
S_{\text{ст}} — высота (площадь) пика стандарта, мм;
S_{\text{пр}} — высота (площадь) пика образца, мм;
A — концентрация стандартного раствора, мкг/куб. см;
m — масса анализируемого образца, г (куб. см);
P — содержание бифеназата или D 3598 в аналитическом стандарте, %.
11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:
\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r,(1)
где X_{1},X_{2} — результаты параллельных определений, мг/кг;
r — значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8 \times \sigma_{r}.
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
12. Оформление результатов
Результат анализа представляют в виде:
(\overline{X} \pm \Delta)\text{мг}/\text{кг} при вероятности P = 0,95,
\Delta = \frac{\delta \cdot \overline{X}}{100} ,
где \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание вещества в пробе менее 0,01 мг/кг» <*>.
<*> 0,01 мг/кг — предел обнаружения.
13. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений, а также контроль стабильности градуировочной характеристики осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
13.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики
Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
Контроль стабильности градуировочной характеристики для бифеназата или D 3598 проводят при смене основных градуировочных растворов № 1, 2, 7 и 8 каждые 14 суток, при смене основных градуировочных растворов № 3, 4, 5, 6, 9, 10, 11 и 12 — каждые 7 суток, а также в начале и при окончании каждой серии анализов.
При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее трех образцов концентраций для градуировки, содержание бифеназата или D 3598 в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,1 до 1,0 мкг/куб. см.
Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:
A = \frac{|X - C| \cdot 100}{C} \leq 2,24 для бифеназата, 3,29 для D 3598,
где X — концентрация бифеназата или D 3598 контрольного измерения, мкг/куб. см;
C — известная концентрация градуировочного раствора бифеназата или D 3598 в смеси для растворения проб (п. 7.2.3), взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/куб. см;
2,24 или 3,29 — погрешность градуировочной характеристики, %.
Если величина расхождения (A) превышает 2,24% (или 3,29%), делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов бифеназата или D 3598, предусмотренных МВИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно п. 7.3.
13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок
C_{\text{д}} = \Delta_{\text{л},X} + \Delta_{\text{л},X'},
где \pm \Delta_{\text{л},X}( \pm \Delta_{\text{л},X'}) — характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:
\Delta_{\text{л}} = \pm 0,84\Delta,
где \Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
\Delta = \frac{\delta \cdot \overline{X}}{100} ,
где \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
Результат контроля процедуры K_{\text{к}} рассчитывают по формуле:
K_{\text{к}} = \overline{X}' - \overline{X} - C_{\text{д}},
где \overline{X}',\overline{X},C_{\text{д}} — среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки соответственно, мг/кг.
Норматив контроля K рассчитывают по формуле:
K = \sqrt{\Delta_{\text{л},X'}^{2} + \Delta_{\text{л},X}^{2}} .
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости
Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):
\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq R,(3)
где X_{1},X_{2} — результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
R — предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
Приложение 1
ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ БИФЕНАЗАТА ИЗ ВОДЫ, ПОЧВЫ, ЯБЛОК И ЯБЛОЧНОГО СОКА (5 ПОВТОРНОСТЕЙ ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ, P = 0,95)
ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ D 3598 ИЗ ВОДЫ, ПОЧВЫ, ЯБЛОК И ЯБЛОЧНОГО СОКА (5 ПОВТОРНОСТЕЙ ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ, P = 0,95)