МУК 4.1.3083-13. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств флуопиколида в винограде и виноградном соке, плодах томатов и томатном соке, перце, баклажанах, кабачках, огурцах, салате, бахчевых культурах (дыня, арбуз, тыква), шпинате, капусте (брокколи, брюссельская, белокочанная, цветная), луке-порее методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания

№ МУК 4.1.3083-13Действующий акт

(утв. Роспотребнадзором 29.07.2013)

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации Г. Г. Онищенко 29 июля 2013 года

4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ФЛУОПИКОЛИДА В ВИНОГРАДЕ И ВИНОГРАДНОМ СОКЕ, ПЛОДАХ ТОМАТОВ И ТОМАТНОМ СОКЕ, ПЕРЦЕ, БАКЛАЖАНАХ, КАБАЧКАХ, ОГУРЦАХ, САЛАТЕ, БАХЧЕВЫХ КУЛЬТУРАХ (ДЫНЯ, АРБУЗ, ТЫКВА), ШПИНАТЕ, КАПУСТЕ (БРОККОЛИ, БРЮССЕЛЬСКАЯ, БЕЛОКОЧАННАЯ, ЦВЕТНАЯ), ЛУКЕ-ПОРЕЕ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.3083-13

1. Разработаны ФБУН «Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана» Роспотребнадзора (В.Н. Ракитский, Т.В. Юдина, Н.Е. Федорова, Л.В. Горячева, О.Е. Егорченкова, В.М. Волков).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 30 мая 2013 г. № 1).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 29 июля 2013 г.

4. Введены впервые.

Свидетельство об аттестации от 9.10.2012 № 01.00282-2008/0139.09.10.12.

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода капиллярной газожидкостной хроматографии для определения остаточных количеств флуопиколида в винограде и виноградном соке, плодах томатов и томатном соке, перце, баклажанах, кабачках, огурцах, салате, бахчевых культурах (дыня, арбуз, тыква), шпинате, капусте (брокколи, брюссельская, белокочанная, цветная), луке-порее в диапазоне 0,01 — 0,1 мг/кг.

Методические указания носят рекомендательный характер.

Название действующего вещества по ИСО: флуопиколид.

Название действующего вещества по ИЮПАК: 2,6-Дихлор-N-[3-хлор-5-(трифторметил)-2-пиридилметил]бензамид.

Структурная формула:

рис. 1

Эмпирическая формула: C₁₄H₈Cl₃F₃N₂O.

Молекулярная масса: 383,59.

Кристаллическое вещество бежевого цвета с фенольным запахом. Плотность 1,65 (при 4 °C). Температура кипения > 320 °C. Давление паров 3,03·10-7 мПа (при 20 °C) и 8,03·10-7 мПа (при 25 °C). Растворимость в воде 2,8 г/дм3 (при 20 °C). Растворимость в органических растворителях: этилацетат — 37,7, гексан — 0,2, этанол — 19,2, толуол — 20,5, ацетон — 74,7, дихлорметан — 126,0 диметилсульфоксид — 183,0 (г/дм3, при 24 °C). Стабилен к гидролизу и фотолизу.

Краткая токсикологическая характеристика

Острая пероральная токсичность (LD₅₀) для крыс (самки), мышей (самки) > 10 000 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD₅₀) для кроликов > 2 000 мг/кг.

Область применения

Флуопиколид — системный фунгицид, проявляющий активность против фитофтороза.

1. Погрешность измерений

При соблюдении всех регламентируемых условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерения при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

Метрологические параметры

Анализируемый объект	Диапазон определяемых концентраций мг/кг	Показатель точности (граница относительной погрешности), \pm \delta% , P = 0,95	Стандартное отклонение повторяемости, \sigma_{r} , %	Предел повторяемости, r, %	Предел воспроизводимости, R, %
1	2	3	4	5	6
Виноград	от 0,01 до 0,1 вкл.	50	1,3	4	5
Виноградный сок	от 0,01 до 0,1 вкл.	50	1,9	5	7
Томаты	от 0,01 до 0,1 вкл.	50	2,4	7	9
Томатный сок	от 0,01 до 0,1 вкл.	50	2,0	6	8
Перец	от 0,01 до 0,1 вкл.	50	2,7	8	11
Баклажаны	от 0,01 до 0,1 вкл.	50	1,8	5	7
Огурцы	от 0,01 до 0,1 вкл.	50	3,7	10	15
Салат	от 0,01 до 0,1 вкл.	50	2,2	6	9
Бахчевые культуры (тыква)	от 0,01 до 0,1 вкл	50	1,9	5	8
Шпинат	от 0,01 до 0,1 вкл.	50	2,4	7	9
Брокколи капуста	от 0,01 до 0,1 вкл	50	2,0	6	8
Брюссельская капуста	от 0,01 до 0,1 вкл	50	2,3	7	9
Белокочанная капуста	от 0,01 до 0,1 вкл	50	1,6	4	6
Цветная капуста	от 0,01 до 0,1 вкл	50	1,9	5	7
Лук-порей	от 0,01 до 0,1 вкл.	50	3,0	8	12

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (n = 20) приведены в табл. 2.

Таблица 2

Анализируемый объект	Метрологические параметры, P = 0,95, n = 20
Анализируемый объект	Предел обнаружения, мг/кг	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг	Полнота извлечения вещества, %	Стандартное отклонение, S, %	Доверительный интервал среднего результата, +/-, %
1	2	3	4	5	6
Ягоды винограда	0,01	0,01 — 0,1	85,06	3,52	1,87
Виноградный сок	0,01	0,01 — 0,1	83,20	2,10	1,12
Плоды томатов	0,01	0,01 — 0,1	90,97	4,37	2,33
Томатный сок	0,01	0,01 — 0,1	89,42	2,23	1,19
Перец	0,01	0,01 — 0,1	82,20	4,75	2,53
Огурцы	0,01	0,01 — 0,1	88,46	4,45	2,03
Салат	0,01	0,01 — 0,1	86,30	3,34	1,78
Шпинат	0,01	0,01 — 0,1	87,47	8,53	4,54
Лук-порей	0,01	0,01 — 0,1	92,21	3,42	1,66
Баклажаны	0,01	0,01 — 0,1	90,49	2,64	1,40
Брокколи капуста	0,01	0,01 — 0,1	89,19	2,84	1,51
Брюссельская капуста	0,01	0,01 — 0,1	83,37	6,80	3,62
Белокочанная капуста	0,01	0,01 — 0,1	89,26	5,11	2,72
Цветная капуста	0,01	0,01 — 0,1	91,32	1,74	0,93
Бахчевые культуры (тыква)	0,01	0,01 — 0,1	87,75	3,67	1,95

2. Метод измерений

Методика основана на определении флуопиколида с помощью капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с электронозахватным детектором (ЭЗД) после экстракции из анализируемых проб смесью ацетон-вода, очистки экстрактов перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и на колонке с силикагелем.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1 Средства измерений

Газовый хроматограф, снабженный электронозахватным детектором с пределом детектирования по линдану 5 x 10-14 г/с и автоматическим пробоотборником, предназначенный для работы с капиллярной колонкой
Барометр-анероид с диапазоном измерения атмосферного давления 5 — 790 мм рт. ст. и пределом допустимой погрешности (1 +/- 2,5) мм рт. ст.	ТУ 2504-1799-75
Весы аналитические, с пределом взвешивания 110 г и пределом допустимой погрешности 0,001 г	ГОСТ Р 53228-08
Весы лабораторные общего назначения, с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,01 г	ГОСТ Р 53228-08
Колбы мерные 2-го класса точности вместимостью 100, 200, 250, 500 и 1 000 см3	ГОСТ 1770-74
	Меры массы
Микрошприц вместимостью 10 мм3
Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0; 2,0; 5,0 и 10 см3	ГОСТ 29227-91
Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25; 50; 100 и 250 см3	ГОСТ 1770-74

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2 Реактивы

Флуопиколид, аналитический стандарт с содержанием основного компонента 99,2%
Азот газообразный (чистота 99,999%) в баллонах	ТУ 6-21-39-96
Ацетон, осч	ГОСТ 2603-79
Вода для лабораторного анализа (бидистиллированная или деионизованная)	ГОСТ Р 52501-05
Калий марганцово-кислый (перманганат калия), хч	ГОСТ 20490-75
Калий углекислый (карбонат калия, поташ), хч, прокаленный	ГОСТ 4221-76
Кальций хлористый (хлорид), хч, насыщенный водный раствор	ГОСТ 450-77
Кислота серная (концентрированная), хч	ГОСТ 4204-77
Метилен хлористый (дихлорметан), хч ГОСТ 12794-84
Натрий серно-кислый (сульфат) безводный, хч	ГОСТ 4166-76
Натрий углекислый (карбонат), хч	ГОСТ 83-79
Натрий хлористый (хлорид натрия), хч	ГОСТ 4233-77
н-Гексан (гексан), для хроматографии	ТУ 6-09-06-657-84
Силикагель, для колоночной хроматографии (размер частиц 0,200 — 0,500 мм)
Этиловый эфир уксусной кислоты (этилацетат), хч	ГОСТ 22300-76
	Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.

3.3 Вспомогательные средства измерений, устройства,

материалы

Аппарат для встряхивания	ТУ 64-1-2851-78
	Баня водяная
Баня ультразвуковая с рабочей частотой 35 кГц
Бумажные фильтры средней и высокой плотности	ТУ 2642-001-05015242-07
Воронка Бюхнера	ГОСТ 9147-80
Воронки делительные вместимостью 100 и 250 см3	ГОСТ 9737-93
Воронки конусные диаметром 40 — 45 мм	ГОСТ 25336-82
Гигрометр с диапазоном измерений относительной влажности от 30 до 90%	ТУ 25-11-1645-84
Груша резиновая	ТУ 9398-005-0576-9082-03
Гомогенизатор бытовой
Колба Бунзена	ГОСТ 25336-82
Колбы плоскодонные вместимостью 100, 250, 400 — 500, 1 000 см3	ГОСТ 9737-93
Колбы круглодонные на шлифе (для упаривания) вместимостью 10, 50, 150, 250 и 500 см3	ГОСТ 9737-93
Колонка стеклянная для препаративной хроматографии длиной 25 см, внутренним: диаметром 10 — 12 мм
Насос водоструйный вакуумный	ГОСТ 25336-82
	Ректификационная колонна с числом теоретических тарелок не менее 30
Ротационный вакуумный испаритель с мембранным насосом, обеспечивающий вакуум до 10 мбар
Стаканы химические с носиком вместимостью 100, 150 и 250 см3	ГОСТ 25336-82
	Стекловата
Стеклянные палочки
Термометр с диапазоном измерений от 0 до 55 °C и ценой деления 0,1 °C	ГОСТ 28498-90
	Установка для перегонки растворителей
Хроматографическая, капиллярная, кварцевая колонка длиной 30 м, внутренним диаметром 0,32 мм, содержащая сорбент: 35% фенилполисилоксана и 65% диметилполисилоксана (толщина пленки сорбента 0,5 мкм)

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и 2.2.5.2308-07. Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004-90.

4.3. При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см2), необходимо соблюдать «Правила устройства и безопасной эксплуатации стационарных компрессорных установок, воздухопроводов и газопроводов под давлением», ПБ-03-576-03. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив на нем понижающий редуктор.

5. Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений допускают специалиста, прошедшего обучение, освоившего методику, владеющего техникой, имеющего опыт работы на газовом хроматографе, и подтвердившего соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;
выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление градуировочных растворов и раствора внесения, установление градуировочной характеристики, приготовление смесей растворителей для экстракции и очистки экстрактов на колонке, подготовка колонки с силикагелем, проверка хроматографического поведения флуопиколида на ней.

7.1 Очистка органических растворителей

7.1.1. н-Гексан

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7.1.2 Этилацетат

7.1.2.1. Приготовление раствора натрия углекислого с массовой долей 5%. Навеску (25 +/- 0,1) г натрия углекислого помещают в мерную колбу вместимостью 500 см3, растворяют в бидистиллированной воде, доводят водой до метки, перемешивают.

7.1.2.2. Очистка растворителя. Этилацетат промывают последовательно 5%-м водным раствором натрия углекислого, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над прокаленным карбонатом калия и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30.

7.1.3 Ацетон

Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия и прокаленным карбонатом калия или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30.

7.2 Приготовление градуировочных растворов и раствора

внесения

7.2.1. Исходный раствор флуопиколида для градуировки (концентрация 100 мкг/см3). В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 0,01 г флуопиколида, растворяют в 50 — 60 см3 ацетона, доводят ацетоном до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в холодильнике при температуре 4 — 6 °C в течение месяца.

7.2.2. Раствор № 1 флуопиколида для градуировки (концентрация 1,0 мкг/см3). В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 1,0 см3 исходного раствора флуопиколида с концентрацией 100 мкг/см3 (п. 7.2.1), разбавляют ацетоном до метки.

Градуировочный раствор № 1 хранят в холодильнике при температуре 4 — 6 °C в течение месяца.

7.2.3. Рабочие растворы № 2 — 5 флуопиколида для градуировки (концентрация 0,01 — 0,1 мкг/см3). В 4 мерные колбы вместимостью 100 см3 помещают 1,0; 2,0; 5,0 и 10,0 см3 градуировочного раствора № 1 с концентрацией 1,0 мкг/см3 (пп. 7.2.2), доводят до метки ацетоном, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 2 — 5 с концентрациями флуопиколида 0,01; 0,02; 0,05 и 0,1 мкг/см3.

Растворы хранят в холодильнике при температуре 4 — 6 °C в течение месяца.

7.2.4. Рабочий раствор № 6 флуопиколида для внесения (концентрация 10,0 мкг/см3). В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 10,0 см3 исходного градуировочного раствора с концентрацией 100,0 мкг/см3 (п. 7.2.1), доводят до метки ацетоном, тщательно перемешивают, получают рабочий раствор № 6 с концентрацией флуопиколида 10,0 мкг/см3.

Раствор хранят в холодильнике при температуре 4 — 6 °C в течение месяца.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом «внесено-найдено» и контроля качества результатов измерений методом «добавок».

7.3 Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую линейную (с угловым коэффициентом) зависимость площади пика (мВ·с) от концентрации флуопиколида в растворе (мкг/см3), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки.

В испаритель хроматографа вводят по 1 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.5. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений. Устанавливают площади пиков (мВ·с) флуопиколида.

7.4 Приготовление смеси ацетон-вода для экстракции

(объемное соотношение 9:1)

В мерную колбу вместимостью 1 000 см3 помещают 100 см3 дистиллированной воды, доводят до метки ацетоном, перемешивают.

7.5 Приготовление смеси гексан-хлористый метилен

для очистки экстракта

Смесь гексан-хлористый метилен (объемное соотношение 65:35). В мерную колбу вместимостью 200 см3 помещают 70 см3 хлористого метилена, доводят до метки гексаном, перемешивают.

7.6 Приготовление смесей гексан-этилацетат для очистки

экстрактов на колонке с силикагелем

7.6.1. Смесь гексан-этилацетат (объемное соотношение 9:1). В мерную колбу вместимостью 200 см3 помещают 20 см3 этилацетата, доводят до метки гексаном, перемешивают.

7.6.2. Смесь гексан-этилацетат (объемное соотношение 7:3). В мерную колбу вместимостью 200 см3 помещают 60 см3 этилацетата, доводят до метки гексаном, перемешивают.

7.6.3. Смесь гексан-этилацетат (объемное соотношение 1:1). В мерную колбу вместимостью 200 см3 помещают 100 см3 этилацетата, доводят до метки гексаном, перемешивают.

7.7 Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстрактов

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см, внутренним диаметром 10 — 12 мм уплотняют тампоном из стекловаты, выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 5 г силикагеля в 20 см3 гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия массой 1 г. Колонка готова к работе.

7.8 Проверка хроматографического поведения флуопиколида

на колонке с силикагелем

В круглодонную колбу вместимостью 10 см3 помещают 0,5 см3 раствора № 1 для градуировки с концентрацией флуопиколида 1,0 мкг/см3 (п. 7.2.2) и отдувают растворитель потоком теплого воздуха. К сухому остатку добавляют 0,5 см3 этилацетата (помещают на ультразвуковую баню), затем 4,5 см3 гексана (помещают на ультразвуковую баню), перемешивают и наносят на колонку, подготовленную по п. 7.7. Колбу обмывают дважды смесью гексан-этилацетат (9:1, по объему) порциями по 2,5 см3, которые также наносят на колонку. Промывают колонку последовательно 20 см3 смеси гексан-этилацетат (9:1, по объему), элюаты отбрасывают.

Затем колонку промывают 40 см3 смеси гексан-этилацетат (7:3, по объему) со скоростью 1 — 2 капли в секунду. Фракционно (по 20 см3) отбирают элюаты в круглодонные колбы вместимостью 100 см3, растворы упаривают досуха при температуре не выше 35 °C, остатки растворяют в 2 см3 ацетона, анализируют по п. 9.4.

Дополнительно промывают колонку 20 см3 смеси гексан-этилацетат (1:1, по объему) со скоростью 1 — 2 капли в секунду, собирая элюат в круглодонную колбу вместимостью 100 см3, раствор упаривают досуха при температуре не выше 35 °C, сухой остаток растворяют в 2 см3 ацетона и анализируют по п. 9.4.

Фракции, содержащие флуопиколид, объединяют и вновь анализируют.

Устанавливают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.

Примечание. Проверку хроматографического поведения флуопиколида следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.

7.9 Приготовление раствора марганцово-кислого калия

с массовой долей 0,1% (0,1%-й раствор)

В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 0,1 г марганцово-кислого калия, растворяют в 50 — 70 см3 деионизованной воды, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

8. Отбор и хранение проб

Отбор проб производится в соответствии с правилами, определенными: ГОСТ 1725-85 «Томаты свежие. Технические условия»; ГОСТ Р 51810-01 «Томаты свежие, реализуемые в розничной торговой сети. Технические условия»; ГОСТ 1726-85 «Огурцы свежие. Технические условия»; ГОСТ 13908-68 «Перец сладкий свежий. Технические условия»; ГОСТ 28472-90 «Виноград свежий ручной уборки для консервирования. Требования при заготовках и поставках»; ГОСТ 25896-83 «Виноград свежий столовый. Технические условия»; ГОСТ 1724-85 «Капуста белокочанная свежая, заготовляемая и поставляемая. Технические условия»; ГОСТ Р 51809-01 «Капуста белокочанная свежая, реализуемая в розничной торговой сети. Технические условия»; ГОСТ 7968-89 «Капуста цветная свежая. Требования при заготовках, поставках и реализации»; ГОСТ 13907-86 «Баклажаны свежие. Технические условия»; ГОСТ Р 53071-08 «Баклажаны свежие, реализуемые в розничной торговле. Технические условия»; ГОСТ 7975-68 «Тыква продовольственная свежая. Технические условия»; ГОСТ Р 53088-08 «Лук-порей свежий, реализуемый в розничной торговле. Технические условия»; ГОСТ 26313-84 «Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора проб»; «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (от 21.08.79 № 2051-79).

Отобранные пробы шпината, салата, баклажанов, огурцов, томатов, перца, капусты (брокколи, брюссельской, белокочанной, цветной), лука-порея, ягод винограда, бахчевых культур хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике в темноте не более 5 дней. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре -18 °C.

Пробы виноградного и томатного сока анализируют в день изготовления.

Перед анализом образцы измельчают.

9. Выполнение определения

9.1 Экстракция

9.1.1 Ягоды винограда, плоды томатов, кабачков, огурцов,

перца, баклажанов, бахчевых культур (дыня, арбуз, тыква), шпинат, капуста (брокколи, брюссельская, белокочанная, цветная), лук-порей

Измельченный образец массой 20 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 см3, вносят 70 см3 смеси ацетон-вода (9:1, по объему), помещают на встряхиватель на 40 мин. Полученный экстракт (надосадочная жидкость) осторожно декантируют, фильтруют на воронке Бюхнера через двойной бумажный фильтр средней плотности под вакуумом. Осадок на фильтре возвращают в колбу и повторяют экстракцию дополнительной порцией смеси ацетон-вода (9:1, по объему) объемом 50 см3, выдерживая на встряхивателе 10 мин. Экстракт фильтруют на воронке Бюхнера с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, осадок на фильтре промывают 20 см3 этой же смеси, объединенный экстракт переносят в мерный цилиндр с пришлифованной пробкой на 250 см3.

Доводят общий объем раствора в цилиндре до 200 см3 смесью ацетон-вода (9:1, по объему), перемешивают. Аликвоту раствора объемом 50 см3 (соответствующую 5 г анализируемого образца), переносят в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 250 см3, добавляют 15 см3 бидистиллированной воды, концентрируют на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °C до водного остатка (около 20 см3) и подвергают очистке по п. 9.2.

9.1.2 Виноградный и томатный соки

К образцу сока массой 20 г, находящемуся в конической колбе (с пришлифованной пробкой) вместимостью 250 см3, добавляют 100 см3 ацетона, интенсивно встряхивают в течение 5 мин, помещают в холодильник (4 °C) на 1 ч. Экстракт фильтруют на воронке Бюхнера через двойной бумажный фильтр средней плотности под вакуумом, дважды промывая остаток на фильтре 20 см3 ацетоном. Полученный экстракт переносят в мерный цилиндр на 250 см3.

Доводят общий объем раствора в цилиндре до 200 см3 ацетоном, перемешивают. Аликвоту раствора объемом 50 см3 (соответствующую 5 г анализируемого образца) переносят в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 250 см3, добавляют 20 см3 бидистиллированной воды, концентрируют на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °C до водного остатка (около 20 см3) и подвергают очистке по п. 9.2.

9.2 Очистка экстракта перераспределением в системе

несмешивающихся растворителей

Водный остаток, полученный по пп. 9.1.1 или 9.1.2, переносят в делительную воронку вместимостью 250 см3. Колбу ополаскивают 80 см3 бидистиллированной воды, которую также переносят в делительную воронку. Вносят в воронку 20 см3 насыщенного водного раствора хлористого натрия, 50 см3 смеси гексан-хлористый метилен (65:35, по объему), интенсивно встряхивают в течение 5 мин. После полного разделения фаз верхний органический слой отделяют, фильтруя через слой безводного сульфата натрия (5 г), помещенного на бумажном фильтре в конусной воронке, в круглодонную колбу вместимостью 150 см3. Водную фракцию возвращают в делительную воронку и операцию экстракции повторяют дважды новыми порциями смеси гексан-хлористый метилен (65:35, по объему) объемом 30 см3, встряхивая в течение 5 мин. Объединенную органическую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °C досуха и подвергают дополнительной очистке на колонке по п. 9.3.

9.3 Очистка экстракта на колонке с силикагелем

К остатку в круглодонной колбе, полученному по п. 9.2, добавляют 0,5 см3 этилацетата, выдерживают 30 с на ультразвуковой бане и 4,5 см3 гексана, выдерживают 30 с на ультразвуковой бане. Раствор наносят на подготовленную колонку. Колбу обмывают дважды смесью гексан-этилацетат (9:1, по объему) порциями по 2,5 см3, которые также наносят на колонку, скорость прохождения растворителя через колонку 1 — 2 капли в секунду. Промывают колонку последовательно 20 см3 смеси гексан-этилацетат (9:1, по объему), элюаты отбрасывают.

Флуопиколид элюируют с колонки 40 см3 смеси гексан-этилацетат (7:3, по объему) со скоростью 1 — 2 капли в секунду, собирая элюат в круглодонную колбу вместимостью 100 см3, раствор упаривают досуха при температуре не выше 35 °C. Сухой остаток растворяют в 5 см3 ацетона и анализируют по п. 9.4.

9.4 Условия хроматографирования

Газовый хроматограф, снабженный электронозахватным детектором с пределом детектирования по линдану 5·10-14 г/с.

Хроматографическая, капиллярная, кварцевая колонка длиной 30 м, внутренним диаметром 0,32 мм, содержащая сорбент: 35% фенилполисилоксана и 86% диметилполисилоксана (толщина пленки сорбента 0,5 мкм).

Температура:	детектора 310 °C;
	испарителя 240 °C.

Температура термостата колонки программированная. Начальная температура — 170 °C, выдержка 1 мин, нагрев колонки со скоростью 10 градусов в минуту до температуры 260 °C, выдержка 2 мин 30 с, затем нагрев колонки со скоростью 20 градусов в минуту до температуры 290 °C.

Газ 1 (азот): давление 131,5 кПа, 32,5 см/с, поток 3,201 см3/мин.

Газ 2: деление потока 1:1,9; сброс 6,0 см3/мин, с 1-й мин. 20,0 см3/мин.

Хроматографируемый объем: 1 мм3.

Линейный диапазон детектирования: 0,01 — 0,1 нг.

Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор флуопиколида с концентрацией 0,1 мкг/см3, разбавляют ацетоном (не более чем в 50 раз).

10. Обработка результатов анализа

Содержание флуопиколида в пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:

X = \frac{A \cdot V \cdot K}{m} , где

X — содержание флуопиколида в пробе, мг/кг;

A — концентрация флуопиколида, найденная по градуировочной характеристике в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см3;

V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3;

m — масса анализируемого образца, г;

K — коэффициент, учитывающий объем аликвоты экстракта, взятый для анализа (равен 4).

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предел повторяемости:

\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r , где

X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r — значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8\sigma_{r} .

При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

(\overline{X} \pm \Delta) или мг/кг при вероятности P = 0,95; где

\overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг:

\Delta = \frac{\delta \cdot X}{100} , где

\delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание флуопиколида в пробе менее 0,01 мг/кг» <*>.

<*> 0,01 мг/кг — предел обнаружения флуопиколида в винограде и виноградном соке, плодах томатов и томатном соке, перце, баклажанах, кабачках, огурцах, салате, бахчевых культурах (дыня, арбуз, тыква), шпинате, капусте (брокколи, брюссельская, белокочанная, цветная), луке-порее.

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13.1 Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее трех образцов концентраций для градуировки, содержание флуопиколида в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,01 до 0,1 мкг/см3.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

A = \frac{(X - C) \cdot 100}{C} \leq B , где

X — концентрация флуопирама в пробе при контрольном измерении, мкг/см3;

C — известная концентрация градуировочного раствора флуопиколида, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;

B — норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (B = 10% при P = 0,95).

Если величина расхождения (A) превышает 10%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов флуопиколида, предусмотренных МВИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново согласно п. 7.3.

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом «добавок».

Величина добавки Cд должна удовлетворять условию:

C_{\text{д}} \geq \Delta_{\text{л},X} + \Delta_{\text{л},X\prime} , где

\pm \Delta_{\text{л},X}( \pm \Delta_{\text{л},X\prime}) — характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно) мг/кг, при этом:

\Delta_{\text{л}} = \pm 0,84\Delta , где

\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг:

\Delta = \frac{\delta \cdot X}{100} , где

Результат контроля процедуры Кк рассчитывают по формуле:

\text{К}_{\text{к}} = \overline{X}\prime - \overline{X} - C_{\text{д}} , где

\overline{X}\prime , \overline{X} , Cд — среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле

\text{К } = \sqrt{\Delta_{\text{л},X\prime}^{2} + \Delta_{\text{л},X}^{2}}

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Кк) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

|Кк| <= К, (1)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (1) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (1) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предел воспроизводимости (R):

\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq R , где (2)

X₁, X₂ - результаты измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), мг/кг;

R — предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.