МУК 4.1.2936-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств эмамектина (эмамектина бензоата) в яблоках и яблочном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 12.07.2011)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ введен в действие с 12 июля 2011 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
12 июля 2011 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ЭМАМЕКТИНА (ЭМАМЕКТИНА БЕНЗОАТА) В ЯБЛОКАХ И ЯБЛОЧНОМ СОКЕ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МУК 4.1.2936-11
с момента утверждения
1. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 02.06.2011 № 1).
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 12 июля 2011 г.
3. Введены в действие с момента утверждения.
Свидетельство о метрологической аттестации № 0082.20.04.11 от 25.04.2011.
Настоящие Методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации эмамектина бензоата (далее — эмамектина) в яблоках и яблочном соке в диапазоне 0,005 — 0,05 мг/кг.
Эмамектин бензоат — смесь эмамектина бензоата B и эмамектина бензоата 1a
B . Содержание компонента B не менее 90%. 1b 1a Эмамектин бензоат B - (10E,14E,16E,22Z)-(1R,4S,5'S,6S,6'S,8R,12S,13S,
1a
20R,21R,24S)-6'-[(S)-втро-бутил]-21,24-дигидрокси-5',11,13,22-тетраметил-
4,8 20,24 2-оксо-(3,7,19-триоксатетрацикло[15.6.1.1 .0 ]пентакоза-10,14,16,22-
тетраен)-6-спиро-2'-(5',6'-дигидро-2'H-пиран)-12-ил-2,6-дидеокси-3-O-метил- 4-O-(2,4,6-тридеокси-3-O-метил-4-метиламино-альфа-L-ликсо-гексопиранозил)- альфа-L-арабино-гексопиранозид.
Эмамектин бензоат B — (10E,14E,16E,22Z)-(1R,4S,5'S,6S,6'S,8R,12S, 1b 13S,20R,21R,24S)-21,24-дигидрокси-6'-изопропил-5',11,13,22-тетраметил-2-
4,8 20,24 оксо-(3,7,19-триоксатетрацикло-[15.6.1.1 .0 ]пентакоза-10,14,16,22-
тетраен)-6-спиро-2'-(5',6'-дигидро-2'Н-пиран)-12-ил-2,6-дидеокси-3-O-метил- 4-O-(2,4,6-тридеокси-3-O-метил-4-метил-амино-альфа-L-ликсо-гексопиранозил)- альфа-L-арабино-гексопиранозид.
Структурная формула (не приводится).
Компонент R Эмпирическая Молекулярная формула масса эмамектин бензоат B CH -CH C H NO 1008,3 1a 2 3 56 81 15 эмамектин бензоат B CH C H NO 994,2 1b 3 56 79 15 Эмамектин бензоат - кристаллический порошок с органическим запахом, цвет от белого до грязно-белого. Температура плавления 141 - 146 °C (с термальным разложением при нагревании до 300 °C). Плотность от 1,2 г/куб.
-6
*см* (23 °C). Давление паров: 4 х 10 Па (25 °C). Растворимость в воде (при 25 °C): 0,31 г/куб. дм (дистиллированная вода, pH 6,5), 0,32 г/куб. дм (буферный раствор, pH 5), 0,024 г/куб. дм (буферный раствор, pH 7), 0,0001 г/куб. дм (буферный раствор, pH 9). Растворимость в органических растворителях (г/куб. дм, при 25 °C): октанол - 48, ацетон - 140, дихлорметан - > 500, этилацетат - 81, метанол - 270, толуол - 26, гексан -
0,077, циклогексан — 0,23. Коэффициент распределения н-октанол/вода log P ow
3,0 +/- 0,1 (pH 5), 5,0 +/- 0,2 (pH 7), 5,9 +/- 0,3 (pH 9). Гидролитически
стабилен при pH 5 - 8 (25 °C). Через 6 недель при pH 9 (25 °C) отмечена
деградация, DT 19,5 недель. Подвержен быстрой фотодеградации, DT (в
50 50
исследовании квантового выхода фотолиза) — 0,89 дней.
Краткая токсикологическая характеристика:
Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс (самки) — 53 мг/кг, 50 мышей (самки) — 120 — 165 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD ) для 50 крыс — > 2000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC ) для крыс — > 50 2,12 — 4,44 мг/куб. дм (4 ч).
Эмамектин — несистемный инсектицид кишечно-контактного действия для защиты томатов, виноградной лозы, капусты и других культур от широкого спектра личинок лепидоптеры.
1. Метрологические характеристики
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/куб. дм (мг/кг) | Показатель точности (граница относительной погрешности), % P = 0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % | |
| по методу внесенонайдено | граница расширенной неопределенности <*>, U | |||||
| Яблоки | от 0,005 до 0,05 вкл. | 21,1 | 50 | 4,1 | 11 | 15 |
| Яблочный сок | от 0,005 до 0,05 вкл. | 15,8 | 50 | 3,9 | 11 | 15 |
| <*> U — граница расширенной неопределенности при коэффициенте охвата 2, в соответствии с документом SANCO/10684/2009. | ||||||
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (n = 20) приведены в табл. 2.
| Анализируемый | Метрологические параметры, P = 0,95, n = 20 | ||||
| объект | Предел обнаружения, мг/кг | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Полнота извлечения вещества, % | Стандартное отклонение, S, % | Доверительный интервал среднего результата, % |
| Яблоки | 0,005 | 0,005 — 0,05 | 83,11 | 3,83 | +/- 2,04 |
| Яблочный сок | 0,005 | 0,005 — 0,05 | 88,89 | 3,77 | +/- 2,01 |
2. Метод измерений
Методика основана на определении эмамектина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной фазе с флуоресцентным детектором после экстракции эмамектина из проб яблок и яблочного сока — ацетонитрилом, очистки аликвоты экстракта на концентрирующих патронах Oazis(R) HLB, превращения вещества во флуорогенное (N-трифторацетилированное) производное.
Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
3.1. Средства измерений
Жидкостный хроматограф с флуоресцентным детектором фирмы «Agilent» (США) Номер Госреестра 16193-06
Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 24104-2001
Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г ГОСТ 24104-2001
Колбы мерные 2-100-2, и 2-1000-2 ГОСТ 1770-74
Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 0,1; 1,0; 2,0; 5,0 и 10,0 куб. см ГОСТ 29227-91
Пробирки градуированные 2-го класса точности вместимостью 10 куб. см ГОСТ 1770-74
Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2, цена деления 1 °C, пределы измерения 0 — 55 °C ТУ 25-2021.003-88
Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 50, 500, 1000 куб. см ГОСТ 1770-74
Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2. Реактивы
Эмамектин бензоат (МК244), аналитический стандарт с содержанием действующего вещества (98,1 +/- 0,3) % (B1a 94,4%, B1b 3,7%), СА Reg. № 155569-912-8 (фирма «Syngenta»)
Ацетонитрил для хроматографии, хч ТУ 6-09-14-2167-84
Вода для лабораторного анализа (деионизованная, бидистиллированная) ГОСТ Р 52501-2005
Калий углекислый (карбонат, поташ), хч, прокаленный ГОСТ 4221-76
Кислота ортофосфорная, хч, 85% ГОСТ 6552-80 1-N-метилимидазол, фирма «Fluka» (CAS № 616-47-7, BRN 105197)
Трифторуксусный ангидрид, фирма «Fluka» (CAS № 407-25-0, BRN 746197)
Метиловый спирт (метанол), хч ГОСТ 6995-77
Фосфор (V) оксид (фосфорный ангидрид, пентоксид фосфора) ТУ 6-09-4173-85
Допускается использование реактивов иных производителей с более высокой квалификацией, не требующих выполнения п. 7.1 (очистка ацетонитрила).
3.3. Вспомогательные устройства, материалы
Аллонж прямой с отводом для вакуума (для работы с концентрирующими патронами)
Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с ТУ 64-1-2851-78
Баня ультразвуковая фирмы Донау (Швейцария)
Воронки конусные диаметром 30 — 35 мм ГОСТ 25336-82
Груша резиновая ТУ 9398-005-0576-9082-2003
Колбы грушевидные на шлифе вместимостью 20 — 25 куб. см ГОСТ 9737-93
Колбы плоскодонные (конические) с пришлифованной пробкой вместимостью 50 и 250 куб. см ГОСТ 23932-90
Мембранные фильтры микропористые марки ММК, капроновые, диаметром 50 мм, размер пор 0,45 мкм ТУ 9471-002-10471723-2003
Набор для фильтрации растворителей через мембрану
Насос водоструйный вакуумный ГОСТ 25336-82
Патроны для твердофазной экстракции Oazis(R) HLB 3cc (60 mg), WAT094226, Lot № 077B37297C (Waters, США)
Ротационный вакуумный испаритель B-169 фирмы «Buchi», Швейцария
Установка для перегонки растворителей
Хроматографическая колонка стальная длиной 150 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая Eclipse XDB C18, зернение 5 мкм
Центрифуга роторная, скорость вращения до 3500 об./мин., с центрифужными стаканами объемом 100 куб. см
Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 50 — 100 куб. мм
Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4. Требования безопасности
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и 2.2.5.2308-07. Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004-90.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе, освоивших данную методику и подтвердивших экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.
К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.
6. Условия измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7. Подготовка к выполнению измерений
Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка ацетонитрила (при необходимости), приготовление реактива для дериватизации, подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, приготовление растворов для градуировки и внесения, установление градуировочной характеристики, подготовка концентрирующих патронов Oazis(R) HLB.
7.1. Очистка ацетонитрила
Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на 1 куб. дм ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 ч, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 куб. дм ацетонитрила 10 г карбоната калия).
7.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ
7.2.1. Приготовление раствора ортофосфорной кислоты с массовой долей 0,1% (0,1%-й раствор). В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 250 — 300 куб. см бидистиллированной воды, вносят 1 куб. см ортофосфорной кислоты, доводят водой до метки, перемешивают.
7.2.2. Приготовление подвижной фазы. В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 950 куб. см ацетонитрила, вносят 50 куб. см 0,1%-го раствора ортофосфорной кислоты, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр.
7.3. Кондиционирование хроматографической колонки
Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.2) при скорости подачи растворителя 1,3 куб. см/мин. до установления стабильной базовой линии.
7.4. Приготовление реактива для дериватизации
Смешивают трифторуксусный ангидрид и свежеперегнанный ацетонитрил в объемном соотношении 1:2. Реактив годен в течение рабочего дня.
7.5. Приготовление градуировочных растворов и растворов внесения
7.5.1. Исходный раствор эмамектина для градуировки (концентрация 200 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,0200 г эмамектина, растворяют в 50 — 60 куб. см ацетонитрила, доводят ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают.
Раствор хранят в морозильной камере при температуре -18 °C в течение 6 месяцев.
Растворы № 1 — 5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.
7.5.2. Раствор № 1 эмамектина для градуировки и внесения (концентрация 2 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 1 куб. см исходного раствора эмамектина с концентрацией 200 мкг/куб. см (п. 7.5.1), разбавляют ацетонитрилом до метки.
Градуировочный раствор № 1 хранят в морозильной камере при температуре -18 °C в течение 6 месяцев.
Этот раствор используют для приготовления проб яблок и яблочного сока с внесением эмамектина при оценке полноты извлечения вещества методом «внесено-найдено», а также контроле качества результатов измерений методом добавок.
7.5.3. Рабочие растворы № 2 — 5 эмамектина для градуировки (концентрация 0,01 — 0,1 мкг/куб. см). В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают по 0,5; 1,0; 2,5 и 5,0 куб. см градуировочного раствора № 1 с концентрацией 2 мкг/куб. см (п. 7.5.2), доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 2 — 5 с концентрацией эмамектина 0,01; 0,02; 0,05 и 0,1 мкг/куб. см соответственно.
Рабочие растворы сразу после приготовления помещают в морозильную камеру, где хранят при температуре -18 °C в течение 6 месяцев.
7.5.4. Рабочие растворы № 2а — 5а флуорогенного производного эмамектина для градуировки (соответствуют концентрации эмамектина 0,01 — 0,1 мкг/куб. см). В 4 градуированные пробирки вместимостью 10 куб. см вносят по 1 куб. см каждого из 4 рабочих растворов эмамектина № 2 — 5 (п. 7.5.3), прибавляют по 0,1 куб. см 1-N-метилимидазола, перемешивают. Смесь охлаждают до 0 — 5 °C, помещая пробирки на ледяную баню, добавляют по каплям 0,3 куб. см реактива для дериватизации (приготовленного по п. 7.4), перемешивают и выдерживают час при комнатной температуре. Затем в каждую пробирку вносят по 0,6 куб. см бидистиллированной воды и 3 куб. см ацетонитрила, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 2а — 5а флуорогенного производного с концентрацией эмамектина 0,01; 0,02; 0,05 и 0,1 мкг/куб. см соответственно.
Рабочие растворы сразу после приготовления помещают в морозильную камеру, где хранят при температуре -18 °C в течение месяца.
7.6. Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (ЕЛ х с) от концентрации эмамектина в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам флуорогенного производного эмамектина № 2а — 5а для градуировки.
В инжектор хроматографа вводят по 10 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.5. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений.
Устанавливают площади пиков (ЕЛ х с) флуорогенного производного основного компонента действующего вещества - эмамектина бензоата B .
1a
Градуировочную характеристику проверяют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов. Если значение площадей отличается более чем на 11% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие растворы для градуировки.
7.7. Подготовка концентрирующих патронов Oazis(R) HLB
Патрон устанавливают на аллонж с прямым отводом для вакуума и промывают с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом. Используют 1 куб. см метанола, затем 2 куб. см бидистиллированной воды со скоростью прохождения растворителей через патрон 1 — 2 капли в секунду. Патроны готовят непосредственно перед анализом.
8. Отбор и хранение проб
Отбор проб производится в соответствии с правилами, определенными ГОСТами: 16270-70 «Яблоки свежие ранних сортов созревания», ТУ. 21122-75 «Яблоки свежие поздних сортов созревания. ТУ»; 27572-87 «Яблоки свежие для промышленной переработки»; 26313-84 «Продукты переработки плодов и овощей», «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (N 2051-79 от 21.08.79).
Пробы яблок хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более 5 дней, яблочный сок анализируют в день приготовления.
Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре -18 °C.
Перед анализом яблоки измельчают.
9. Выполнение измерений
9.1. Экстракция
Образец измельченных яблок массой 10 г (m) помещают в коническую колбу вместимостью 250 куб. см, добавляют порцию ацетонитрила объемом 47 куб. см, помещают на 3 мин. в ультразвуковую баню, затем 15 мин. встряхивают на механическом встряхивателе. Пробе дают отстояться, переносят в центрифужный стакан и центрифугируют 5 мин. при 3500 об./мин. Аликвоту надосадочной жидкости объемом 10 куб. см (1/5 часть экстракта) с помощью пипетки переносят в плоскодонную колбу вместимостью 50 куб. см, добавляют порцию бидистиллированной воды объемом 18 куб. см, помещают на 2 мин. в ультразвуковую баню, подвергают очистке по п. 9.2, затем дериватизации по п. 9.3.
9.2. Очистка экстракта на концентрирующем патроне Oazis HLB
Пробу, полученную по п. 9.1 или 9.4, вносят с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом на концентрирующий патрон Oazis HLB 3сс (60 mg), подготовленный по п. 7.7, со скоростью пропускания раствора 2 — 3 кап./с, не допуская пересыхания патрона. После нанесения пробы патрон промывают 2 куб. см смеси вода-ацетонитрил (7:3 по объему), пропуская растворитель до нижнего края сорбента, элюаты отбрасывают. Вещество элюируют с патрона 2 куб. см ацетонитрила, собирая элюат непосредственно в круглодоннную колбу для упаривания вместимостью 20 — 25 куб. см (при сборе элюата в пробирку и последующем переносе раствора в колбу для упаривания пробирку необходимо обмыть дважды порциями ацетонитрила по 2 — 3 куб. см). Растворитель упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °C досуха. Для полного удаления следов влаги в колбу вносят 3 — 5 куб. см ацетонитрила и вновь упаривают. Остаток в колбе растворяют в 1 куб. см ацетонитрила (V), помещая в ультразвуковую баню на 2 мин. и подвергают дериватизации по п. 9.3.
9.3. Дериватизация
К ацетонитрильному раствору, полученному по п. 9.2, прибавляют 0,1 куб. см 1-N-метилимидазола, перемешивают. Смесь охлаждают до 0 — 5 °C, помещая пробирки с ледяную баню, добавляют по каплям 0,3 куб. см реактива для дериватизации (приготовленного по п. 7.3), перемешивают и выдерживают час при комнатной температуре. По окончании процесса в пробирку вносят 0,6 куб. см бидистиллированной воды и 3 куб. см ацетонитрила, тщательно перемешивают и анализируют в условиях хроматографирования, указанных в п. 9.5.
9.4. Яблочный сок
Образец сока массой 10 г (m) помещают в коническую колбу вместимостью 250 куб. см, добавляют 40 куб. см ацетонитрила, помещают на 5 мин. в ультразвуковую баню, затем 15 мин. встряхивают на механическом встряхивателе. Пробу переносят в центрифужный стакан и центрифугируют 5 мин. при 3500 об./мин. Аликвоту надосадочной жидкости объемом 10 куб. см (1/5 часть экстракта) с помощью пипетки переносят в плоскодонную колбу вместимостью 50 куб. см, добавляют 15 куб. см бидистиллированной воды, помещают на 2 мин. в ультразвуковую баню, подвергают очистке по п. 9.2, затем дериватизации по п. 9.3.
9.5. Условия хроматографирования
Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:
Жидкостный хроматограф с флуоресцентным детектором с переменной длиной волны.
Хроматографическая колонка стальная длиной 150 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая Eclipse XDB C18, зернение 5 мкм.
Длина волны: возбуждение 365 нм;
Объем вводимой пробы: 10 куб. мм.
Подвижная фаза: ацетонитрил — 0,1%-я ортофосфорная кислота (95:5 по объему).
Скорость потока элюента: 1,3 куб. см/мин.
эмамектин бензоат B : 9,940 — 10,310 мин.; 1b
эмамектин бензоат B : 12,358 — 13,153 мин. (основной пик). 1a
Линейный диапазон детектирования: 0,1 — 1,0 нг.
Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика (ЕЛ х с) флуорогенного производного эмамектина бензоата B
1a
(основной пик), находят среднее значение, с помощью градуировочной характеристики определяют концентрацию эмамектина в хроматографируемом
растворе.
Образцы, дающие пики, большие чем градуировочный раствор флуорогенного производного эмамектина с концентрацией 0,1 мкг/куб. см, разбавляют ацетонитрилом (не более чем в 10 раз).
10. Обработка результатов анализа
Содержание эмамектина в пробе рассчитывают по формуле:
A х V х K
где:
A - концентрация эмамектина в хроматографируемом растворе, найденная по
градуировочному графику в соответствии с усредненной величиной площади хроматографического пика флуорогенного производного эмамектина бензоата B , мкг/куб. см;
1a V — объем экстракта, подготовленного для дериватизации, куб. см; m — масса анализируемого образца, г; K = 5 с учетом объема экстракта, взятого для анализа.
11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
2 х |X - X | х 100
1 2
------------------- <= r, (1)
(X + X )
1 2
где:
X , X - результаты параллельных определений, мг/кг
1 2
r — значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8 сигма . r
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
12. Оформление результатов
Результат анализа представляют в виде:
_
(X +/- ДЕЛЬТА) мг/кг, при вероятности P = 0,95,
где:
_
X - среднее арифметическое результатов определений, признанных
приемлемыми, мг/кг; ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
U х X
где U — граница расширенной неопределенности (табл. 1), %.
Если содержание эмамектина менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание эмамектина в пробе яблок и яблочного сока — менее 0,005 мг/кг» <*>.
13. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-(1-6)-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
Величина добавки C должна удовлетворять условию: д
C >= ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _ , д л,X л,X' где +/- ДЕЛЬТА _ (+/- ДЕЛЬТА _ ) - характеристика погрешности л,X л,X' (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента
в образце с добавкой), мг/кг, при этом:
где ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг;
U х X
где U — граница расширенной неопределенности (табл. 1), %.
Контрольный параметр процедуры (K ) рассчитывают по формуле: к
_ _ K = X' - X - C , к д _ _ где X', X, C - среднее арифметическое результатов параллельных
д
определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг.
Норматив контроля K рассчитывают по формуле:
_____________________
/ 2 2 K = \/ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _. л,X' л,X Проводят сопоставление результата контроля процедуры (K ) с нормативом
к
контроля (K).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:
|K | <= K, (2) к процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.3 Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:
Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):
2 х |X - X | х 100
1 2
------------------- <= R, (3)
(X + X )
1 2
где:
X , X - результаты измерений выполненных в условиях воспроизводимости
1 2
(разное время, разные операторы, разные лаборатории, мг/кг; R — предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном определяемых
концентраций, табл. 1), %.
14. Разработчики
ФГУН «Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана» Роспотребнадзора.