МУК 4.1.2459-09. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств дикамбы в кукурузном масле методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 02.02.2009)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ введен в действие с 29 апреля 2009 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
2 февраля 2009 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ДИКАМБЫ В КУКУРУЗНОМ МАСЛЕ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МУК 4.1.2459-09
29 апреля 2009 года
1. Разработаны сотрудниками Всероссийского НИИ защиты растений.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 25 декабря 2008 г. № 3).
3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 2 февраля 2009 г.
4. Введены в действие с 29 апреля 2009 г.
Настоящие Методические указания устанавливают метод капиллярной газожидкостной хроматографии для определения остаточных количеств дикамбы в масле кукурузы в диапазоне концентраций 0,005 — 0,04 мг/кг.
Название по номенклатуре ICO: дикамба.
Название по номенклатуре IUPAC: 3,6-dichloro-o-anisic acid.
Структурная формула (не приводится).
Химически чистое вещество: кристаллы белого цвета.
Температура плавления: 114 — 116 °С.
Растворимость (г/кг) при 25 °С: в воде — 6,5, этаноле — 922, ацетоне — 810, дихлорметане — 260, толуоле — 130.
В обычных условиях дикамба и ее препараты устойчивы, с основаниями дикамба образует хорошо растворимые в воде соли.
Краткая токсикологическая характеристика
Дикамба и ее метаболиты малотоксичны для теплокровных, LD для крыс — 50 2000 — 3000 мг/кг.
Гигиенические нормативы: ПДК в воде водоемов — 0,02 мг/куб. дм, ПДК в почве — 0,25 мг/кг, МДУ в зерне хлебных злаков, кукурузе, просе — не допускается.
Гербицид для борьбы с однолетними и некоторыми многолетними двудольными сорными растениями на посевах зерновых культур.
1. Определение дикамбы в кукурузном масле методом капиллярной газожидкостной хроматографии
1.1. Принцип метода
Метод основан на извлечении остаточных количеств дикамбы из анализируемого объекта органическими растворителями, проведении очистки экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и метилировании дикамбы диазометаном. Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки с применением капиллярной газожидкостной хроматографии и использованием детектора электронного захвата (ДЭЗ).
1.2. Метрологическая характеристика метода
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.
| Объект анализа | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, Р = 0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % |
|---|---|---|---|---|---|
| Масло кукурузы | 0,005 — 0,04 | 50 | 3,7 | 10,8 | 12,5 |
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.
ДОВЕРИТЕЛЬНЫЙ ИНТЕРВАЛ СРЕДНЕГО РЕЗУЛЬТАТА ДЛЯ ДИКАМБЫ
| Объект анализа | Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20 | ||||
| Предел обнаружения, мг/кг | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Среднее значение определения, % | Стандартное отклонение, S, % | Доверительный интервал среднего результата, % | |
| Масло кукурузы | 0,005 | 0,005 — 0,04 | 78,7 | 3,8 | 5,3 |
1.3. Избирательность метода
Метод специфичен в присутствии других применяемых пестицидов. Проведение очистки экстрактов, а также использование капиллярной колонки и селективного детектора позволяет устранять влияние коэкстрактивных веществ на результаты анализа.
1.4. Реактивы, растворы, материалы
Аналитический стандарт дикамбы
Азот газообразный высокой чистоты ТУ 301-07-25-89 Ацетон, осч ТУ 2633-004-11291058-94 Ацетонитрил для хроматографии, хч ТУ 6-09-4326-76 Вата медицинская ТУ 9393-001-00302238-97 Вода дистиллированная ГОСТ 7602-72 н-Гексан, хч ТУ 6-09-3375-78 Дихлорметан, хч ТУ 6-09-2662-77
Изооктан эталонный ГОСТ 12433-83
Калия гидроокись, чда ГОСТ 24363-80
Натрий сернокислый б/в (сульфат), чда ГОСТ 4166-76
Натрий хлористый, чда ГОСТ 4233-77
N-Нитрозометилмочевина, хч ТУ 6-09-11-1643-82
Серная кислота, осч ГОСТ 14262-78
Смесь н-гексан:этиловый эфир, 50:50, по объему
Фильтры бумажные "красная лента" ТУ 2642-001-42624157-98 Фильтры бумажные "белая лента" ТУ 2642-001-42624157-98 Фильтры бумажные "синяя лента" ТУ 2642-001-42624157-98 Эфир этиловый (серный) ОСТ 84-2006-88
1.5. Приборы, аппаратура, посуда
Колонка хроматографическая кварцевая капиллярная длиной 30 м, внутренним диаметром 0,32 мм с неподвижной фазой ВР-50 (типа OV-17), толщина пленки 0,5 мкм
Аппарат для встряхивания или аналогичный ТУ 64-1-1081-73 Весы аналитические типа ВЛА-200 ГОСТ 34104-80
Весы лабораторные типа ВЛКТ-500 ГОСТ 24104-80
Воронки делительные емкостью 250 и 500 куб. см ГОСТ 25336-82
Воронки химические конусные ГОСТ 25336-82
Индикаторная бумага универсальная ТУ 6-09-1181-76
Колбы-концентраторы емкостью 250 куб. см ГОСТ 25336-82
Колбы плоскодонные емкостью 100 и 300 куб. см ГОСТ 25336-82
Колбы мерные со шлифом емкостью 25, 50, 100 куб. см ГОСТ 1770-74
Колпачки алюминиевые для герметизации флаконов ГОСТ Р 51314-99
Мельница электрическая лабораторная или аналогичная ТУ 46-22-236-79
Микрошприц МШ-10 ТУ 2-833-106 Насос водоструйный ГОСТ 10696-75
Ротационный вакуумный испаритель типа ИР-1 или аналогичный
Пипетки мерные емкостью 1, 2, 5 и 10 куб. см ГОСТ 20292-74
Приспособление для обжима колпачков на флаконах ТУ 42-2-2442-73
Пробирки мерные со шлифом емкостью 5,0 куб. см ГОСТ 1770-74
Стаканы химические на 100, 200 и 500 куб. см ГОСТ 25336-82
Установка для перегонки растворителей при атмосферном давлении
Установка для упаривания растворителей в токе азота
Установка ультразвуковая «Серьга» УЗМ002 или аналогичная
Флаконы стеклянные (типа пенициллиновых) емкостью 5,0 куб. см ТУ 64-2-10-87
1.6. Подготовка к определению
1.6.1. Подготовка и очистка растворителей. Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 куб. см растворителя упаривают в ротационном вакуумном испарителе при температуре +40 °С до объема 1,0 см и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с общепринятыми методиками.
1.6.2. Приготовление стандартных растворов. Основной раствор дикамбы с содержанием 100 мкг/куб. см готовят растворением в ацетоне 0,01 г аналитического стандарта дикамбы в мерной колбе емкостью 100 куб. см. Раствор хранят в холодильнике при температуре +4 — 6 °С не более трех месяцев.
Рабочие стандартные растворы с концентрациями 0,8; 0,4; 0,2 и 0,1 мкг/куб. см готовят из основного стандартного раствора дикамбы последовательным разбавлением ацетоном. Рабочие растворы хранят в холодильнике при температуре +4 — 6 °С не более месяца. В модельных опытах при изучении полноты извлечения дикамбы используют ацетоновые растворы стандартного вещества.
Для приготовления калибровочных растворов в мерные пробирки со шлифом емкостью 5,0 куб. см вносят по 1,0 куб. см рабочих растворов дикамбы с концентрациями 0,1; 0,2; 0,4 и 0,8 мкг/куб. см. Растворитель в пробирках упаривают в токе азота досуха и проводят метилирование дикамбы по п. 1.6.3.
1.6.3. Метилирование дикамбы. В пробирки с сухим остатком добавляют по 2,0 куб. см свежеприготовленного по п. 1.6.5 эфирного раствора диазометана. Пробирки закрывают пробками и ставят на 12 — 14 ч (на ночь) в холодильник с температурой +4 — 6 °С. После этого этиловый эфир в пробирках упаривают в токе азота досуха и сухой остаток растворяют в 1,0 куб. см изооктана.
1.6.4. Построение калибровочного графика. Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа (п. 1.8.3) вводят по 1 мкл приготовленных по п. 1.6.3 растворов, содержащих дикамбу (в виде производного) в концентрациях 0,1; 0,2; 0,4 и 0,8 мкг/куб. см. Осуществляют не менее трех параллельных измерений и находят среднее значение высоты (площади) хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости высоты (площади) хроматографического пика в мм (кв. мм) от концентрации дикамбы в рабочем растворе в мкг/куб. см.
1.6.5. Приготовление эфирного раствора диазометана (из расчета метилирования экстрактов 2-х проб). N-Нитрозометилмочевину массой 0,5 г помещают во флакон емкостью 2,0 — 3,0 куб. см и герметизируют резиновой пробкой и колпачком с помощью приспособления для обжима колпачков на флаконах. Этиловый эфир объемом 4,0 куб. см вносят в другой флакон емкостью 5,0 куб. см, герметизируют резиновой пробкой и колпачком и охлаждают в морозильной камере холодильника в течение 30 мин.
После этого флаконы через предварительно проколотые пробки соединяют гибкой тефлоновой трубкой (внутр. диам. ~ 1,5 — 2,0 мм), одним концом погружая ее в этиловый эфир на всю глубину (флакон с охлажденным этиловым эфиром обязательно должен еще иметь свободный выход в атмосферу). Во флакон с нитрозометилмочевиной, используя шприц с тонкой иглой и прокалывая пробку, добавляют по каплям по стенке 50%-ный водный раствор гидроокиси калия (~ 0,3 куб. см) до прекращения реакции. Этиловый эфир при насыщении диазометаном окрашивается в ярко-желтый цвет.
Внимание! Приготовление эфирного раствора диазометана и процедуру метилирования необходимо проводить в работающем вытяжном шкафу.
1.7. Отбор, первичная обработка и хранение проб
Отбор проб для анализа проводят в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» N 2051-79 от 21.08.1979, а также в соответствии с ГОСТ 8808-91 «Масло кукурузное, ТУ».
Для исследовательских целей допускается получение масла в лаборатории из проб измельченного зерна методом экстракции органическим растворителем при температуре не выше +40 °С. Пробы масла хранят при +4 — 6 °С в закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре не более 30 суток.
1.8. Проведение определения
1.8.1. Экстракция дикамбы. Аналитическую пробу масла массой 10,0 +/- 0,1 г растворяют в 50 куб. см н-гексана (насыщенного ацетонитрилом) в плоскодонной колбе емкостью 100 куб. см и после этого гексановый раствор масла переносят в делительную воронку емкостью 250 куб. см. Колбу промывают 50 куб. см ацетонитрила (насыщенного н-гексаном) и переносят его в воронку. Содержимое воронки встряхивают в течение 2 мин. После 5-минутного отстаивания нижний ацетонитрильный слой сливают в колбу-концентратор емкостью 250 куб. см. Плоскодонную колбу промывают 25 куб. см ацетонитрила (насыщенного н-гексаном) и также переносят в воронку (250 куб. см). Содержимое воронки встряхивают в течение 2 мин., отстаивают 5 мин. и нижний ацетонитрильный слой объединяют с предыдущим. Верхний гексановый слой отбрасывают.
Колбу-концентратор с объединенным ацетонитрильным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворитель досуха при температуре 50 °С. Сухой остаток растворяют в 20 куб. см ацетона. К раствору добавляют 200 куб. см дистиллированной воды, 2,0 куб. см 5,0%-ного водного раствора серной кислоты и содержимое колбы перемешивают встряхиванием. Колбу-концентратор помещают в холодильник и выдерживают при температуре +4 — 6 °С в течение 4 — 5 ч. После этого содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр белая лента в делительную воронку емкостью 500 куб. см. В воронку добавляют 10%-ный водный раствор гидроокиси калия до pH 9 — 10, 10 куб. см насыщенного водного раствора хлористого натрия и, после перемешивания, 75 куб. см дихлорметана. Содержимое воронки энергично встряхивают в течение 2 мин. После 15-минутного отстаивания нижний дихлорметановый слой сливают и отбрасывают. Процедуру очистки экстракта с использованием 50 куб. см дихлорметана повторяют. Далее в воронку добавляют 40 куб. см насыщенного водного раствора хлористого натрия и после перемешивания 75 куб. см н-гексана. Содержимое воронки энергично встряхивают в течение 2 мин. После 5-минутного отстаивания нижний ацетоно-водный слой сливают в химический стакан емкостью 500 куб. см, а верхний гексановый слой сливают и отбрасывают.
Водный раствор пробы, находящийся в химическом стакане, подкисляют концентрированной серной кислотой до pH 2,0 и переносят в чистую делительную воронку емкостью 500 куб. см. В воронку добавляют 75 куб. см смеси гексан — этиловый эфир (50:50) и встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения слоев нижний водный слой сливают в химический стакан, а верхний гексано-эфирный слой фильтруют через фильтр синяя лента со слоем безводного сульфата натрия (толщина слоя ~1,0 — 1,5 см) в колбу-концентратор емкостью 250 куб. см. Экстрагирование и фильтрование повторяют с использованием 50 куб. см смеси гексан — этиловый эфир (50:50). Нижний водный слой отбрасывают.
Колбу-концентратор с объединенным гексано-эфирным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворители при температуре +40 °С до объема 3 — 5 куб. см. Остаток экстракта количественно переносят в мерную пробирку со шлифом емкостью 5,0 куб. см и упаривают растворители в токе азота досуха при температуре +40 °С.
1.8.2. Метилирование дикамбы. В пробирку с сухим остатком добавляют 2,0 куб. см свежеприготовленного по п. 1.6.5 эфирного раствора диазометана. Пробирку закрывают пробкой и ставят на 12 — 14 ч (на ночь) в холодильник с температурой +4 — 6 °С. После этого этиловый эфир в пробирках упаривают в токе азота досуха и сухой остаток растворяют в 0,5 куб. см изооктана.
Газохроматографический анализ на содержание дикамбы проводят по п. 1.8.3.
1.8.3 Условия хроматографирования. Газовый хроматограф с ДЭЗ.
Колонка хроматографическая кварцевая капиллярная длиной 30 м, внутренним диаметром 0,32 мм, с неподвижной фазой ВР-50 (типа OV-17), толщина слоя 0,5 мкм.
Температура колонки: программирование от 80 °С (1 мин.) до 280 °С (25 мин.) со скоростью 8,0 °С/мин.
Температура испарителя: 240 °С.
Температура детектора: 300 °С.
Расход газов: газа-носителя (азот в/ч) — 2,0 куб. см/мин., дополнительного газа (азот в/ч) к ДЭЗ — 40 куб. см/мин.
Количество вводимой в хроматограф аликвоты: 1 мкл.
Время удерживания дикамбы (в виде производного): 14,75 +/- 0,05 мин.
Предел детектирования: 0,05 нг.
Линейный диапазон детектирования: 0,1 — 0,8 нг.
1.8.4 Обработка результатов анализа. Содержание дикамбы рассчитывают методом внешнего стандарта по формуле:
Н х А х V
1
где:
Х - содержание дикамбы в пробе, мг/кг;
Н - высота (площадь) пика анализируемого вещества, мм (кв. мм);
1
Н - высота (площадь) пика стандартного вещества, мм (кв. мм);
0
А - концентрация стандартного раствора дикамбы, мкг/куб. см;
V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
m - масса (г) аналитической пробы.
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела
повторяемости (1):
2 х |Х - Х | х 100
1 2
------------------- <= r, (1)
(Х + Х )
1 2
где:
Х , Х - результаты параллельных определений, мг/кг;
1 2
r - значение предела повторяемости (r = 2,8 сигма ).
r
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
Результат анализа представляют в виде:
_
(Х +/- ДЕЛЬТА), мг/кг, при вероятности Р = 0,95,
где:
_
Х - среднее арифметическое результатов определений, признанных
приемлемыми, мг/кг; ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
Х
где дельта — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание вещества в пробе менее 0,005 мг/кг».
2. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.
Величина добавки С должна удовлетворять условию: д
С = ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _ , д л,Х л,Х' где +/- ДЕЛЬТА _ (+/- ДЕЛЬТА _ ) - характеристика погрешности л,Х л,Х' (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента
в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:
где ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг;
Х
где дельта - граница относительной погрешности методики (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
Результат контроля процедуры К рассчитывают по формуле: к
_ _ К = Х' - Х - С , к д _ _ где Х', Х, С - среднее арифметическое результатов параллельных
д
определений (признанных приемлемыми по п. 11), содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки
соответственно, мг/кг.
Норматив контроля К рассчитывают по формуле:
_____________________
/ 2 2 К = \/ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _. л,Х' л,Х Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К ) с нормативом
к
контроля (К).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):
2 х |Х - Х | х 100
1 2
------------------- <= R, (3)
(Х + Х )
1 2
где:
Х , Х - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
1 2
R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций,
табл. 1), %.
3. Требования техники безопасности
При проведении работы необходимо соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами, ГОСТ 12.1.005-88.
При выполнении измерений с использованием хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробезопасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.
Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91.
Необходимо соблюдать общепринятые правила техники безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами, а также требования, изложенные в документации к приборам.
4. Требования к квалификации оператора
Измерения в соответствии с настоящей Методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом газожидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 5.