МР 01.017-07. Оценка качества этиловых спиртов, водок и алкогольной продукции. Экспресс-метод с использованием бактериальной биолюминесценции

(утв. Роспотребнадзором 15.06.2007)

ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ

flowchart LR
  n0["Экспресс-метод оценки токсичности... (от 28.05.2001 N ФЦ/1859)"]:::rst
  click n0 "https://bukva.ai/docs/fts1859" "Экспресс-метод оценки токсичности спиртов и водок с использованием люминесцентных микроорганизмов. Методические рекомендации (утв. Минздравом России 28.05.2001 N ФЦ/1859)"
  n1["МР 01.017-07"]:::doc
  click n1 "https://bukva.ai/docs/mr-01-017-07" "МР 01.017-07. Оценка качества этиловых спиртов, водок и алкогольной продукции. Экспресс-метод с использованием бактериальной биолюминесценции (утв. Роспотребнадзором 15.06.2007)"
  n0 --> n1
classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000;
classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000;
classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;

ОЦЕНКА КАЧЕСТВА ЭТИЛОВЫХ СПИРТОВ, ВОДОК И АЛКОГОЛЬНОЙ ПРОДУКЦИИ. ЭКСПРЕСС-МЕТОД С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИАЛЬНОЙ БИОЛЮМИНЕСЦЕНЦИИ

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Методические рекомендации разработаны ГУ НИИ экологии человека и гигиены окружающей среды им. А.Н. Сысина РАМН (Ревазова Ю.А., Хрипач Л.В.), Институтом наркологии Минздрава России (Нужный В.П.), Московским государственным университетом им. М.В. Ломоносова (Данилов В.С.), ФГУЗ ФЦГиЭ Роспотребнадзора (Брагина И.В., Ластенко Н.С., Федосеева Т.А.), ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в г. Москве» (Прихожан Л.М.).

2. С выходом настоящих методических рекомендаций утрачивают силу методические рекомендации «Экспресс-метод оценки токсичности спиртов и водок с использованием люминесцентных микроорганизмов» от 28 мая 2001 г. МР № ФЦ/1859.

1. Назначение и область применения

Методика предназначена для быстрого контроля качества этиловых спиртов и водок, крепких алкогольных напитков, изготовленных на основе ректификованного этилового спирта с добавками биологических веществ (настойки, наливки, бальзамы и т.п.), крепких напитков, изготовляемых на основе спирта, полученного путем перегонки (бренди, виски и т.п.), и других алкогольных напитков. Тест-система представлена биосенсорами серии «Эколюм» и измерительным прибором серии «Биотокс-10».

Качество алкогольных напитков оценивается по степени интегральной токсичности образца по сравнению с эталоном этилового спирта или по сравнению с готовой продукцией, предварительно признанной качественной медико-биологическими и другими методами.

2. Нормативные ссылки

1. Федеральный закон «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения» от 30 марта 1999 г. № 52-ФЗ в редакции Федерального закона от 22 августа 2004 г. № 122-ФЗ.

2. СанПиН 2.3.2.1078-00 «Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов».

3. «Положение о государственном санитарно-эпидемиологическом нормировании», утвержденное Постановлением Правительства Российской Федерации от 5 июня 1994 г. № 625, с изменениями и дополнениями от 30 июня 1998 г. № 680.

4. Федеральный закон «О качестве и безопасности пищевых продуктов» от 02.01.2000 № 29-ФЗ.

5. Постановление Главного государственного санитарного врача Российской Федерации «Об усилении Госсанэпиднадзора за алкогольной продукцией» от 20.04.2000 № 2.

6. Постановление Главного государственного санитарного врача Российской Федерации «Об усилении мероприятий, направленных на предупреждение вредного воздействия алкогольной продукции на здоровье населения» от 27.04.2001 № 13.

7. ГОСТ Р 51698-2000 «Водка и спирт этиловый. Газохроматографический экспресс-метод определения содержания токсичных микропримесей».

3. Термины и определения

Санитарно-гигиенический государственный контроль осуществляется с целью регулярного слежения за соблюдением нормативов качества окружающей среды и предупреждения попадания токсических веществ в различные объекты и в том числе — пищевые продукты.

Химическое загрязнение пищевых продуктов — изменение химического состава пищевых продуктов и напитков, вызывающее снижение их качества и, вследствие этого, возможную опасность для здоровья населения.

Токсичность — степень проявления вредного действия разнообразных химических соединений и их смесей. Токсичность — один из важных факторов, определяющих качество пищевого продукта, достаточно информативный, существенно дополняющий наше представление о степени опасности или безопасности при его использовании, являющийся необходимой составной частью комплексной системы контроля при стандартном анализе.

Критерий токсичности (индекс токсичности) — достоверное количественное значение тест-параметра, на основании которого делается вывод о токсичности продукта. Среди тест-параметров наиболее часто используют выживаемость, плодовитость, подавление ферментативной и метаболической активности организмов.

Тест-реакция — это изменение какого-либо биохимического, морфологического, поведенческого или функционального показателя у тест-объекта под воздействием токсиканта или их смесей.

Биотестирование — проведение анализов по определению токсичности с помощью живых организмов. Результаты оперативно сигнализируют об опасном воздействии химического загрязнения на жизнедеятельность организмов, причем не по отдельным компонентам, а по их смесям, часто неизвестной природы и не выявляемых другими методами анализа токсических веществ.

Токсические эффекты, регистрируемые методами биотестирования, включают комплексный, синергический, антагонистический и дополнительные воздействия всех химических, физических и биологических компонентов, присутствующих в исследуемом образце, неблагоприятно влияющие на физиологические, биохимические и генетические функции тест-организмов.

Биолюминесценция — интенсивное свечение в видимой области спектра, отражающее специфическую ферментативную функцию и общую метаболическую активность организмов.

4. Принцип методики

В качестве тест-объекта используются препараты лиофилизированных люминесцентных бактерий или ферментные препараты бактериальной люциферазы. Методика основана на определении изменения интенсивности биолюминесценции биосенсора при воздействии химических веществ, присутствующих в анализируемой пробе воды, по сравнению с контролем. Люминесцентные бактерии оптимальным образом сочетают в себе различные типы чувствительных структур, ответственных за генерацию биоповреждений (клеточная мембрана, цепи метаболического обмена, генетический аппарат), с экспрессностью, объективным и количественным характером отклика целостной системы на интегральное воздействие токсикантов. Это обеспечивается тем, что люминесцентные бактерии содержат фермент люциферазу, осуществляющую эффективную трансформацию энергии химических связей жизненно важных метаболитов в световой сигнал на уровне, доступном для экспрессных и количественных измерений.

При изучении токсикологических свойств различных объектов люминесцентный бактериальный тест показывает хорошую корреляцию с их действием на животных, культуры клеток человека и другие известные биотесты.

Критерием токсичности анализируемой пробы является изменение интенсивности биолюминесценции тест-объекта под воздействием химических соединений, содержащихся в анализируемой пробе спиртосодержащей продукции, по сравнению с эталонным раствором этанола. Уменьшение интенсивности биолюминесценции пропорционально токсическому эффекту. Критерием оценки качества алкогольной продукции служит оценка соответствия индекса токсичности индексу эталонных образцов данной продукции.

5. Количественная оценка параметров тест-реакции

Токсическое действие исследуемой пробы на биосенсор определяется по уменьшению интенсивности биолюминесценции за 15-минутный (в экспрессном варианте — 5 минут) период экспозиции. Количественные оценки тест-реакции выражаются в виде безразмерной величины — индекса токсичности «Т».

Индекс токсичности «Т» равен отношению Т = 100 (Io — I) / Io, где Io и I, соответственно, интенсивность биолюминесценции контроля и опыта при фиксированном времени экспозиции исследуемой пробы с биосенсором.

Методика предусматривает три пороговых уровня индекса токсичности:

• допустимая степень токсичности образца: индекс токсичности меньше 20;
• образец токсичен: индекс токсичности равен или больше 20 и меньше 50;
• образец сильно токсичен: индекс токсичности равен или более 50.

6. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы

1. Набор для анализа «Эколюм»:

• лиофилизированная культура микроорганизмов «Эколюм» или ферментные препараты бактериальной люциферазы, ТУ 2639-236-00209792-01.
• флакон с регидратирующим раствором;
• флакон с раствором эталонного этилового спирта (спит этиловый марки «Экстра», ГОСТ 5962-67);

2. Прибор серии «Биотокс-10», сертификат об утверждении типа средств измерений RU.C.31.003.A № 21703, с набором кювет для измерения биолюминесценции объемом 1,5 мл;

3. Весы лабораторные общего назначения, ГОСТ 24104;

4. рН-метр, ГОСТ 25.7416.0171, или аналоги;

5. Термометр лабораторный 0 — 55 °С, цена деления шкалы — 0,5 °С, ГОСТ 215;

6. Сушильный электрический шкаф, ГОСТ 13474;

7. Холодильник бытовой, обеспечивающий замораживание (-18 +/- 1 °С) и хранение проб (+2 — +4 °С);

8. Часы сигнальные, ТУ 25-07-57;

9. Подставка (из пластика, дерева) с углублением для пенициллиновых пузырьков или измерительных кювет, на которой можно разместить не менее 12 кювет;

10. Бумажные фильтры обеззоленные типа ФОБ (красная, белая ленты), ТУ 6-09-1678;

11. Пипетки, автоматические дозаторы любого типа объемом 0,02 — 0,5 мл +/- 1,0%;

12. Цилиндры вместимостью 25, 50 мл второго класса точности, ГОСТ 1770;

13. Стаканы стеклянные лабораторные вместимостью 10, 50 мл, ГОСТ 25336;

14. Пипетки объемом 0,5 и 1,0 мл, ГОСТ 29227;

15. Пробоотборник любого типа, объемом не менее 5 мл;

16. Флаконы и банки стеклянные с навинчивающейся крышкой или с притертой пробкой для отбора и хранения проб и реактивов вместимостью 10, 50, 100 мл;

17. Воронки лабораторные, ГОСТ 25336;

18. Стаканчики для взвешивания (бюксы) диаметром 30, 40 мм, ГОСТ 7148;

19. Вода дистиллированная, ГОСТ 6709;

20. Натрия гидроокись, ГОСТ 4328;

21. Кислота соляная, ГОСТ 3118;

22. Кислота серная, ГОСТ 4204;

23. Спит этиловый, х.ч., ТУ 6-091710;

24. Цинк сернокислый 7-водный, ГОСТ 4174;

25. Бумага индикаторная универсальная для измерения рН;

26. Спиртометр, ГОСТ 184881-81.

7. Характеристика тест-объекта «Эколюм» и прибора «Биотокс-10»

Биосенсор «Эколюм» представляет собой лиофилизированные люминесцентные бактерии или бесклеточные препараты, содержащие бактериальную люциферазу. Производится в соответствии с требованиями ТУ 2639-236-00209792-01. Биосенсор находится в стеклянных флаконах в среде инертных газов. При температуре 2 — 4 °С и ниже имеет гарантированный срок хранения не менее 1 года.

Специализированный люминометр «Биотокс-10» является измерительным прибором, предназначенным для проведения экологического мониторинга объектов окружающей среды с использованием биолюминесцентных сенсоров серии «Эколюм». Сочетание биохимического датчика с современной электронной аппаратурой позволяет обнаруживать с высокой достоверностью малые количества токсических соединений и их смесей. В приборе используется простая и надежная технология отбора и предъявления проб, которая безопасна при проведении экологической экспертизы как в лабораторных, так и полевых условиях.

Портативный прибор «Биотокс-10» может осуществлять следующие функции в автоматическом режиме: определение интенсивности биолюминесценции тест-объекта, индекса токсичности пробы и усредненной величины индекса токсичности, вычисление стандартного отклонения показателя токсичности. Прибор проводит исследование динамики процесса взаимодействия токсикантов с тест-объектом и компьютерную обработку данных измерения.

8. Условия безопасного проведения работ

6.1. При работе с химическими веществами необходимо соблюдать требования техники безопасности по ГОСТ 12.4.021.

6.2. Рабочие столы и поверхности должны содержаться в чистоте. В конце дня проводится влажная уборка рабочих поверхностей.

6.3. Безопасность при работе с электроустановками обеспечивается по ГОСТ 12.1.019 и в соответствии с требованиями инструкций к оборудованию.

6.4. Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.

6.5. Используемые в качестве биотестов лиофилизированные бактерии не патогенны, однако после каждого анализа необходимо стерилизовать всю использованную посуду, остатки растворов в сушильном шкафу при 105 °С в течение 1 часа.

6.6. Биотест «Эколюм» хранить в холодильнике при температуре от -18 °С до 2 — 4 °С, следует беречь культуру лиофилизированных бактерий от нагревания и резкой смены температуры.

9. Требования к квалификации лиц, проводящих биотестирование

Определение токсичности по настоящей методике выполняется оператором с квалификацией лаборант.

10. Условия выполнения измерений

Биотестирование проводится в нормальных лабораторных условиях в соответствии с ГОСТ 15150. Помещение не должно содержать токсичных паров и газов.

Температура окружающего воздуха в лаборатории от 15 до 30 °С. Относительная влажность воздуха 80 +/- 5%. Атмосферное давление 84 — 106 кПа (630 — 800 мм рт. ст.).

При использовании электроприборов частота переменного тока 50 +/- 1 Гц. Напряжение сети 220 +/- 10 В.

Освещение помещения естественное или искусственное, не ограничивается особыми требованиями.

11. Подготовка к проведению биотестирования

Предварительная подготовка к отбору проб и выполнению биотестирования должна обеспечивать подготовку посуды, мест хранения отобранных проб, а также подготовку рабочего места для обработки доставленных в лабораторию проб и исследования их на токсичность. Все процедуры предварительной подготовки должны исключать попадание каких-либо химических веществ в исследуемую пробу.

11.1 Подготовка посуды для отбора, хранения проб и биотестирования

Используется посуда из стекла. Посуда для отбора проб и биотестирования должна быть химически чистой. Она промывается смесью бихромата калия и серной кислоты (хромовой смесью). Стенки посуды осторожно смачиваются хромовой смесью, после чего на 2 — 3 час. посуда оставляется, затем она тщательно промывается водопроводной водой, нейтрализуется раствором пищевой соды и промывается 3 — 4 раза дистиллированной водой. Для мытья посуды не разрешается пользоваться синтетическими поверхностно-активными веществами и органическими растворителями. Посуду для отбора проб сушат на воздухе, а используемую для биотестирования, за исключением мерной, — в сушильном шкафу при 105 °С в течение 1 часа.

Химически чистая посуда для биотестирования должна храниться закрытой стеклянными притертыми пробками или завинчивающимися крышками в защищенных от пыли ящиках лабораторного стола или на закрытых полках, стеллажах и т.п.

11.2 Отбор, хранение и подготовка проб

Отбор проб и их хранение осуществляется в соответствии с руководящими документами, действующими в системе Роспотребнадзора.

Биотестирование проб проводят не позднее 24 часов после их отбора. Не допускается консервирование проб с помощью химических веществ.

Необходимый для выполнения анализа (в трех и более повторностях) объем проб составляет не более 10 мл.

Температурный оптимум для биотеста составляет 15 — 30 °С.

11.3 Подготовка тест-объекта «Эколюм» и прибора «Биотокс-10»

11.3.1. Подготовку прибора «Биотокс-10» проводят в соответствии с методикой поверки прибора и инструкцией по эксплуатации.

11.3.2 Реконструкция биосенсора.

11.3.2.1. Вскрыть флакон «А» с лиофилизированным биореагентом. Добавить из флакона «В» 10 мл регидратирующего реагента комнатной температуры — получают суспензию биосенсора. Рекомендуется несколько раз встряхнуть флакон «А» с суспензией.

11.3.2.2. Выдержать суспензию в течение 30 минут при комнатной температуре.

11.3.2.3. Рекомендуется перемешивание рабочей суспензии биосенсора перед отбором определенных объемов для проведения анализа.

11.3.2.4. Если у биосенсора истек гарантийный срок хранения и/или он стал плохо растворяться в холодной дистиллированной воде, рекомендуется более энергично его встряхивать и отфильтровать суспензию биосенсора через бумажный фильтр.

11.3.3 Определение рабочей концентрации биосенсора «Эколюм».

11.3.3.1. Измерить фоновое значение прибора «Биотокс-10» (по инструкции к прибору) и записать это значение.

11.3.3.2. Добавить 0,1 мл суспензии биосенсора из флакона в кювету люминометра. Затем туда же добавить 0,9 мл дистиллированной воды (рН 6.8 — 7,4; комнатная температура).

11.3.3.3. Вставить кювету с биореагентом в люминометр и измерить величину интенсивности биолюминесценции. Записать эту величину.

11.3.3.4. Свечение рабочей суспензии биосенсора должно находиться в интервале, превышающем фоновое значение прибора в 100 — 500 раз. Если обнаруженная величина меньше интервала, то увеличить добавку биосенсора и повторить измерение. Если величина больше интервала, то следует разбавить суспензию бактерий дистиллированной водой и повторить измерение.

12. Процедура биотестирования

12.1. Определение токсичности спиртов и водок без добавок биологически активных веществ.

При определении индекса токсичности необходимо проводить параллельное измерение контрольных и опытных проб. В качестве контроля используют содержимое флакона «С» с раствором эталонного спирта. В случае его отсутствия можно использовать другой стандартный раствор эталонного этилового спирта. Содержание альдегидов и сивушного масла в эталонном этиловом спирте регламентируется ГОСТом. Рекомендуется иметь по три контрольной и три опытной пробы. Для большей достоверности данных число повторностей опытной пробы может быть увеличено до 10 измерений. Существует два варианта измерений. Первый вариант — измеряются три повторности контрольной пробы и прибор запоминает усредненную величину. Затем измеряются повторности опытной пробы и прибор автоматически фиксирует значения индекса токсичности каждой пробы, усредненное значение индекса токсичности и погрешности измерения. Второй вариант — измеряются последовательно три (или более) пары контроль — опыт. В каждой паре прибор автоматически фиксирует индекс токсичности и в конце измерения выдает значения усредненного индекса токсичности пробы и значения погрешности измерения. Объем добавляемой суспензии бактерий к пробе должен быть равным в контроле и исследуемой пробе.

12.1.1. В стандартном анализе отбирают по 0,1 мл рабочей суспензии биосенсора и добавляют в три кюветы от люминометра контрольные и три (или более) кюветы для пробы. Добавляют в контрольные кюветы по 0,9 мл реагента из флакона «С» или 2,5% раствор эталонного этилового спирта на дистиллированной воде (рН 6,8 — 7,4). Добавляют в остальные кюветы по 0,9 мл опытной пробы с концентрацией этанола 2,5%, замечают время экспозиции и через определенный интервал измеряют интенсивность биолюминесценции биосенсора.

12.1.2. Измерение интенсивности биолюминесценции проводят с помощью прибора «Биотокс-10» согласно инструкции по эксплуатации прибора в стандартном варианте через 15 минут экспозиции. В экспрессном варианте допустимо проведение анализа через 5 минут.

12.2. Определение качества крепких алкогольных напитков, изготовленных на основе ректификованного этилового спирта, в том числе с добавками биологически активных и вкусо-ароматических веществ (ликеро-водочные изделия), крепких спиртовых напитков (бренди, виски, коньяки, ром).

12.2.1. Подготовку тест-объекта «Эколюм» и прибора «Биотокс-10» проводят согласно п. 11.

12.2.2. Необходимо иметь банк данных по действию на биосенсор «Эколюм» 2,5%-ного спиртового раствора измеряемой спиртосодержащей продукции конкретного производителя, которая производителем представлена как качественная и это подтверждено медицинскими или другими исследованиями. Берутся результаты анализа как минимум 5 экземпляров данной продукции в трех повторностях. На основании результатов вычисляется доверительный интервал изменения индекса токсичности качественных образцов продукции. В качестве контроля используется 2,5%-ный раствор эталонного спирта.

12.2.3. Отбирают по 0,1 мл рабочей суспензии биосенсора и добавляют в три кюветы от люминометра контрольные и три (или более) кюветы для пробы. В контрольные кюветы добавляют по 0,9 мл 2,5%-ного раствора эталонного спирта, в остальные кюветы по 0,9 мл опытной пробы данного завода-изготовителя в концентрации этанола 2,5%, замечают время экспозиции и через определенный интервал измеряют интенсивность биолюминесценции бактерий. Если величина индекса токсичности больше 60, то рекомендуется развести измеряемые и контрольные пробы дистиллированной водой (рН 6,8 — 7,4), чтобы индекс токсичности был в диапазоне 30 — 50.

12.2.4. Измерение интенсивности биолюминесценции и индекса токсичности пробы проводят с помощью прибора «Биотокс-10» согласно инструкции по эксплуатации прибора в стандартном варианте через 15 минут экспозиции. В экспрессном варианте допустимо проведение анализа через 5 минут.

12.2.5. Сравнивают полученный результат измерения среднего индекса токсичности (с учетом погрешности измерения) измеряемой продукции с доверительным интервалом изменения индекса токсичности банка данных (см. п. 12.2.2). Если полученные величины индекса токсичности находятся в пределах доверительного интервала, то продукт признается качественным. Если полученные величины индекса токсичности выходят за пределы доверительного интервала, то продукт признается некачественным.

13. Оценка результатов измерений

13.1. Оценку токсичности спиртов и водок без добавок биологически активных веществ проводят по различию в интенсивности биолюминесценции контрольных и опытных проб и вычислению индекса токсичности «Т» (прибор «Биотокс-10» позволяет автоматически вычислять индекс токсичности). Абсолютная величина интенсивности биолюминесценции биосенсора не имеет значения в диапазоне допустимых значений прибора «Биотоке-10».

13.2. Индекс токсичности «Т» есть величина безразмерная и определяется по формуле Т = 100 (Io — I) / Io, где Io и I, соответственно, интенсивность свечения контроля и опыта при фиксированном времени экспозиции исследуемого раствора с тест-объектом. Обработку результатов измерений токсичности выполняют путем расчета среднеарифметического значения величины индекса токсичности «Т» по формуле Т = (Т1 + Т2 + Т3) / 3, где Т1 — Т3 — повторности опытной пробы (максимальное число — 10). Величины Т1, Т2 и Т3 получают из трех параллельных измерений контроль — опыт в короткий промежуток времени или при измерении в последовательности контроль и затем серия опытных образцов.

13.3. В ряде случаев возможен вариант, когда интенсивность биолюминесценции в анализируемой пробе больше, чем в контроле. В этом случае при использовании в качестве контроля эталонного спирта независимо от величины отрицательного значения «Т» делается вывод о допустимой степени токсичности образца, и индекс токсичности принимает нулевое значение.

13.4 По величине индекса токсичности анализируемые пробы классифицируются на три группы:

Таблица 1

13.5. При определении качества крепких алкогольных напитков, изготовленных на основе ректификованного этилового спирта с добавками биологически активных и вкусо-ароматических веществ (ликеро-водочные изделия), крепких спиртовых напитков (бренди, виски, коньяки, ром), полученный результат измерения среднего индекса токсичности (с учетом погрешности измерения) измеряемой продукции сравнивают с доверительным интервалом изменения индекса токсичности 5 — 10 образцов данной продукции, предварительно признанной качественной другими методами контроля. Если полученные величины индекса токсичности находятся в пределах доверительного интервала, то продукт признается качественным. Если полученные величины индекса токсичности выходят за пределы доверительного интервала, то продукт признается некачественным.

13.6. Методика относительно слабо чувствительна к метанолу, пропанолу и другим примесным к этанолу спиртам. Измерение подобных химических соединений проводится другими методами.

13.7. Результат токсикологического анализа представляется в виде протокола (приложение 1 — не приводится).

14. Контроль погрешности методики токсикологического анализа

14.1 Контроль качества оценки токсичности проводится по

определению  чувствительности  тест-системы  "Эколюм" к модельному
"эталонному" токсиканту цинку сернокислому 7-водному (ZnSO  7Н О),
                                                          4   2

растворенному в дистиллированной воде (рН 6,8 — 7,4). Концентрация

модельного  токсиканта,  при  действии  которого  через  30  минут
экспозиции  интенсивность  биолюминесценции  ингибируется не менее
чем   на   50%,   должна  быть  не  более  7,0  мг/куб.  дм  цинка

сернокислого.

Испытания проводят в соответствии с прописью методики в трех независимых опытах. Если концентрация модельного токсиканта, вызвавшая острую токсичность, находится в интервале 6,0 — 7,0 мг/куб. дм цинка сернокислого, то чувствительность тест-объекта соответствует необходимым требованиям. Если концентрация модельного токсиканта, вызвавшая острую токсичность, не находится в данном интервале, то следует проверить точность приготовления исследуемых растворов, условий проведения опытов. Если ошибки при проведении опытов исключены, необходимо сменить исходный материал.

14.2. Оперативный контроль сходимости проводится при анализе каждой рабочей пробы.

15. Форма представления результатов анализа

Результат токсикологического анализа в документах — индекс токсичности, предусматривающих его использование, представляется в виде:

                  _

X +/- s, при Р = 0,95, _ где X — среднее арифметическое определений. _

    За  результат  анализа  (X)  принимают  среднее арифметическое
результатов  трех  (или  более  -  до  10)  параллельных измерений

индекса токсичности. Индекс токсичности Т вычисляется по формуле Т

=   100   (Iконтр.   -   Iопыт) / Iконтр.,  где  Iконтр.  и  Iопыт
соответствуют    интенсивности    биолюминесценции    бактерий   в

контрольной и опытной пробах.

    Среднее    квадратичное    отклонение    (сигма)   результатов
определений   количественного  выражения  тест-реакции  -  индекса

токсичности вычисляется по формуле: ____________ /n _ 2 /SUM (X — X )

                            / i=1       i
                  сигма = \/  -------------,

                              n - 1

где:
X  - i-й результат определений;
 i
n - число параллельных определений.
                               _

Среднее арифметическое Х результатов определений количественного выражения тест-реакций вычисляется по формуле:

                     _   1  n

Х = — SUM X . n i=1 i

Все указанные статистические параметры вычисляются измерительным прибором «Биотокс-10» автоматически по команде оператора.

Приложение 1