ГОСТ Р 51129-98. Государственный стандарт Российской Федерации. Соки фруктовые и овощные. Метод определения лимонной кислоты
(принят и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 19.01.1998 № 7)
Внимание
Документ утратил силу с 1 января 2018 года в связи с изданием Приказа Росстандарта от 30.08.2016 № 967-ст. Взамен введен в действие ГОСТ 33835-2016. Документ утратил силу с 1 января 2018 года в связи с изданием Приказа Росстандарта от 30.08.2016 № 967-ст. Взамен введен в действие ГОСТ 33835-2016. Документ включен в Перечень стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «Требования безопасности пищевых добавок, ароматизаторов и технологических вспомогательных средств» (ТР ТС 029/2012) и осуществления оценки (подтверждения) соответствия продукции (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 02.10.2012 № 258). Документ включен в Перечень стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «Технический регламент на соковую продукцию из фруктов и овощей» (ТР ТС 023/2011) и осуществления оценки (подтверждения) соответствия продукции (Решение Комиссии Таможенного союза от 09.12.2011 № 882). Документ включен в Перечень национальных стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения Федерального закона «Технический регламент на соковую продукцию из фруктов и овощей» и осуществления оценки соответствия (Распоряжение Правительства РФ от 19.05.2009 № 690-р). С 1 июля 2003 года до вступления в силу технических регламентов акты федеральных органов исполнительной власти в сфере технического регулирования носят рекомендательный характер и подлежат обязательному исполнению только в части, соответствующей целям, указанным в пункте 1 статьи 46 Федерального закона от 27.12.2002 № 184-ФЗ. Документ введен в действие с 1 июля 1998 года.
ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ
flowchart LR n0["ГОСТ Р 51129-98"]:::rst click n0 "https://bukva.ai/docs/gost-r-51129-98" "ГОСТ Р 51129-98. Государственный стандарт Российской Федерации. Соки фруктовые и овощные. Метод определения лимонной кислоты (принят и введен в действие Постановлением Госстандарта" n1["ГОСТ 33835-2016"]:::doc click n1 "https://bukva.ai/docs/standart-gost-33835-2016" "ГОСТ 33835-2016. Межгосударственный стандарт. Продукция соковая. Метод определения лимонной кислоты (введен в действие Приказом Росстандарта от 30.08.2016 N 967-ст)" n0 --> n1 classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000; classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000; classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;
от 19 января 1998 г. № 7
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛИМОННОЙ КИСЛОТЫ
Fruit and vegetable juices. Method for determination of citric acid (citrate)
Предисловие
1. Разработан Московской государственной академией пищевых производств, Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности.
Внесен Техническим комитетом ТК 335 «Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность».
2. Принят и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 19 января 1998 г. № 7.
3. Разделы настоящего стандарта, за исключением 2; 5; 6; 8.2; 9 представляют собой аутентичный текст европейского стандарта ЕН 1137-94 «Фруктовые и овощные соки. Ферментативное определение содержания лимонной кислоты (цитрата). Спектрофотометрическое определение никотинамидадениндинуклеотида (НАД)».
1. ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ
Настоящий стандарт распространяется на фруктовые и овощные соки, нектары и сокосодержащие напитки и устанавливает метод определения лимонной кислоты в виде свободной кислоты или соли.
2. НОРМАТИВНЫЕ ССЫЛКИ
В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Технические условия
ГОСТ 3652-69 Кислота лимонная моногидрат и безводная. Технические условия
ГОСТ 3769-78 Аммоний сернокислый. Технические условия
ГОСТ 4201-79 Натрий двууглекислый. Технические условия
ГОСТ 4328-77 Натрия гидроокись. Технические условия
ГОСТ 4529-78 Цинк хлористый. Технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 26313-84 Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора проб
ГОСТ 26671-85 Продукты переработки плодов и овощей, консервы мясные и мясорастительные. Подготовка проб для лабораторных анализов
ГОСТ 29227-91 Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования.
3. ОПРЕДЕЛЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ
3.1 В настоящем стандарте применяют следующие термины с соответствующими определениями:
Массовая концентрация лимонной кислоты во фруктовых и овощных соках, нектарах и сокосодержащих напитках: массовая концентрация лимонной кислоты, определенная в соответствии с методикой, установленной настоящим стандартом, выраженная в мг/дм3.
3.2 В настоящем стандарте применяют следующие сокращения:
ЦЛ — цитратлиаза ЕС 4.1.3.6 [1];
МДГ — малатдегидрогеназа ЕС 1.1.1.37 [1];
ЛДГ — лактатдегидрогеназа ЕС 1.1.1.27 [1];
НАД — никотинамидадениндинуклеотид, окисленная форма;
НАДH — никотинамидадениндинуклеотид, восстановленная форма;
Е — стандартная единица, определяет количество (активность) фермента, которое служит катализатором при 25 °C для превращения 1 мкмоля вещества в минуту.
4. СУЩНОСТЬ МЕТОДА
Метод основан на ферментативном преобразовании иона цитрата в оксалоацетат с помощью ЦЛ, затем в пируват, восстановлении их с помощью НАДH в присутствии МДГ и ЛДГ, спектрофотометрическом измерении израсходованного НАДH, эквивалентного количеству лимонной кислоты.
В ходе анализа при активной кислотности 7,8 pH протекают следующие ферментативные реакции:
\text{Цитрат} - \text{ион}^{\text{ЦЛ}} \rightarrow \text{оксалоацетат} + \text{ацетат} (1)
\text{Оксалоацетат} + \text{НАДН } + H^{+ \text{МДГ}} \rightarrow L - \text{малат} + \text{НАД}^{+} (2)
\text{Пируват} + \text{НАДН } + H^{+ \text{ЛДГ}} \rightarrow L - \text{лактат} - \text{НАД}^{+} (3)
5. СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, ВСПОМОГАТЕЛЬНЫЕ УСТРОЙСТВА, РЕАКТИВЫ И МАТЕРИАЛЫ
Спектрофотометр, позволяющий проводить исследования при длине волны 340 нм, или фотометр фотоэлектрический шириной спектральной полосы не более 10 нм и допустимой абсолютной погрешностью измерений коэффициента пропускания не более 1%, или спектрофотометр на ртутной лампе, позволяющий проводить измерения при длинах волн 365 или 334 нм.
Кюветы из оптического стекла или полистироловые рабочей длиной 10 мм.
Иономер или pH-метр погрешностью измерения не более 0,05 pH.
Электрод для измерения pH стеклянный.
Электрод сравнения (каломельный).
Пипетка по ГОСТ 29227 типа 3, исполнения 1, 1-го класса точности, вместимостью 1 и 10 см3.
Дозаторы пипеточные объемом доз 1, 0,2 и 0,02 см3, относительной погрешностью дозирования +/- 1% [2].
Цилиндр по ГОСТ 1770 вместимостью 100 см3.
Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, ч.д.а., раствор концентрации c (NaOH) = 5 моль/дм3.
Цинк хлористый по ГОСТ 4529, ч.д.а., раствор массовой концентрации m(ZnCl_{2}) = 800\text{мг}/\text{дм}^{3} .
Натрий двууглекислый по ГОСТ 4201, ч.д.а.
Аммоний сернокислый по ГОСТ 3769, ч.д.а., раствор концентрации c((NH_{3})_{2}SO_{4}) = 3,2\text{моль}/\text{дм}^{3} .
Кислота лимонная по ГОСТ 3652, раствор массовой концентрации m(C_{6}H_{8}O_{7}) = 400\text{мг}/\text{дм}^{3} .
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Глицилглицин по НД [3].
НАДH (динатриевая соль) по НД [3].
Суспензия МДГ/ЛДГ по НД [3].
ЦЛ по НД [3].
Допускается применять другие средства измерений с метрологическими характеристиками, вспомогательные устройства с техническими характеристиками, а также реактивы по качеству не ниже перечисленных в настоящем разделе.
6. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ
Отбор проб — по ГОСТ 26313, подготовка их к испытанию — по ГОСТ 26671.
6.1 Подготовка к анализу фруктовых и овощных соков, нектаров и сокосодержащих напитков
При высоком содержании лимонной кислоты в пробе продукта ее разводят водой до массовой концентрации лимонной кислоты от 20 до 40 мг/дм3. Полученный раствор используют при проведении анализа. Сильно окрашенные соки подвергают большему разбавлению. Мутные соки перед разведением тщательно перемешивают.
6.2 Подготовка к испытанию концентратов фруктовых и овощных соков, нектаров и сокосодержащих напитков
Концентрат разводят водой до содержания сухих веществ по рецептуре натурального сока, нектара или сокосодержащего напитка. При необходимости пробу разводят повторно в соответствии с 6.1.
7. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ
7.1 Приготовление буферного раствора активной кислотностью 7,8 pH
7,13 г глицилглицина растворяют в 70 см3 воды и доводят pH раствора до 7,8 с помощью приблизительно 13 см3 раствора гидроокиси натрия, затем приливают 10 см3 раствора хлористого цинка и объем доводят водой до 100 см3. Буферный раствор устойчив при температуре 4 °C в течение четырех недель.
7.2 Приготовление раствора НАДH
30 мг динатриевой соли НАДH и 60 мг двууглекислого натрия растворяют в 6 см3 воды. Раствор устойчив при температуре 4 °C в течение четырех недель.
7.3 Приготовление суспензии МДГ/ЛДГ
0,1 см3 суспензии МДГ, содержащей 5 мг лиофилизата МДГ в 1 см3 (6000 Е/см3), 0,5 см3 суспензии ЛДГ, содержащей 5 мг лиофилизата ЛДГ в 1 см3 (2750 Е/см3) смешивают с 0,4 см3 раствора сульфата аммония. Суспензия МДГ/ЛДГ в растворе сульфата аммония устойчива при 4 °C в течение 1 г.
7.4 Приготовление раствора ЦЛ
168 мг лиофилизата цитратлиазы растворяют в 1 см3 ледяной воды (1,25 Е/см3). Раствор устойчив при 4 °C в течение одной недели, в замороженном состоянии — четырех недель.
8. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ
8.1 Проведение ферментативного определения лимонной кислоты
Испытание проводят при температуре от 20 до 25 °C. Допускается проведение анализа при постоянной выбранной температуре в интервале от 25 до 37 °C.
Для дозирования исследуемой пробы и растворов используют пипетки с делениями или пипеточные дозаторы. Растворы ферментов, коферментов и буфера вносят соответствующими пипеточными дозаторами.
Ферментативное определение лимонной кислоты может быть проведено также с использованием имеющихся в продаже специальных наборов реактивов.
8.1.1 Приготовление пробы
В кювету спектрофотометра (фотометра) вносят 1,00 см3 буферного раствора, pH 7,8, 0,1 см3 раствора НАДH, 0,20 см3 раствора исследуемой пробы, 1,80 см3 воды и 0,02 см3 суспензии МДГ/ЛДГ. Смесь перемешивают, выдерживают в течение 5 мин и измеряют в спектрофотометре или фотометре оптическую плотность раствора — (A_{1})_{\text{проба}} относительно воздуха.
При высоких значениях начальной оптической плотности (более 1,000) готовят новую пробу, используя менее концентрированный раствор НАДH. Рекомендуется также уменьшить объем раствора исследуемой пробы в кювете, компенсируя снижение общего объема в кювете увеличением объема воды.
Если массовая концентрация лимонной кислоты в растворе исследуемой пробы менее 20 мг/дм3, то вносимый пипеткой объем может быть увеличен до 2,00 см3. В этом случае следует снизить объем воды, добавляемой в кювету, для поддержания на постоянном уровне общего объема в кювете. При расчете результатов необходимо учесть измененный объем раствора исследуемой пробы в формуле (5).
8.1.2 Реакция с ферментом и количественный анализ
К подготовленному в кювете по 8.1.1 раствору добавляют 0,02 см3 раствора ЦЛ. Содержимое кюветы перемешивают. Через 10 мин измеряют оптическую плотность (A_{2})_{\text{проба}} раствора относительно воздуха. Окончание реакции проверяют путем повторного считывания показаний через 2 мин.
8.2 Контрольное испытание
В кювету вносят 1,00 см3 буферного раствора и 0,1 см3 раствора НАДH, 2,00 см3 воды и 0,02 см3 суспензии ферментов МДГ/ЛДГ, содержимое перемешивают. Через 5 мин измеряют оптическую плотность раствора (A_{1})_{\text{контроль}} относительно воздуха.
К подготовленному в кювете раствору добавляют 0,02 см3 раствора ЦЛ, перемешивают, выдерживают в течение 10 мин и измеряют оптическую плотность (A_{2})_{\text{контроль}} относительно воздуха.
9. ВЫРАЖЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
Основой данного метода является линейная зависимость между количеством окисленного НАДH и количеством лимонной кислоты. Разность измеренных величин оптических плотностей \Delta A вычисляют по формуле:
Массовую концентрацию лимонной кислоты в пробе X, мг/дм3, вычисляют по формуле
X = \frac{M \cdot V_{1} \cdot F \cdot 1000}{\epsilon \cdot l \cdot V_{2} \cdot 1000} \cdot \Delta A , (5)
где M — молярная масса лимонной кислоты (безводная форма), M = 192,1 г/моль;
V_{1} — суммарный объем раствора в кювете, см3;
F — фактор разведения пробы, рассчитываемый как отношение объема разведенной пробы к объему, взятому для разведения;
\epsilon — молярный показатель поглощения НАДH,
при 340 нм — \epsilon = 6,3\text{дм}^{3} \cdot \text{ммоль}^{- 1} \cdot \text{см}^{- 1} ,
при 365 нм — \epsilon = 3,5\text{дм}^{3} \cdot \text{ммоль}^{- 1} \cdot \text{см}^{- 1} (ртутная лампа),
при 334 нм — \epsilon = 6,18\text{дм}^{3} \cdot \text{ммоль}^{- 1} \cdot \text{см}^{- 1} (ртутная лампа);
V_{2} — использованный в анализе объем раствора исследуемой пробы, см3.
Если нет отклонений от объемов, указанных в 8.1.1, то
При использовании имеющихся в продаже наборов реактивов численный коэффициент (3016) в формуле (6) может быть иным из-за изменения суммарного объема раствора в кювете (V_{1}) .
При анализе концентратов соков, продуктов с высокой вязкостью и/или очень большим содержанием мякоти результаты испытаний могут быть выражены как массовая доля лимонной кислоты в пробе X_{1} , \text{млн}^{- 1} , по формуле
где V — объем разведенного концентрата сока, продукта с высокой вязкостью и/или очень большим содержанием мякоти, см3;
m — масса концентрата сока, продукта с высокой вязкостью и/или очень большим содержанием мякоти, взятых для разведения, г.
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных определений, округленное до целого значения.
Абсолютное расхождение между результатами двух параллельных определений, выполненных в одной лаборатории, не должно превышать более чем в 5% случаев значения показателя сходимости d, мг/дм3, рассчитываемого по формуле
где \rho — среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, мг/дм3.
Абсолютное расхождение между результатами двух измерений, выполненных в двух лабораториях, не должно превышать более чем в 5% случаев значение показателя воспроизводимости D, мг/дм3, рассчитываемого по формуле
где \rho\prime — среднее арифметическое результатов двух измерений, мг/дм3.
10. КОНТРОЛЬ ДОСТОВЕРНОСТИ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
Достоверность полученных результатов контролируют с помощью стандартного раствора лимонной кислоты массовой концентрации не более 400 мг/дм3, который испытывают по 8.1 - 8.2 без предварительного разведения.
Если массовая концентрация лимонной кислоты, определенная в результате испытания, составляет менее 95% концентрации стандартного раствора, то испытание следует повторить со свежеприготовленными растворами реактивов.
11. ОТЧЕТ ОБ ИСПЫТАНИИ
В отчете об испытании должны быть указаны:
- обозначение настоящего стандарта;
- дата и способ отбора проб (если это возможно);
- дата доставки образца;
- дата проведения анализа;
- результаты исследования;
- обнаруженные в ходе исследования особенности;
- все рабочие условия, не установленные данным стандартом или касающиеся как необязательных, так и любых других подробностей, которые могут повлиять на конечный результат.
В отчете должны быть указаны все детали, необходимые для полной идентификации пробы.
1. Номенклатура ферментов. Рекомендации Международного биохимического союза по номенклатуре и классификации ферментов, а также единицам ферментов и символам кинетики ферментативных реакций. М. 1979
2. ТУ 64-13329-81. Дозаторы пипеточные
3. Boehringer Mannheim. Methoden der enzimatischen BioAnalytik und Lebensmitteleanalytik mit Test-Combinationen.
------------------------------------------------------------------