ГОСТ 7702.2.3-93. Межгосударственный стандарт. Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Метод выявления сальмонелл
(введен в действие Постановлением Госстандарта России от 02.06.1994 № 160)
Внимание
Документ утратил силу с 01.01.2011 в связи с изданием Приказа Ростехрегулирования от 15.12.2009 № 1030-ст. Взамен введен в действие ГОСТ Р 53665-2009. Документ утратил силу с 01.01.2011 в связи с изданием Приказа Ростехрегулирования от 15.12.2009 № 1030-ст. Взамен введен в действие ГОСТ Р 53665-2009. Документ включен в Перечень международных и региональных (межгосударственных) стандартов, а в случае их отсутствия — национальных (государственных) стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Евразийского экономического союза «О безопасности мяса птицы и продукции его переработки» (ТР ЕАЭС 051/2021) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 29.11.2022 № 188). Документ включен в Перечень международных и региональных (межгосударственных) стандартов, а в случае их отсутствия — национальных (государственных) стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «О безопасности пищевой продукции» (ТР ТС 021/2011) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 24.12.2019 № 236). Документ включен в Перечень нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения (утв. Россельхознадзором 30.07.2009 № 02-03-48/563). С 1 июля 2003 года до вступления в силу технических регламентов акты федеральных органов исполнительной власти в сфере технического регулирования носят рекомендательный характер и подлежат обязательному исполнению только в части, соответствующей целям, указанным в пункте 1 статьи 46 Федерального закона от 27.12.2002 № 184-ФЗ. Документ введен в действие с 01.01.1995. Взамен ГОСТ 7702.2-74 в части метода выявления сальмонелл.
ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ
flowchart LR n0["ГОСТ 7702.2-74"]:::rst n1["ГОСТ Р 50396.3-92"]:::rst n2["ГОСТ 7702.2.3-93"]:::rst click n2 "https://bukva.ai/docs/gost-7702-2-3-93" "ГОСТ 7702.2.3-93. Межгосударственный стандарт. Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Метод выявления сальмонелл (введен в действие Постановлением Госстандарта России от 0" n3["ГОСТ Р 53665-2009"]:::rst click n3 "https://bukva.ai/docs/gost-r-53665-2009" "ГОСТ Р 53665-2009. Национальный стандарт Российской Федерации. Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Метод выявления сальмонелл (утв. и введен в действие Приказом " n4["ГОСТ 31468-2012"]:::doc click n4 "https://bukva.ai/docs/gost-31468-2012" "ГОСТ 31468-2012. Межгосударственный стандарт. Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Метод выявления сальмонелл (введен в действие Приказом Росстандарта от 14.11.20" n2 --> n3 n0 --> n2 n1 --> n2 n3 --> n4 classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000; classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000; classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;
Введен в действие Постановлением
Комитета Российской Федерации
по стандартизации,
метрологии и сертификации
от 2 июня 1994 г. № 160
МЯСО ПТИЦЫ, СУБПРОДУКТЫ И ПОЛУФАБРИКАТЫ ПТИЧЬИ
Poultry meat, edible offal, ready-to-cook products. Method for detection of Salmonellae
1 января 1995 года
Информационные данные
Ссылочные нормативно-технические документы
| Обозначение НТД, на который дана ссылка | Номер пункта |
|---|---|
| ГОСТ 7702.2.0-95/ГОСТ Р 50396.0-92 | 1; 2.1; 2.2.1; 2.2.2; 2.2.3; 2.2.4; 2.2.5; 2.2.6; 2.2.7; 2.3; 2.4 |
| ГОСТ 28560-90 | 2.2.3 |
Предисловие
1. Разработан Госстандартом России.
Внесен Техническим секретариатом Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации.
2. Принят Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации 21 октября 1993 г.
3. Постановлением Комитета Российской Федерации по стандартизации, метрологии и сертификации от 02.06.94 № 160 межгосударственный стандарт ГОСТ 7702.2.3-93 введен в действие непосредственно в качестве государственного стандарта Российской Федерации с 01.01.95.
4. Взамен ГОСТ 7702.2-74 в части метода выявления сальмонелл.
Настоящий стандарт распространяется на предназначенные для реализации и промышленной переработки:
мясо птицы в виде потрошеных, полупотрошеных и потрошеных с комплектом потрохов и шеей тушек, частей, полученных при их разделке, а также обваленное и измельченное;
субпродукты и полуфабрикаты птичьи.
Стандарт устанавливает метод выявления сальмонелл.
Метод основан на высеве определенного количества продукта или смывов с его поверхности на жидкие неселективные и селективные питательные среды с выделением чистых культур на диагностических средах с морфологическими и культуральными признаками сальмонелл; в проверке биохимических свойств выделенных культур; в проверке их серологических реакций.
1. МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ И ПОДГОТОВКА К ИССЛЕДОВАНИЯМ — ПО ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0
2. ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Для выращивания бактериальных культур навеску продукта не менее 25 г или смыва не менее 25 см3 высевают в пептонно-буферную воду, приготовленную по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.4.11 в соотношении 1:5. Посевы инкубируют при (37 +/- 1) °C в течение 16 — 24 ч. Затем 10 см3 культуры из пептонно-буферной воды пересевают в 90 см3 одной из сред обогащения (Мюллера, Кауфмана, селенитовую, селенит-цистиновую, магниевую) по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.4.12 - 2.4.16. Посевы инкубируют при (37 +/- 1) °C в течение 24 — 48 ч.
Через 24 и 48 ч со второй среды обогащения пересевают на две любые дифференциальные среды — Эндо, Левина, висмут-сульфитный агар и другие — по выбору см. (ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.4.10; 2.4.17; 2.4.18). Посевы на всех средах, кроме висмут-сульфитного агара инкубируют в течение 18 — 24 ч, а на висмут-сульфитном агаре при отсутствии роста подозрительных колоний инкубируют (48 +/- 1) ч при (37 +/- 1) °C.
Сальмонеллы на средах Эндо и Плоскирева растут в виде бесцветных колоний, на среде Левина — голубоватых, на висмут-сульфитном агаре — обычно в виде черных колоний с металлическим блеском с окраской среды под колониями в черный цвет. S. typhi и некоторые другие на висмут-сульфитном агаре растут в виде бесцветных или светло-зеленых колоний без окраски среды под колониями. На агаре с бриллиантовым зеленым и феноловым красным типичные сальмонеллы имеют розовую окраску.
При отсутствии подозрительных колоний на дифференциальных средах работу с посевами прекращают. Подозрительные колонии используют в дальнейших исследованиях.
2.2. Биохимические свойства культуры определяют путем исследования не менее пяти подозрительных колоний, выросших на дифференциальной среде. Определяют расщепление сахаров, мочевины, образование индола, сероводорода, ацетилметилкарбинола (реакция Фогес-Проскауэра), утилизацию цитрата, расщепление аминокислот.
2.2.1. Для выявления расщепления сахаров используют либо среды Гисса по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.4.19, либо одну из комбинированных сред (Клиглера, Ресселя, агар тройной сахарный по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.4.20 - 2.4.22).
Для посевов в среды Гисса часть каждой из пяти отобранных подозрительных колоний снимают бактериологической петлей, размешивают в 0,5 — 1 см3 стерильного физиологического раствора. Полученную взвесь засевают в среды Гисса, инкубируют при (37 +/- 1) °C в течение 12 — 18 ч, после чего посевы просматривают. При образовании кислоты меняется цвет среды.
Посев на одну из комбинированных сред проводят штрихом на скошенную часть и уколом в столбик. Посевы инкубируют при (37 +/- 1) °C, учет проводят через (24 +/- 1) ч.
При ферментации лактозы, сахарозы в скошенной части столбика комбинированных сред происходит пожелтение. Покраснение или пожелтение самого столбика указывает на расщепление глюкозы.
Сальмонеллы не разлагают лактозу и сахарозу, расщепляют глюкозу с образованием кислоты и газа, а маннит — с образованием кислоты.
2.2.2. Для выявления расщепления мочевины используют одну из сред: агар тройной сахарный или скошенный агар с мочевиной по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.4.24.
Восстановление изменившегося цвета среды агара тройного сахарного при расщеплении глюкозы (см. 2.2.1) с красного или желтого цвета до бледно-розового свидетельствует о расщеплении мочевины.
Посевы на поверхность скошенного агара с мочевиной инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение (24 +/- 1) ч. Окрашивание среды в красный цвет происходит при расщеплении мочевины. Отсутствие изменения окраски — отрицательная реакция.
Сальмонеллы мочевину не расщепляют.
2.2.3. Для выявления образования индола проводят посев в одну из питательных сред: 1%-ную пептонную воду по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.3.2 или в триптон-триптофановую среду по ГОСТ 28560. Посевы инкубируют при (37 +/- 1) °C в течение (24 +/- 1) ч.
В пробирки с суточной культурой в пептонной воде по стенке добавляют 5 — 10 капель одного из реактивов: Эрлиха или Ковача по ГОСТ 28560. В первом случае при наличии индола не позднее чем через 5 мин в пограничном слое образуется ярко-красное кольцо, при отсутствии — кольцо остается светло-желтого цвета. Во втором случае после взбалтывания результаты учитывают через 10 мин: реактив поднимается на поверхность среды и при наличии индола окрашивается в темно-красный цвет.
В пробирку с суточной культурой в триптон-триптофановой среде добавляют 1 см3 реактива Эрлиха или Ковача. Темно-красное кольцо — реакция положительная; коричнево-желтое кольцо — реакция отрицательная.
Сальмонеллы индола не образуют.
2.2.4. Для выявления образования сероводорода используют одну из питательных сред: агар тройной сахарный, или среду Клиглера, или 1%-ную пептонную воду. Посевы инкубируют при (37 +/- 1) °C в течение 24 — 72 ч.
При посеве культуры в одну из комбинированных сред об образовании сероводорода судят по почернению среды в столбике.
При посеве культуры в 1%-ную пептонную воду в пробирку под пробку помещают полоску фильтровальной бумаги, предварительно смоченную уксуснокислым свинцом и высушенную по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.3.21. Полоска не должна соприкасаться с питательной средой. При выделении культурой сероводорода через 24 — 72 ч инкубирования бумажка с уксуснокислым свинцом чернеет.
Сальмонеллы выделяют сероводород.
2.2.5. Для выявления утилизации цитрата культуру высевают на скошенный столбик агара Симмонса по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.4.23, инкубируют при (37 +/- 1) °C в течение (24 +/- 1) ч. Окрашивание среды в синий цвет — положительная реакция, отсутствие изменений — отрицательная реакция.
Сальмонеллы, за небольшим исключением, дают положительную реакцию.
2.2.6. Для выявления способности культуры к образованию ацетилметилкарбинола (реакция Фогес-Проскауэра) засевают ее в среду по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.4.25. Посевы инкубируют при (37 +/- 1) °C в течение (24 +/- 3) ч, после чего переносят 1 см3 посева в пустую пробирку, добавляют 0,2 см3 раствора гидроокиси калия по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.3.19 и 0,6 см3 раствора \alpha - \text{нафтола} по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.3.18 и несколько кристаллов креатина. Пробирки тщательно встряхивают и оставляют на 1 ч при комнатной температуре. При наличии ацетилметилкарбинола среда окрашивается в розовый цвет. При отрицательной реакции остаток среды инкубируют еще 24 ч и тест повторяют.
Сальмонеллы имеют отрицательную реакцию Фогес-Проскауэра.
2.2.7. Для определения расщепления аминокислот культуру высевают методом укола в пробирку со столбиком агаризованной среды с одной из аминокислот по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.4.27, 2.4.28, инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение (24 +/- 3) ч.
При декарбоксилировании лизина появляется темно-красная окраска. При отрицательной реакции окраска желтая. Сальмонеллы декарбоксилируют лизин.
Для теста расщепления фенилаланина культуру высевают на поверхность скошенного агара, инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение (24 +/- 1) ч, затем на поверхность среды наносят 3 — 4 капли хлорного железа. Появление зеленой окраски среды — положительная реакция, цвет среды не изменяется — отрицательная реакция. Сальмонеллы дают отрицательную реакцию.
2.3. Для выявления подвижности культуру высевают методом укола в пробирку со столбиком полужидкого агара по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.4.29. Посевы инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение (24 +/- 1) ч.
О наличии подвижности свидетельствуют диффузный рост вокруг линии укола и помутнение столбика агара.
2.4. Серологические реакции проводят с суточной культурой, выросшей на агаризованной среде по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.4.1, 2.4.4.
Определяют чистые колонии на способность самоагглютинации и на присутствие O, Vi, H — антигенов сальмонелл.
При этом на предметное стекло помещают каплю физиологического раствора, а рядом каплю одной из антисальмонеллезных сывороток (поливалентную O-сыворотку, отдельных O-групп и другие).
Растирают в капле некоторое количество исследуемой культуры до получения однородной мутной суспензии. Покачивают стекло в течение 30 — 40 с, затем помещают его на темный фон и рассматривают. При агглютинации образуются хлопья, комочки.
Штампы считаются самоагглютинирующими при образовании хлопьев, комочков в капле физиологического раствора, и они серологическому подтверждению не подлежат.
При получении положительной реакции с поливалентной O-сывороткой культуру испытывают с сыворотками к антигенам отдельных O-групп, входящими в поливалентные сыворотки.
Для выявления Vi-антигена исследуемую культуру испытывают с моновалентной Vi-сывороткой; H-антигенов — с моновалентными H-сыворотками.
Для выявления H-антигена в реакции агглютинации следует использовать культуру с нижней, более влажной части скошенного агара, в которой лучше развит H-антиген.
Положительная реакция — агглютинация бактерий, отрицательная реакция — отсутствие агглютинации. Сальмонеллы дают положительную реакцию.
На основании серологических исследований подтверждают или исключают принадлежность выделенной культуры к роду сальмонелл.
3. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ
3.1 Результаты исследований оценивают по каждой пробе в отдельности.
3.2. К бактериям рода сальмонелл относят те культуры, которые дали типичные биохимические и серологические реакции.
3.3. Результаты исследований записывают следующим образом: сальмонеллы обнаружены или не обнаружены в 25 г продукта или в смыве с продукта с указанием исследуемой площади в квадратных сантиметрах.