ГОСТ 32167-2013. Межгосударственный стандарт. Мед. Метод определения сахаров

(введен в действие Приказом Росстандарта от 17.09.2013 № 1072-ст)

(ред. от 31.10.2017)

ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ

flowchart LR
  n0["ГОСТ Р 53883-2010"]:::rst
  click n0 "https://bukva.ai/docs/gost-r-53883-2010" "ГОСТ Р 53883-2010. Национальный стандарт Российской Федерации. Мед. Методы определения сахаров (утв. и введен в действие Приказом Росстандарта от 23.09.2010 N 265-ст)"
  n1["ГОСТ 32167-2013"]:::doc
  click n1 "https://bukva.ai/docs/gost-32167-2013" "ГОСТ 32167-2013. Межгосударственный стандарт. Мед. Метод определения сахаров (введен в действие Приказом Росстандарта от 17.09.2013 N 1072-ст)"
  n0 --> n1
classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000;
classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000;
classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;

Введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 17 сентября 2013 г. № 1072-ст

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МЕД

МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ САХАРОВ

Honey. Method for determination of sugars

(DIN 10758:1997, NEQ)

ГОСТ 32167-2013

Группа С52

МКС 67.180.10

Дата введения 1 января 2014 года

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены».

(в ред. Изменения № 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 31.10.2017 № 1548-ст)

Сведения о стандарте

1. Подготовлен Обществом с ограниченной ответственностью Центр исследований и сертификации «Федерал» (ООО Центр «Федерал»).

2. Внесен Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии.

3. Принят Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 19 мая 2013 г. № 56-П).

За принятие проголосовали:

4. Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 17 сентября 2013 г. № 1072-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 32167-2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2014 г.

5. В настоящем стандарте учтены основные нормативные положения национального немецкого стандарта DIN 10758:1997 Analysis of honey — Determination of the content of saccharides fructose, glucose, saccharose, turanose and maltose — HPLC method (Анализ меда. Определение содержания сахаридов фруктозы, глюкозы, сахарозы, туранозы и мальтозы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)).

Степень соответствия — неэквивалентная (NEQ).

Настоящий стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 53883-2010.

6. Введен впервые.

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет.

1. Область применения

Настоящий стандарт распространяется на мед и устанавливает методы определения сахаров:

1. метод определения массовой доли редуцирующих сахаров и массовой доли сахарозы (в пересчете на безводное вещество) с помощью колориметра в диапазонах измерений от 63,00% до 100,00 и от 1,00% до 26,00% соответственно;

(в ред. Изменения № 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 31.10.2017 № 1548-ст)

2. метод определения массовой доли сахаров с применением высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) в следующих диапазонах измерений:

• фруктозы от 30,00% до 43,00%;
• глюкозы от 22,00% до 40,00%;
• сахарозы от 0,10% до 8,00%;
• туранозы от 0,50% до 3,00%;
• мальтозы от 0,50% до 5,00%;
• трегалозы от 0,50% до 2,50%;
• арабинозы от 0,50% до 2,50%;
• раффинозы от 0,50% до 2,50%;
• мелецитозы от 0,50% до 40,00%;
• мелибиозы от 0,50% до 2,50%.

Требования к контролируемому показателю установлены в ГОСТ 19792, ГОСТ 31766.

2. Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты <*>

(в ред. Изменения № 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 31.10.2017 № 1548-ст)

<*> На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019-2009 «Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».

(сноска введена Изменением № 1, введенным в действие Приказом Росстандарта от 31.10.2017 № 1548-ст)

ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 12.4.021-75 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ ИСО 3310-1-2002 Сита контрольные. Часть 1. Сита контрольные из металлической проволочной ткани. Технические требования и испытания <**>

(в ред. Изменения № 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 31.10.2017 № 1548-ст)

<**> На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51568-99 (ИСО 3310-1-90) «Сита лабораторные из металлической проволочной сетки. Технические условия».

(сноска введена Изменением № 1, введенным в действие Приказом Росстандарта от 31.10.2017 № 1548-ст)

ГОСТ 3118-77 (СТ СЭВ 4276-83) Реактивы. Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ 4206-75 Реактивы. Калий железосинеродистый. Технические условия

ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 4919.1-2016 Реактивы и особо чистые вещества. Методы приготовления растворов индикаторов

(в ред. Изменения № 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 31.10.2017 № 1548-ст)

ГОСТ ИСО 5725-1-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения <***>

(в ред. Изменения № 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 31.10.2017 № 1548-ст)

<***> На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения».

(сноска введена Изменением № 1, введенным в действие Приказом Росстандарта от 31.10.2017 № 1548-ст)

ГОСТ ИСО 5725-6-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике <*4>

(в ред. Изменения № 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 31.10.2017 № 1548-ст)

<*4> На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике».

(сноска введена Изменением № 1, введенным в действие Приказом Росстандарта от 31.10.2017 № 1548-ст)

ГОСТ 5833-75 Реактивы. Сахароза. Технические условия

ГОСТ 6038-79 Реактивы. D-глюкоза. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 6995-77 Реактивы. Метанол-яд. Технические условия

ГОСТ 14919-83 Электроплиты. Электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 19792-2001 Мед натуральный. Технические условия <*5>

(в ред. Изменения № 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 31.10.2017 № 1548-ст)

<*5> На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 54644-2011 «Мед натуральный. Технические условия».

(сноска введена Изменением № 1, введенным в действие Приказом Росстандарта от 31.10.2017 № 1548-ст)

Ссылка исключена с 1 мая 2018 года. - Изменение № 1, введенное в действие Приказом Росстандарта от 31.10.2017 № 1548-ст.

ГОСТ 24363-80 Реактивы. Калия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 25629-2014 Пчеловодство. Термины и определения

(в ред. Изменения № 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 31.10.2017 № 1548-ст)

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 29251-91 (ИСО 385-1-84) Посуда лабораторная стеклянная. Бюретки. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 31766-2012 Меды монофлорные. Технические условия

ГОСТ 31774-2012 Мед. Рефрактометрический метод определения воды

Ссылка исключена с 1 мая 2018 года. - Изменение № 1, введенное в действие Приказом Росстандарта от 31.10.2017 № 1548-ст.

ГОСТ OIML R 76-1-2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

(ссылка введена Изменением № 1, введенным в действие Приказом Росстандарта от 31.10.2017 № 1548-ст)

Примечание. При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

<*> На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53396-2009 «Сахар белый. Технические условия».

3. Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ 25629, ГОСТ ИСО 5725-1.

4. Требования безопасности проведения работ

При проведении измерений необходимо соблюдать требования пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, требования безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, инструкцию по эксплуатации жидкостного хроматографа, иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.

5. Условия измерений

Помещение лаборатории должно соответствовать санитарным правилам проектирования, оборудования, эксплуатации и содержания производственных и лабораторных помещений, предназначенных для проведения работ с веществами 1-го и 2-го классов опасности, органическими растворителями. Аналитическая лаборатория должна быть оснащена вентиляционной системой согласно ГОСТ 12.4.021.

При выполнении измерений следует соблюдать следующие условия:

Температура окружающего воздуха от 15 °C до 25 °C, относительная влажность воздуха не более 80% при температуре 25 °C, атмосферное давление 730 — 760 мм рт. ст.

6. Метод определения массовой доли редуцирующих сахаров и массовой доли сахарозы (в пересчете на безводное вещество)

6.1 Отбор и подготовка пробы

Пробу меда массой не менее 200 г отбирают по ГОСТ 19792.

Закристаллизованный мед размягчают в термостате по 6.3.4 или на термостатируемой водяной бане по 6.3.5 при температуре не выше 40 °C. Пробу охлаждают до комнатной температуры.

Мед с примесями процеживают при комнатной температуре через сито по 6.3.7. Закристаллизованный мед продавливают через сито шпателем по 6.3.8. Крупные механические частицы удаляют вручную.

Сотовый мед (без перговых ячеек) отделяют от сот при помощи сита без нагревания.

Пробу интенсивно и тщательно перемешивают не менее 3 мин.

6.2 Сущность метода

Метод основан на определении оптической плотности раствора железосинеродистого калия после того, как он прореагирует с редуцирующими сахарами меда. Метод испытания включает определение сахаров меда до и после инверсии.

6.3 Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы

6.3.1. Колориметр фотоэлектрический концентрационный КФК или других аналогичных марок, снабженный светофильтром с максимумом пропускания при длине волны (440 +/- 10) нм.

6.3.2 Кюветы кварцевые с толщиной поглощающего слоя 1 см.

6.3.3. Весы лабораторные по ГОСТ OIML R 76-1, предел допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более +/- 0,1 мг.

(в ред. Изменения № 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 31.10.2017 № 1548-ст)

6.3.4. Термостат или другое устройство, позволяющее производить равномерный нагрев до температуры 40 °C.

6.3.5. Водяная баня, позволяющая производить равномерный нагрев до температуры 82 °C.

6.3.6 Секундомер механический СОСпр-26-2-000.

6.3.7. Сито из нержавеющей стали, диаметр отверстий 0,5 мм, по ГОСТ ИСО 3310-1.

6.3.8 Шпатель лабораторный ШЛ.

6.3.9. Электроплитка по ГОСТ 14919 или газовая горелка.

6.3.10. Термометр ртутный стеклянный лабораторный до 100 °C по ГОСТ 28498 с ценой деления шкалы 1 °C.

6.3.11. Колбы мерные 1(2)-100(200, 1000)-2(ПМ) по ГОСТ 1770.

6.3.12. Колбы конические КН-1(2, 3)-250-29/32(34) ТС по ГОСТ 25336.

6.3.13 Пипетки 1-2-1-5(10, 25) по ГОСТ 29227.

6.3.14 Цилиндры 3-100 по ГОСТ 1770.

6.3.15 Стаканы В-1-100 ТС по ГОСТ 25336.

6.3.16 Бюретка 1-1(2)-2-25-0,1 по ГОСТ 29251.

6.3.17 Эксикатор по ГОСТ 25336.

6.3.18. Калий железосинеродистый по ГОСТ 4206, ч.д.а., х.ч.

6.3.19. Натрия гидроокись по ГОСТ 4328 или калия гидроокись по ГОСТ 24363, ч.д.а., раствор молярной концентрацией 2,5 моль/дм3 и раствор массовой долей 25%.

6.3.20. Сахароза, с углом вращения +(66,3 — 67,0)°, Merck, регистрационный номер CAS 57-50-1 <*>.

<*> Эта информация приведена для удобства пользователей стандарта и не является рекламой.

(п. 6.3.20 в ред. Изменения № 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 31.10.2017 № 1548-ст)

6.3.21 Кислота соляная по ГОСТ 3118, х.ч., ч.д.а.

6.3.22. Метиловый оранжевый, ч.д.а., раствор массовой долей 0,1%, готовят по ГОСТ 4919.1 (подраздел 3.1).

6.3.23 Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Допускается использование других средств измерений и вспомогательного оборудования по метрологическим, техническим характеристикам не хуже указанных в настоящем стандарте.

Допускается использование других реактивов по качеству и чистоте не ниже указанных.

6.4 Подготовка к испытаниям

6.4.1 Приготовление раствора железосинеродистого калия

Железосинеродистый калий по ГОСТ 4206 массой (10,00 +/- 0,01) г растворяют в дистиллированной воде по ГОСТ 6709 в мерной колбе вместимостью 1000 см3 по ГОСТ 1770. Объем раствора в колбе доводят до метки дистиллированной водой, перемешивают.

6.4.2 Приготовление стандартного раствора инвертного сахара

В стакан вместимостью 100 см3 по ГОСТ 25336 взвешивают навеску высушенной в эксикаторе по ГОСТ 25336 в течение 3 сут сахарозы по 6.3.20 массой (0,381 +/- 0,001) г. К навеске приливают 20 — 30 см3 дистиллированной воды по ГОСТ 6709, тщательно перемешивают стеклянной палочкой и переносят жидкость в мерную колбу вместимостью 200 см3 по ГОСТ 1770. Обработку пробы повторяют два — три раза до полного растворения навески. Стакан обмывают небольшой порцией дистиллированной воды, сливают в ту же мерную колбу. Объем жидкости в мерной колбе не должен превышать 100 см3.

(в ред. Изменения № 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 31.10.2017 № 1548-ст)

В колбу вносят 5 см3 концентрированной соляной кислоты по ГОСТ 3118, помещают термометр по 6.3.10 и ставят колбу в нагретую до 80 °C — 82 °C водяную баню по 6.3.5. Содержимое колбы нагревают до 67 °C — 70 °C, выдерживают при этой температуре ровно 5 мин, охлаждают до 20 °C. Добавляют одну каплю раствора метилового оранжевого, приготовленного по 6.3.22, и нейтрализуют раствором гидроокиси калия или натрия массовой долей 25% по 6.3.19. Объем раствора в колбе доводят до метки дистиллированной водой, перемешивают. Полученный раствор содержит 2 мг сахара в 1 см3.

6.4.3 Колориметрирование стандартного раствора инвертного сахара и построение градуировочного графика

В сухие конические колбы вместимостью 250 см3 по ГОСТ 25336 отмеряют пипетками по ГОСТ 29227 по 20 см3 раствора железосинеродистого калия, приготовленного по 6.4.1, по 5 см3 раствора гидроокиси натрия или калия молярной концентрацией 2,5 моль/дм3 по 6.3.19 и по 5,5; 6,0; 6,5; 7,0; 7,5; 8,0 и 8,5 см3 стандартного раствора инвертного сахара, приготовленного по 6.4.2 (что соответствует 12, 13, 14, 15 и 16 мг инвертного сахара). В каждую колбу приливают из бюретки по ГОСТ 29251 соответственно 4,5; 4,0; 3,5; 3,0; 2,5; 2,0 и 1,5 см3 дистиллированной воды по ГОСТ 6709 (объем жидкости в каждой колбе должен быть 35 см3). Содержимое колб нагревают до кипения и кипятят ровно 1 мин, охлаждают до комнатной температуры и измеряют оптическую плотность растворов по отношению к дистиллированной воде на фотоколориметре по 6.3.1 в кюветах по 6.3.2 при длине волны \lambda = 440\text{нм} . Оптическую плотность каждого раствора определяют не менее трех раз.

(в ред. Изменения № 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 31.10.2017 № 1548-ст)

Вычисляют среднеарифметическое значение оптической плотности каждого раствора при условии, если абсолютное расхождение (D_{\text{макс}} - D_{\text{мин}}) результатов трех определений не превосходит значения 0,02\overline{D} . При невыполнении этого условия проводят повторные испытания. Вычисление проводят до третьего десятичного знака.

(в ред. Изменения № 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 31.10.2017 № 1548-ст)

Таблица 1 исключена с 1 мая 2018 года. - Изменение № 1, введенное в действие Приказом Росстандарта от 31.10.2017 № 1548-ст.

Строят градуировочный график, откладывая на оси ординат значение оптической плотности каждого раствора, а на оси абсцисс — соответствующую этому значению массу инвертного сахара в миллиграммах. Градуировочный график должен быть линейным в заданном диапазоне с коэффициентом корреляции 0,99. График используют для определения содержания редуцирующих сахаров и общего сахара после инверсии.

6.4.4 Приготовление раствора меда

Навеску меда, подготовленного по 6.1, массой (2,00 +/- 0,01) г растворяют в дистиллированной воде по ГОСТ 6709 в мерной колбе вместимостью 100 см3 по ГОСТ 1770. Объем раствора в колбе доводят до метки дистиллированной водой, перемешивают.

6.4.5 Определение массовой доли воды в меде

Определение массовой доли воды в меде, подготовленном по 6.1, проводят по ГОСТ 31774.

6.5 Проведение испытаний

6.5.1 Определение массовой доли редуцирующих сахаров до инверсии

6.5.1.1. Раствор меда, приготовленный по 6.4.4, объемом 10 см3 вносят в мерную колбу вместимостью 100 см3 по ГОСТ 1770. Объем раствора в колбе доводят до метки дистиллированной водой, перемешивают.

6.5.1.2. В коническую колбу вместимостью 250 см3 по ГОСТ 25336 вносят 20 см3 раствора железосинеродистого калия, приготовленного по 6.4.1, 5 см3 раствора гидроокиси натрия или калия молярной концентрацией 2,5 моль/дм3 по 6.3.19 и 10 см3 раствора меда, приготовленного по 6.5.1.1. Смесь нагревают до кипения и кипятят ровно 1 мин, быстро охлаждают до комнатной температуры и делают не менее трех измерений оптической плотности (D) по отношению к дистиллированной воде на фотоколориметре по 6.3.1 в кюветах по 6.3.2 при длине волны \lambda = 440\text{нм} .

(в ред. Изменения № 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 31.10.2017 № 1548-ст)

В случае получения значений оптической плотности, не попадающих в рабочий диапазон, определение повторяют, соответственно изменив объем раствора меда, приготовленного по 6.5.1.1, в реакции с раствором железосинеродистого калия.

(в ред. Изменения № 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 31.10.2017 № 1548-ст)

Вычисляют среднеарифметическое значение оптической плотности раствора при условии, если абсолютное расхождение (D_{\text{макс}} - D_{\text{мин}}) результатов трех определений не превосходит значения 0,02\overline{D} . При невыполнении этого условия проводят повторные испытания. Вычисление проводят до третьего десятичного знака.

(в ред. Изменения № 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 31.10.2017 № 1548-ст)

6.5.1.3. При анализе каждой пробы выполняют два параллельных определения.

6.5.1.4. Для каждой пробы по градуировочному графику находят массу редуцирующих сахаров до инверсии, соответствующую значению оптической плотности, определенному по 6.5.1.2.

6.5.2 Определение массовой доли общего сахара после инверсии

6.5.2.1. В мерную колбу вместимостью 200 см3 вносят раствор меда, приготовленный по 6.4.4, объемом 20 см3, добавляют 80 см3 дистиллированной воды по ГОСТ 6709 и 5 см3 концентрированной соляной кислоты по ГОСТ 3118, помещают термометр по 6.3.10 и ставят колбу в нагретую до 80 °C — 82 °C водяную баню по 6.3.5. Содержимое колбы нагревают до 67 °C — 70 °C, выдерживают при этой температуре точно 5 мин, охлаждают до 20 °C. Добавляют одну каплю раствора метилового оранжевого, приготовленного по 6.3.22, и нейтрализуют раствором гидроокиси калия или натрия массовой долей 25% по 6.3.19. Объем раствора в колбе доводят до метки дистиллированной водой, перемешивают.

6.5.2.2. В коническую колбу вместимостью 250 см3 по ГОСТ 25336 вносят 20 см3 раствора железосинеродистого калия, приготовленного по 6.4.1, 5 см3 раствора гидроокиси натрия или калия молярной концентрацией 2,5 моль/дм3 по 6.3.19 и 10 см3 раствора меда после инверсии, полученного по 6.5.2.1. Смесь нагревают до кипения и кипятят ровно 1 мин, быстро охлаждают до комнатной температуры и делают не менее трех измерений оптической плотности (D) по отношению к дистиллированной воде на фотоколориметре по 6.3.1 в кюветах по 6.3.2 при длине волны \lambda = 440\text{нм} . В случае получения значений оптической плотности, не попадающих в рабочий диапазон, определение повторяют, соответственно изменив объем раствора меда, приготовленного по 6.5.2.1, в реакции с раствором железосинеродистого калия.

(в ред. Изменения № 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 31.10.2017 № 1548-ст)

Вычисляют среднеарифметическое значение оптической плотности раствора при условии, если абсолютное расхождение (D_{\text{макс}} - D_{\text{мин}}) результатов трех определений не превосходит значения критического диапазона CR_{0,95}(3) , приведенного в таблице 1. При невыполнении этого условия проводят повторные испытания. Вычисление проводят до третьего десятичного знака.

6.5.2.3. При анализе каждой пробы выполняют два параллельных определения.

6.5.2.4. Для каждой пробы по градуировочному графику находят массовую долю общего сахара после инверсии, соответствующую значению оптической плотности, определенному по 6.5.2.2.

6.6 Обработка и представление результатов испытаний

6.6.1. Значение массовой доли редуцирующих сахаров до инверсии (в пересчете на безводное вещество) X_{1} , %, вычисляют по формуле

X_{1} = 5a_{1} \cdot 100(100 - W)^{- 1} , (1)

где 5 — коэффициент пересчета миллиграммов в проценты, учитывающий объем и концентрацию испытуемого раствора меда;

a_{1} — масса редуцирующих сахаров в соответствии с 6.5.1.4, мг;

W — массовая доля воды в меде в соответствии с 6.4.5, %.

6.6.2. Значение массовой доли общих сахаров после инверсии (в пересчете на безводное вещество) X_{2} , %, вычисляют по формуле

X_{2} = 5a_{2} \cdot 100 \cdot (100 - W)^{- 1} , (2)

где 5 — коэффициент пересчета миллиграммов в проценты, учитывающий объем и концентрацию испытуемого раствора меда;

a_{2} — масса общих сахаров в соответствии с 6.5.2.4, мг;

W — массовая доля воды в меде в соответствии с 6.4.5, %.

6.6.3. Значение массовой доли сахарозы (в пересчете на безводное вещество) X_{3} , %, вычисляют по формуле

X_{3} = (X_{2} - X_{1}) . (3)

6.6.4. За результаты испытаний принимают среднеарифметические значения двух параллельных определений каждого показателя, полученные в условиях повторяемости, если абсолютное расхождение между параллельными определениями не превышает пределов повторяемости r по ГОСТ ИСО 5725-6. Значения пределов повторяемости r приведены в таблице 2.

Таблица 2

6.6.5. Результаты испытаний, округленные до второго десятичного знака, в документах, предусматривающих их использование, представляют в виде:

(\overline{X_{1}} \pm \Delta) , %, при P = 0,95,

где \overline{X_{1}} — среднеарифметическое значение результатов определений массовой доли редуцирующих сахаров до инверсии (в пересчете на безводное вещество) по 6.6.4, %;

\pm \Delta — границы абсолютной погрешности результатов определений по 6.7.1, %;

(\overline{X_{3}} \pm \Delta) , %, при P = 0,95,

где \overline{X_{3}} — среднеарифметическое значение результатов определений массовой доли сахарозы (в пересчете на безводное вещество) по 6.6.4, %;

\pm \Delta — границы абсолютной погрешности результатов определений по 6.7.1, %.

6.7 Характеристика погрешности испытаний

6.7.1. Границы абсолютной погрешности результатов испытаний, получаемых согласно данному методу, \pm \Delta при доверительной вероятности P = 0,95 приведены в таблице 2.

6.7.2 Результаты испытаний оформляют протоколом испытаний.

7. Метод определения массовой доли фруктозы, глюкозы, сахарозы, туранозы, мальтозы, трегалозы, арабинозы, раффинозы, мелецитозы, мелибиозы с применением высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)

7.1 Отбор и подготовка пробы — по 6.1

7.2 Сущность метода

Метод основан на растворении испытуемой пробы в воде, хроматографическом (ВЭЖХ) разделении сахаров меда, их регистрации с помощью рефрактометрического детектора и количественном определении по методу внешних стандартов.

7.3 Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы

7.3.1. Хроматограф жидкостный с пределом допускаемого значения относительного среднеквадратического отклонения выходного сигнала по площади или высоте пика не более 2% и пределом обнаружения по антрацену (соотношение сигнал/шум равно 10) не более 0,01 мкг/см3, состоящий из:

• насоса высокого давления с верхним пределом давления не менее 25 МПа, диапазоном регулирования подачи растворителя не менее (0,1 — 5,0) см3/мин;
• термостата колонок, поддерживающего температуру колонки (30,0 +/- 0,1) °C;
• инжектора или петлевого устройства ввода пробы рабочим объемом петли 0,020 см3;
• рефрактометрического детектора;
• системы для сбора и обработки данных;
• колонки хроматографической длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, заполненной аминмодифицированным диоксидом кремния (например, Eclipse XDB-C18, 5 мкм, 250 x 4,6 мм).

7.3.2. Предколонка с картриджем Phenomenex C_{18} (ODS) размером 4 x 3 мм.

7.3.3. Микрошприцы вместимостью от 0,010 до 0,050 см3 для жидкостной хроматографии (в случае использования инжектора).

7.3.4. Весы неавтоматического действия по ГОСТ OIML R 76-1 с пределами допускаемой абсолютной погрешности не более +/- 0,1 мг.

(п. 7.3.4 в ред. Изменения № 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 31.10.2017 № 1548-ст)

7.3.5. Система получения воды квалификации «для ВЭЖХ» Millipore Simplicity или аналогичная.

7.3.6 Устройство для фильтрации и дегазации.

7.3.7 Колбы мерные 1(2)-100-2(ПМ) по ГОСТ 1770.

7.3.8 Пипетки 2-2-25 по ГОСТ 29227.

7.3.9 Цилиндры 3-50(100)-1 по ГОСТ 1770.

7.3.10 Стаканы В-1-50 ТС по ГОСТ 25336.

(в ред. Изменения № 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 31.10.2017 № 1548-ст)

7.3.11. Колбы конические КН-1(2, 3)-250-29/32(34) ТС по ГОСТ 25336.

7.3.12 Фильтр нейлоновый импортный на шприце с размером пор 0,45 мкм.

7.3.13. Термостат или другое устройство, позволяющее проводить равномерный нагрев до температуры 40 °C.

7.3.14. Сито из нержавеющей стали, диаметр отверстий 0,5 мм по ГОСТ ИСО 3310-1.

7.3.15. Палочки стеклянные лабораторные оплавленные длиной от 15 до 20 см.

7.3.16 Шпатель лабораторный ШЛ.

7.3.17 Ацетонитрил для хроматографии, о.с.ч.

(в ред. Изменения № 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 31.10.2017 № 1548-ст)

7.3.18. Метанол-яд для хроматографии или по ГОСТ 6995, х.ч.

7.3.19 Фруктоза с содержанием основного вещества не менее 99,0%.

7.3.20 Глюкоза по ГОСТ 6038.

7.3.21 Сахароза по ГОСТ 5833.

7.3.22 Тураноза с содержанием основного вещества не менее 99,0%.

7.3.23 Мальтоза с содержанием основного вещества не менее 99,0%.

7.3.24 Трегалоза с содержанием основного вещества не менее 99,0%.

7.3.25 Арабиноза с содержанием основного вещества не менее 99,0%.

7.3.26 Раффиноза с содержанием основного вещества не менее 99,0%.

7.3.27 Мелецитоза с содержанием основного вещества не менее 99,0%.

7.3.28 Мелибиоза с содержанием основного вещества не менее 99,0%.

7.3.29 Вода для лабораторного анализа по [1], категории 1.

7.3.30 Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Допускается использование других средств измерений и вспомогательного оборудования по метрологическим, техническим характеристикам не хуже указанных в настоящем стандарте.

Допускается использование других реактивов по качеству и чистоте не ниже вышеуказанных.

7.4 Подготовка к испытаниям

7.4.1 Приготовление элюента для ВЭЖХ

В конической колбе на 250 см3 по ГОСТ 25336 смешивают 80 см3 ацетонитрила по 7.3.17 и 20 см3 воды для лабораторного анализа по [1]. Раствор элюента пропускают через устройство для фильтрации и дегазации по 7.3.6.

Раствор при необходимости хранят при температуре 4 °C в течение 30 сут.

7.4.2 Приготовление стандартного раствора

Фруктозу по 7.3.19 массой (2,0000 +/- 0,0001) г, глюкозу по ГОСТ 6038 массой (1,5000 +/- 0,0001) г, сахарозу по ГОСТ 5833 массой (0,2500 +/- 0,0001) г, туранозу по 7.3.22 массой (0,1500 +/- 0,0001) г, мальтозу по 7.3.23 массой (0,1500 +/- 0,0001) г, трегалозу по 7.3.24 массой (0,1500 +/- 0,0001) г, арабинозу по 7.3.25 массой (0,1500 +/- 0,0001) г, раффинозу по 7.3.26 массой (0,1500 +/- 0,0001) г, мелецитозу по 7.3.27 массой (0,1500 +/- 0,0001) г, мелибиозу по 7.3.28 массой (0,1500 +/- 0,0001) г растворяют в воде для лабораторного анализа в одной мерной колбе вместимостью 100 см3 по ГОСТ 1770. Добавляют 25 см3 метанола по 7.3.18. Объем раствора в колбе доводят до метки водой для лабораторного анализа, перемешивают. Полученный раствор фильтруют через нейлоновый фильтр по 7.3.12.

Раствор хранят в холодильнике при температуре 4 °C в течение 30 сут или при температуре минус 18 °C в течение 180 сут.

7.4.3 Приготовление раствора меда

В стакан вместимостью 50 см3 по ГОСТ 25336 взвешивают навеску меда массой (5,0000 +/- 0,0001) г, подготовленного по 6.1. К навеске приливают 10 — 20 см3 дистиллированной воды по ГОСТ 6709, мед тщательно растирают стеклянной палочкой и переносят жидкость в мерную колбу вместимостью 100 см3 по ГОСТ 1770. Обработку пробы повторяют два-три раза до полного растворения меда, затем стакан несколько раз обмывают небольшими порциями дистиллированной воды, которые также сливают в мерную колбу, при этом объем жидкости не должен превышать 2/3 объема колбы. Добавляют 25 см3 метанола. Объем раствора в колбе доводят до метки дистиллированной водой, перемешивают. Полученный раствор фильтруют через нейлоновый фильтр по 7.3.12.

Раствор хранят в холодильнике при температуре 4 °C в течение 30 сут или при температуре минус 18 °C в течение 180 сут.

7.5 Проведение испытаний

Стандартный раствор (см. 7.4.2) и раствор меда (см. 7.4.3) последовательно хроматографируют в следующих условиях хроматографического анализа:

• температура колонки (30,0 +/- 0,1) °C;
• скорость потока 1,3 см3/мин;
• подвижная фаза — элюент (см. 7.4.1);
• объем вводимого раствора 0,020 см3;
• рефрактометрический детектор.

Значения времен удерживания сахаров в ВЭЖХ-спектрах приведены в таблице 3.

Примечание. Объемы инжекции раствора меда и стандартного раствора должны быть одинаковыми.

Таблица 3

При анализе каждой пробы выполняют два параллельных определения.

7.6 Обработка и представление результатов испытаний

7.6.1 Качественная оценка

Путем сравнения значений времен удерживания в ВЭЖХ-спектрах стандартного раствора и раствора меда проводят идентификацию определяемых сахаров.

7.6.2 Количественное определение

Количественное определение осуществляют методом внешних стандартов по площадям или высотам пиков определяемых сахаров в ВЭЖХ-спектре раствора меда по отношению к таковым стандартного раствора.

Примечание. Чтобы учесть изменения во временах удерживания и значениях пиков сахаров, через каждые четыре анализа испытуемых растворов вводят стандартный раствор. Времена удерживания сахаров могут меняться при переходе от одной колонки к другой. После выхода последнего сахара (мелибиозы) необходимо произвести промывку хроматографической колонки дистиллированной водой для удаления прочно удерживаемых соединений.

7.6.3 Массовую долю сахара X, %, рассчитывают по формуле

X = 100A_{1} \cdot V_{1} \cdot m_{2} \cdot A_{2}^{- 1} \cdot V_{2}^{- 1} \cdot m_{1}^{- 1} , (4)

где A_{1} — площадь или высота пика соответствующего сахара в растворе меда, в м2 или м;

V_{1} — общий объем раствора меда, см3;

m_{2} — масса сахара, содержащаяся в общем объеме стандартного раствора V_{2} , г;

A_{2} — площадь или высота пика соответствующего сахара в стандартном растворе, в м2 или м;

V_{2} — общий объем стандартного раствора, см3;

m_{1} — проба меда, г.

Вычисление проводят до второго десятичного знака.

7.6.4. За результат испытаний принимают среднеарифметическое значение двух параллельных определений, полученных в условиях повторяемости, если абсолютное расхождение между параллельными определениями не превышает предела повторяемости r по ГОСТ ИСО 5725-6. Значение предела повторяемости r приведено в таблице 4.

Таблица 4

При превышении предела повторяемости r целесообразно произвести дополнительное определение значения массовой доли сахара и получить еще один результат. Если при этом абсолютное расхождение (X_{\text{макс}} - X_{\text{мин}}) результатов трех определений не превосходит значения критического диапазона CR_{0,95}(3) , то в качестве окончательного результата принимают среднеарифметическое значение результатов трех определений. Значение критического диапазона CR_{0,95}(3) приведено в таблице 4.

При невыполнении этого условия проводят повторные испытания.

7.6.5. Абсолютное расхождение между результатами испытаний, полученными в двух лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости R по ГОСТ ИСО 5725-6. При выполнении этого условия приемлемы оба результата испытания и в качестве окончательного результата может быть использовано их среднеарифметическое значение. Значение предела воспроизводимости R приведено в таблице 4.

7.6.6. Результат испытаний, округленный до второго десятичного знака, в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде:

(\overline{X} \pm \Delta) , %, при P = 0,95,

где \overline{X} — среднеарифметическое значение результатов определений по 7.6.4, %;

\pm \Delta — границы абсолютной погрешности результатов определений по 7.7.1, %.

7.7 Характеристика погрешности испытаний

7.7.1. Границы абсолютной погрешности результатов испытаний, получаемых согласно данному методу, при доверительной вероятности P = 0,95 приведены в таблице 4.

7.7.2 Результаты испытаний оформляют протоколом испытаний.

БИБЛИОГРАФИЯ

[1] ISO 3696:1987 Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний

(в ред. Изменения № 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 31.10.2017 № 1548-ст)