ГОСТ 31701-2012. Межгосударственный стандарт. Продукты пищевые. Метод определения наличия синтетических красителей в пряностях
(введен в действие Приказом Росстандарта от 29.11.2012 № 1690-ст)
Примечание
Документ включен в Перечень международных и региональных (межгосударственных) стандартов, а в случае их отсутствия — национальных (государственных) стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «Требования безопасности пищевых добавок, ароматизаторов и технологических вспомогательных средств» (ТР ТС 029/2012) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 07.02.2018 № 21). Текст данного документа приведен с учетом поправок, опубликованных в «ИУС», № 7, 2015 и № 6, 2019. Документ введен в действие с 1 июля 2013 года.
ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ
flowchart LR n0["ГОСТ Р 52825-2007"]:::rst click n0 "https://bukva.ai/docs/standart-452-st" "ГОСТ Р 52825-2007. Национальный стандарт Российской Федерации. Продукты пищевые. Метод определения наличия синтетических красителей в пряностях (утв. и введен в действие Приказом Р" n1["ГОСТ 31701-2012"]:::doc click n1 "https://bukva.ai/docs/gost-31701-2012" "ГОСТ 31701-2012. Межгосударственный стандарт. Продукты пищевые. Метод определения наличия синтетических красителей в пряностях (введен в действие Приказом Росстандарта от 29.11.201" n0 --> n1 classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000; classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000; classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;
от 29 ноября 2012 г. № 1690-ст
МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАЛИЧИЯ СИНТЕТИЧЕСКИХ КРАСИТЕЛЕЙ В ПРЯНОСТЯХ
Food products. Method for determination of artificial colours in spices presence
Предисловие
Цели, основные принципы и порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены».
Сведения о стандарте
1. Подготовлен Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом пищевых ароматизаторов, кислот и красителей Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИПАКК Россельхозакадемии).
2. Внесен Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии.
3. Принят Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (Протокол от 15 ноября 2012 г. № 42).
4. Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 ноября 2012 г. № 1690-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 31701-2012 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2013 г.
5. Настоящий стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 52825-2007.
Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта публикуется в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты».
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты».
1. ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ
Настоящий стандарт распространяется на сухие пряности и устанавливает хроматографический метод определения наличия и идентификации водо- и жирорастворимых синтетических красителей.
По данному методу предел обнаружения массовой доли водо- и жирорастворимых синтетических красителей в пряностях составляет не менее 0,005%.
2. НОРМАТИВНЫЕ ССЫЛКИ
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 61-75 Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия
ГОСТ 427-75 Линейки измерительные металлические. Технические условия
ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 2603-79 Реактивы. Ацетон. Технические условия
ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия
ГОСТ 3760-79 Реактивы. Аммиак водный. Технические условия
ГОСТ 4517-87 Реактивы. Методы приготовления вспомогательных реактивов и растворов, применяемых при анализе
ГОСТ 5830-79 Реактивы. Спирт изоамиловый. Технические условия
ГОСТ 5955-75 Реактивы. Бензол. Технические условия
ГОСТ 6016-77 Реактивы. Спирт изобутиловый. Технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 9875-88 Диэтиламин технический. Технические условия
ГОСТ 13647-78 Реактивы. Пиридин. Технические условия
ГОСТ 14919-83 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия
ГОСТ 18300-87 Спирт этиловый ректификованный технический. Технические условия
ГОСТ 20015-88 Хлороформ. Технические условия
ГОСТ 20288-74 Реактивы. Углерод четыреххлористый. Технические условия
ГОСТ 21241-89 Пинцеты медицинские. Общие технические требования и методы испытаний
ГОСТ 22300-76 Реактивы. Эфиры этиловый и бутиловый уксусной кислоты. Технические условия
ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 28876-90 (ИСО 948-80) Пряности и приправы. Отбор проб
ГОСТ 29169-91 (ИСО 648-77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой
ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
Примечание. При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов по указателю «Национальные стандарты», составленному по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3. МЕТОД АНАЛИЗА
3.1 Сущность метода
Метод анализа водорастворимых синтетических красителей основан на экстракции дистиллированной водой красителей из анализируемой пряности, предварительной очистке экстракта и сорбции синтетических красителей из очищенного экстракта твердыми сорбентами, десорбции аммиаком, удалении последнего выпариванием и последующей идентификации синтетических красителей хроматографированием в тонком слое сорбента (ТСХ).
Метод анализа жирорастворимых синтетических красителей основан на экстракции этиловым спиртом красителей из анализируемой пряности, предварительно очищенной от водорастворимых веществ, очистке экстракта твердыми сорбентами, удалении растворителя выпариванием и последующей идентификации синтетических красителей хроматографированием в тонком слое сорбента.
Идентификацию водо- и жирорастворимых синтетических красителей проводят методом сравнения значений R\prime_{f} (отношение расстояния от центра пятна обнаруженного синтетического красителя до линии старта к расстоянию линии миграции элюента до линии старта) каждого обнаруженного синтетического красителя со значениями R_{f} (отношение расстояния от центра пятна стандартного синтетического красителя до линии старта к расстоянию линии миграции элюента до линии старта) контрольных образцов синтетических красителей (КО).
В качестве КО используют водные и спиртовые растворы стандартных синтетических красителей из числа ожидаемых.
3.2 Условия проведения анализа
При подготовке и проведении анализа должны быть соблюдены следующие условия:
температура окружающего воздуха .................... от 20 °C до 25 °C;
относительная влажность воздуха .................... от 40% до 90%;
напряжение в электросети ........................... 220_{- 15\%}^{+ 10\%}B ;
частота тока в электросети ......................... от 49 до 51 Гц.
Помещение, где проводят работы с реактивами, должно быть оснащено приточно-вытяжной вентиляцией.
Все операции с реактивами следует проводить в вытяжном шкафу.
3.3 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы
Для проведения анализа используют следующие средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы:
3.3.1. Весы лабораторные с пределами допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания +/- 0,1 мг и +/- 100 мг по ГОСТ 24104.
3.3.2 Патрон для твердофазной экстракции.
3.3.3. Пластина для тонкослойной хроматографии с силикагелем на полимерной подложке размером 10 x 10 см.
3.3.4 Камера хроматографическая размером 12 x 12 x 5 см.
3.3.5 Шприц медицинский инъекционный вместимостью от 10 до 20 см3.
3.3.6. Микрошприц вместимостью 1,0 мм3 (1 мкл) с ценой деления не более 0,02 мм3 (0,02 мкл).
3.3.7. Пипетки с одной меткой вместимостью 5 см3 1-го класса точности по ГОСТ 29169.
3.3.8. Пипетки градуированные вместимостью 1, 5, 10 см3 1-го класса точности по ГОСТ 29227.
3.3.9. Стаканы термостойкие вместимостью 50, 200 см3 по ГОСТ 25336.
3.3.10. Колбы мерные с пришлифованной пробкой вместимостью 10, 25, 50 см3 1-го класса точности по ГОСТ 1770.
3.3.11. Колбы конические термостойкие вместимостью 250 см3 по ГОСТ 25336.
3.3.12 Пробки стеклянные с конусом 29/32 по ГОСТ 1770.
3.3.13 Стаканчик СВ-14/8 по ГОСТ 25336.
3.3.14. Чашка выпарная круглодонная вместимостью 100 см3 по ГОСТ 25336.
3.3.15 Палочка стеклянная с оплавленным концом.
3.3.16 Термостат или водяная баня.
3.3.17 Электроплитка бытовая по ГОСТ 14919.
3.3.18 Линейка металлическая по ГОСТ 427.
3.3.19 Пинцет медицинский по ГОСТ 21241.
3.3.20. Стандартные синтетические красители с массовой долей красящих веществ не менее 70% по 3.4.4.1.
3.3.21 Пиридин по ГОСТ 13647, ч.д.а.
3.3.22. Кислота уксусная по ГОСТ 61, х.ч., ледяная, раствор массовой концентрации 10 г/дм3 готовят по ГОСТ 4517.
3.3.23. Спирт этиловый ректификованный технический высшего сорта по ГОСТ 18300.
3.3.24 Спирт изоамиловый по ГОСТ 5830, ч.д.а.
3.3.25 Спирт изобутиловый по ГОСТ 6016, ч.д.а.
3.3.26. Аммиак водный по ГОСТ 3760, ч.д.а., раствор массовой концентрации 250 г/дм3.
3.3.27. Алюминия оксид основной pH = 9,2, зернением от 0,10 до 0,15 мм для хроматографии, ч.
3.3.28. Алюминия оксид активированный кислый pH = 4,5, зернением от 0,05 до 0,15 мм, удельной поверхностью 155 м2/г для колоночной хроматографии.
3.3.29 Диэтиламин технический по ГОСТ 9875.
3.3.30 Хлороформ по ГОСТ 20015.
3.3.31 Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
3.3.32. Мешалка магнитная с максимальной скоростью вращения магнитного ротора 1400 об/мин.
3.3.33. Центрифуга лабораторная со скоростью вращения не менее 15000 об/мин.
3.3.34. Воронка лабораторная типа В-36-80 ХС по ГОСТ 25336.
3.3.35 Фильтры бумажные, обеззоленные, «Красная лента».
3.3.36 Центрифужные пробирки с пробками вместимостью 10 см3.
3.3.37. Цилиндр мерный вместимостью 100 см3, с ценой наименьшего деления 1 см3, 1-го класса точности по ГОСТ 1770.
3.3.38 Ацетон по ГОСТ 2603, ч.д.а.
3.3.39 Кислота соляная по ГОСТ 3118, ч.д.а.
3.3.40. Эфир этиловый уксусной кислоты по ГОСТ 22300, ч.д.а.
3.3.41 Углерод четыреххлористый, по ГОСТ 20288, ч.д.а.
3.3.42 Бензол по ГОСТ 5955, ч.д.а.
3.3.43. Петролейный эфир, с температурой кипения от 40 °C до 70 °C, по документу, в соответствии с которым он изготовлен и может быть идентифицирован.
Допускается применение других средств измерений и вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих необходимую точность измерения, а также реактивы по качеству не хуже вышеуказанных.
3.4 Подготовка к анализу
3.4.1 Приготовление раствора аммиака массовой концентрации 125 г/дм3
В мерную колбу (с пришлифованной пробкой) вместимостью 10 см3 по 3.3.10 вносят по 3.3.7 пипеткой 5 см3 водного аммиака по 3.3.26. Доводят объем раствора аммиака в колбе до метки дистиллированной водой по 3.3.31, закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают. Раствор аммиака хранят в плотно закрытой таре при температуре от 15 °C до 25 °C не более 1 мес.
3.4.2 Приготовление соляной кислоты, раствор с массовой долей 2% в ацетоне
В мерную колбу (с пришлифованной пробкой) вместимостью 50 см3 вносят от 30 до 35 см ацетона по 3.3.38 и 1 см3 соляной кислоты по 3.3.39. Доводят объем раствора в колбе до метки ацетоном, закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают. Приготовленный раствор хранят в плотно закрытой таре по ГОСТ 2603 (пункт 5.3) при температуре от 15 °C до 25 °C не более 1 мес.
3.4.3 Приготовление элюентов
3.4.3.1 Приготовление элюента 1
В мерную колбу вместимостью 50 см3 по 3.3.10 вносят пипетками, индивидуальными для каждого реактива, 3 см3 пиридина по 3.3.21, 3 см3 изоамилового спирта по 3.3.24, 3 см3 изобутилового спирта по 3.3.25, 4 см3 этилового ректификованного технического спирта по 3.3.23 и 4 см3 водного аммиака. Колбу закрывают стеклянной пробкой и тщательно перемешивают.
3.4.3.2 Приготовление элюента 2
В мерную колбу вместимостью 50 см3 вносят пипетками, индивидуальными для каждого реактива, 3 см3 пиридина по 3.3.21, 3 см3 изоамилового спирта, 3 см3 изобутилового спирта, 4 см3 этилового ректификованного технического спирта и 8 см3 водного аммиака. Колбу закрывают стеклянной пробкой и тщательно перемешивают.
3.4.3.3 Приготовление элюента 3
В мерную колбу вместимостью 50 см3 вносят пипетками, индивидуальными для каждого реактива, 6 см3 диэтиламина по 3.3.29, 5 см3 хлороформа по 3.3.30, 6 см3 этилового ректификованного технического спирта и 3 см3 раствора аммиака массовой концентрации 125 г/дм3, приготовленного по 3.4.1. Колбу закрывают стеклянной пробкой и тщательно перемешивают.
3.4.3.4 Приготовление элюента 4
В мерную колбу вместимостью 50 см3 вносят пипетками, индивидуальными для каждого реактива, 6 см3 четыреххлористого углерода по 3.3.41, 2,8 см3 бензола по 3.3.42, 1 см3 хлороформа и 0,2 см3 этилового эфира уксусной кислоты по 3.3.40. Колбу закрывают стеклянной пробкой и тщательно перемешивают.
3.4.3.5 Приготовление элюента 5
В мерную колбу вместимостью 50 см3 вносят пипетками, индивидуальными для каждого реактива, 9 см3 петролейного эфира по 3.3.43 и 1 см3 этилового эфира уксусной кислоты.
3.4.3.6 Приготовление элюента 6
В коническую колбу вместимостью 50 см3 вносят пипетками, индивидуальными для каждого реактива, 5 см3 петролейного эфира и 5 см3 бензола.
3.4.3.7. Для идентификации водорастворимых синтетических красителей используют элюенты 1, 2 или 3. Для идентификации жирорастворимых синтетических красителей используют элюенты 4, 5 или 6.
3.4.3.8. Элюенты готовят непосредственно перед началом анализа. Не допускается повторное использование элюентов.
3.4.4 Приготовление растворов КО
3.4.4.1. В необходимое число стаканов, вместимостью 50 см3 каждый, взвешивают на лабораторных весах по 3.3.1 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания +/- 0,1 мг навески стандартных синтетических красителей массой 0,025 г, в соответствии с таблицами 1 и 2.
| Наименование стандартного синтетического красителя | Индекс красителя <*> | Индекс пищевой добавки <**> | Значения R_{f} <***> | ||
| Элюент 1 | Элюент 2 | Элюент 3 | |||
| Тартразин | 19140 | Е102 | 0,27 | 0,49 | 0,37 |
| Желтый хинолиновый | 47005 | Е104 | 0,74 0,83 | 0,51 0,46 | 0,47 0,65 |
| Желтый 2G | 18965 | Е107 | 0,52 | 0,65 | 0,31 |
| Желтый «солнечный закат» | 15985 | Е110 | 0,58 | 0,51 | 0,64 |
| Азорубин | 14720 | Е122 | 0,34 | 0,49 | 0,54 |
| Понсо 4R | 16255 | Е124 | 0,43 | 0,42 | 0,27 |
| Красный 2G | 18050 | Е128 | 0,49 | 0,51 | 0,48 |
| Красный очаровательный AC | 16035 | Е129 | 0,50 | 0,67 | 0,66 |
| Синий патентованный V | 42051 | Е131 | 0,20 | 0,43 | 0,46 |
| Синий блестящий FCF | 42090 | Е133 | 0,43 | 0,46 | 0,59 |
| Зеленый S | 44090 | Е142 | 0,16 | 0,54 | 0,55 |
| Зеленый прочный FSF | 42053 | Е143 | 0,43 | 0,37 | 0,39 |
| Черный блестящий PN | 28440 | Е151 | 0,25 | 0,62 | 0,40 |
| Хризоин S (Тропеолин 0) | 14270 | Е103 | 0,61 | 0,54 | 0,58 |
| Амарант | 16185 | Е123 | 0,29 | 0,41 | 0,43 |
| Оранжевый II (Тропеолин 000-1) | 15510 | - | 0,75 | 0,76 | 0,79 |
| Эритрозин | 45430 | Е127 | 0,70; | 0,63; | 0,84; |
| 0,62 | 0,60 | 0,34 | |||
| <*> Индекс красителя в соответствии с Международной классификацией. | |||||
| <**> Индекс красителя в соответствии с Европейской цифровой системой кодификации пищевых добавок. | |||||
| <***> R_{f} получены при условиях проведения анализа стандартных синтетических красителей по 3.2 с использованием средств измерений, вспомогательного оборудования, реактивов и материалов, указанных в 3.3. | |||||
3.4.4.2. В каждый стакан с навеской стандартного водорастворимого синтетического красителя, подготовленного по 3.4.4.1, прибавляют 5 см3 дистиллированной воды и перемешивают стеклянной палочкой по 3.3.15 до полного растворения. Для интенсификации растворения допускается нагревание раствора в стакане на водяной бане по 3.3.16 до температуры не более 90 °C. Затем раствор охлаждают до 20 °C, переносят количественно в мерную колбу (с пришлифованной пробкой) вместимостью 50 см3, доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой, закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают.
Полученный раствор КО хранят в склянке из темного стекла с завинчивающейся пробкой при комнатной температуре не более 6 мес.
3.4.4.3. В каждый стакан с навеской стандартного жирорастворимого синтетического красителя, подготовленного по 3.4.4.1, прибавляют 5 см3 раствора, приготовленного по 3.4.2, и перемешивают стеклянной палочкой до полного растворения. Затем раствор переносят количественно в мерную колбу (с пришлифованной пробкой) вместимостью 25 см3, доводят объем раствора в колбе до метки раствором по 3.4.2, закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают.
Приготовленный раствор КО хранят в склянке из темного стекла с притертой пробкой при комнатной температуре не более 1 мес.
Растворы, приготовленные по 3.4.4.2 и 3.4.4.3, используют для получения хроматографических карт.
3.4.5 Отбор проб
Отбор проб пряностей — по ГОСТ 28876.
3.4.6 Извлечение водорастворимых синтетических красителей из анализируемой пряности методом твердофазной экстракции
3.4.6.1 Приготовление водного экстракта пряности
В стакане вместимостью 200 см3 по 3.3.9 взвешивают на лабораторных весах с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания +/- 100 мг от 5 до 10 г анализируемой пряности. Затем в стакан мерным цилиндром по 3.3.37 прибавляют дистиллированную воду из расчета не менее 12 см3 на 1 г пряности и перемешивают стеклянной палочкой. Затем содержимое стакана перемешивают на магнитной мешалке по 3.3.32 в течение 30 мин. В целях предотвращения образования устойчивых эмульсий следует избегать интенсивного перемешивания.
Полученную смесь переносят в центрифужные пробирки по 3.3.36, закрывают пробками, центрифугируют со скоростью не менее 4500 об/мин в течение 15 мин на центрифуге по 3.3.33. После окончания центрифугирования декантируют экстракт в коническую колбу по 3.3.11 вместимостью 250 см3. В центрифужные пробирки прибавляют дистиллированную воду из расчета 5 см3 на 1 г пряности, перемешивают стеклянной палочкой, закрывают пробками и центрифугируют со скоростью не менее 4500 об/мин в течение 15 мин. После окончания центрифугирования декантируют промывной раствор в коническую колбу с экстрактом. Для полного удаления взвешенных частиц водный экстракт пряности необходимо профильтровать через бумажный фильтр по 3.3.35, помещенный в стеклянную воронку по 3.3.34. Срок хранения водного экстракта пряности в колбе с притертой пробкой при температуре от 4 °C до 6 °C не более суток. Оставшийся после центрифугирования осадок пряности сохраняют для извлечения жирорастворимых синтетических красителей.
3.4.6.2 Подготовка патрона для предварительной очистки водного экстракта пряности от примесей
Медицинским шприцем по 3.3.5 набирают от 10 до 20 см3 дистиллированной воды, соединяют шприц с патроном для твердофазной экстракции по 3.3.2, заполненным оксидом алюминия по 3.3.27. Патрон промывают со скоростью от 20 до 30 капель дистиллированной воды в минуту. Объем пропускаемой через патрон дистиллированной воды должен быть не менее 25 см3. Затем патрон отсоединяют от шприца.
3.4.6.3 Предварительная очистка водного экстракта пряности от примесей
Мерным цилиндром отмеряют 40 см3 водного экстракта, полученного по 3.4.6.1, и наливают в стаканчик вместимостью 50 см3. Медицинским шприцем набирают 10 см3 водного экстракта пряности и соединяют шприц с патроном, подготовленным по 3.4.6.2. Необходимо использовать для каждых 10 см3 водного экстракта пряности один патрон. Пропускают водный экстракт пряности через патрон по одной капле со скоростью от 20 до 30 капель в минуту. После этого промывают каждый патрон 3 см3 дистиллированной воды по одной капле со скоростью от 20 до 30 капель в минуту. Собирают очищенный водный экстракт пряности и промывной раствор, прошедшие через патроны, в колбу вместимостью 250 см3.
3.4.6.4 Подготовка патрона для твердофазной экстракции синтетических красителей
Медицинским шприцем набирают от 10 до 20 см3 раствора ледяной уксусной кислоты массовой концентрации 10 г/дм3 по 3.3.22, соединяют шприц с патроном для твердофазной экстракции, заполненным оксидом алюминия по 3.3.28. Патрон промывают со скоростью от 10 до 20 капель раствором ледяной уксусной кислоты массовой концентрации 10 г/дм3 в минуту. Объем пропускаемого через патрон раствора ледяной уксусной кислоты массовой концентрации 10 г/дм3 должен быть не менее 25 см3. Затем патрон отсоединяют от шприца.
3.4.6.5 Сорбция синтетических красителей из очищенного водного экстракта пряности
В очищенный водный экстракт пряности, полученный по 3.4.6.3, вносят пипеткой по 3.3.8 0,5 см3 ледяной уксусной кислоты по 3.3.22 и перемешивают стеклянной палочкой. В случае помутнения водного экстракта пряности его необходимо центрифугировать со скоростью не менее 7500 об/мин в течение 15 мин. Медицинским шприцем набирают по 10 см3 водного экстракта пряности и соединяют шприц с патроном, подготовленным по 3.4.6.4. Пропускают водный экстракт пряности через патрон по одной капле со скоростью от 10 до 20 капель в минуту. По достижении уровня окрашенного слоя основания патрона водный экстракт пряности пропускают через второй патрон. При необходимости используют от одного до пяти патронов, подготовленных по 3.4.6.4. После этого промывают каждый патрон с сорбированным синтетическим красителем 25 см3 раствора ледяной уксусной кислоты массовой концентрации 10 г/дм3 и затем 3 см3 дистиллированной воды по одной капле со скоростью от 10 до 20 капель в минуту.
3.4.6.6 Десорбция синтетических красителей из патронов водным аммиаком
Медицинским шприцем набирают 10 см3 водного аммиака по 3.3.26 и соединяют шприц с патроном по 3.4.6.5. Пропускают водный аммиак через патрон по одной капле со скоростью от 10 до 20 капель в минуту. Элюат (раствор водного аммиака, пропущенный через патрон) собирают в выпарную чашку по 3.3.14 и выпаривают досуха на водяной бане с температурой от 80 °C до 90 °C. Сразу после испарения раствора аммиака чашку с сухим остатком охлаждают. Сухой остаток растворяют в чашке, добавляя пипеткой от 0,5 до 1,0 см3 дистиллированной воды.
3.4.7 Извлечение жирорастворимых синтетических красителей из анализируемой пряности
3.4.7.1 Приготовление спиртового экстракта пряности
Осадок анализируемой пряности, полученный по 3.4.6.1, количественно переносят из центрифужных пробирок в стакан вместимостью 200 см3, порциями приливая этиловый спирт из расчета 10 см3 на 1 г пряности. Затем содержимое стакана перемешивают на магнитной мешалке в течение 120 мин. В целях предотвращения образования устойчивых эмульсий следует избегать интенсивного перемешивания. Полученную смесь переносят в центрифужные пробирки, закрывают пробками, центрифугируют со скоростью не менее 6500 об/мин в течение 15 мин. После окончания центрифугирования декантируют раствор в коническую колбу вместимостью 250 см3. В центрифужные пробирки наливают этиловый спирт из расчета 5 см3 на 1 г пряности, перемешивают стеклянной палочкой, закрывают пробками и центрифугируют со скоростью не менее 6500 об/мин в течение 15 мин. После окончания центрифугирования декантируют промывной раствор в колбу со спиртовым экстрактом пряности.
3.4.7.2 Очистка спиртового экстракта пряности
В стакане вместимостью 200 см3 взвешивают на лабораторных весах с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания +/- 100 мг 4 г оксида алюминия по 3.3.27. Цилиндром отмеряют 40 см3 спиртового экстракта пряности, полученного по 3.4.7.1, наливают в стаканчик с оксидом алюминия и перемешивают стеклянной палочкой. Содержимое стакана перемешивают на магнитной мешалке в течение 30 мин. В целях предотвращения образования устойчивых эмульсий следует избегать интенсивного перемешивания.
Полученную смесь наливают в центрифужные пробирки, закрывают пробками, центрифугируют со скоростью не менее 4500 об/мин в течение 15 мин. После окончания центрифугирования декантируют спиртовой экстракт пряности в коническую колбу вместимостью 250 см3. В центрифужные пробирки наливают этиловый спирт из расчета 2,5 см3 на 1 г оксида алюминия, перемешивают стеклянной палочкой, закрывают пробками и центрифугируют со скоростью не менее 4500 об/мин в течение 15 мин. После окончания центрифугирования декантируют раствор в коническую колбу с очищенным спиртовым экстрактом пряности. Для полного удаления взвешенных частиц спиртовой экстракт пряности необходимо профильтровать через бумажный фильтр, помещенный в стеклянную воронку. Срок хранения спиртового экстракта пряности в колбе с притертой крышкой при температуре от 4 °C до 6 °C не более 48 ч.
3.4.7.3. Спиртовой экстракт, полученный по 3.4.7.2, наливают в выпарную чашку и выпаривают досуха на водяной бане с температурой от 80 °C до 90 °C. Сразу после испарения раствора этилового спирта чашку с сухим остатком охлаждают. Сухой остаток растворяют в чашке, добавляя пипеткой от 0,5 до 1,0 см3 раствора, приготовленного по 3.4.2. Количественно переносят раствор в стаканчик по 3.3.13 и закрывают крышкой.
3.4.8 Подготовка хроматографической камеры
В хроматографическую камеру по 3.3.4 вносят элюент 1, приготовленный по 3.4.3.1, в количестве, необходимом для погружения хроматографической пластины на глубину не более 0,5 см от нижнего края пластины. Камеру плотно закрывают и выдерживают в течение 1 ч.
3.4.9 Подготовка пластин для ТСХ анализа
На хроматографическую пластину по 3.3.3 карандашом наносят линию старта на расстоянии 1 см от края пластины и линию границы элюента на расстоянии 7 см от линии старта (параллельно рискам на обратной стороне пластины). На линию старта карандашом наносят точки с интервалом не менее 1 см.
3.5 Проведение анализа
3.5.1 Получение и обработка хроматографических карт КО
На пластину, подготовленную по 3.4.9, микрошприцем по 3.3.6 наносят на линию старта в несколько приемов с промежуточным подсушиванием на воздухе 0,5 мм3 каждого раствора КО, полученного по 3.4.4.2. После нанесения раствора пластину подсушивают в течение от 3 до 4 мин и затем пинцетом помещают в хроматографическую камеру, подготовленную по 3.4.8, под углом примерно 45°. Камеру плотно закрывают. Элюирование заканчивают при достижении элюентом 1 линии границы элюента. По окончании элюирования пластину вынимают пинцетом по 3.3.19 и подсушивают.
Аналогично получают хроматографические карты с использованием элюентов 2 и 3.
Аналогично получают хроматографические карты для КО, полученных по 3.4.4.3, с использованием элюентов 4, 5 и 6.
Линейкой по 3.3.20 измеряют расстояние от центра каждого пятна стандартного синтетического красителя и линии миграции элюента до линии старта.
Значение R_{f} стандартного синтетического красителя вычисляют по формуле
R_{f} = \frac{l_{k}}{l_{\text{э}}} ,(1)
где l_{k} — расстояние от центра пятна стандартного синтетического красителя до линии старта, см;
l_{\text{э}} — расстояние от линии миграции элюента до линии старта, см.
3.5.2 Обнаружение водорастворимых синтетических красителей
На хроматографическую пластину, подготовленную по 3.4.9, шириной 10 см микрошприцем наносят на линию старта в несколько приемов с промежуточным подсушиванием на воздухе от 0,3 до 1,0 мм3 раствора КО (или нескольких КО отдельно), приготовленных по 3.4.4.2, и от 0,5 до 3,0 мм3 раствора, полученного по 3.4.6.6. После нанесения растворов пластину подсушивают в течение от 3 до 4 мин и затем пинцетом помещают в хроматографическую камеру, подготовленную по 3.4.8, под углом примерно 45°. Камеру плотно закрывают. Элюирование заканчивают при достижении элюентом линии границы элюента 7,0 см от линии старта. По окончании элюирования хроматографическую пластину вынимают и подсушивают.
При отсутствии разделения пятен синтетических красителей на хроматограмме анализ повторяют, используя элюент 2 или элюент 3.
Если на полученных хроматограммах присутствует хотя бы одно окрашенное пятно выше линии старта, делают заключение о наличии водорастворимого синтетического красителя в анализируемой пряности.
Значение R\prime_{f} обнаруженного водорастворимого синтетического красителя рассчитывают по 3.5.4.
3.5.3 Обнаружение жирорастворимых синтетических красителей
На хроматографическую пластину, подготовленную по 3.4.9, шириной 10 см микрошприцем наносят на линию старта в несколько приемов с промежуточным подсушиванием на воздухе от 0,3 до 1,0 мм3 раствора КО (или нескольких КО отдельно), приготовленных по 3.4.4.3, и от 1,0 до 3,0 мм3 раствора, полученного по 3.4.7.3. Процесс хроматографирования жирорастворимых синтетических красителей проводят по 3.5.1 с использованием элюента 4 вместо элюента 1.
При отсутствии разделения пятен синтетических красителей на хроматограмме анализ повторяют, используя элюент 5 или 6.
Если на полученных хроматограммах присутствует хотя бы одно окрашенное пятно выше линии старта, делают заключение о наличии жирорастворимого синтетического красителя в анализируемой пряности.
Значение R\prime_{f} обнаруженного жирорастворимого синтетического красителя рассчитывают по 3.5.4.
3.5.4 Обработка хроматографических карт с обнаруженными синтетическими красителями
Линейкой по 3.3.20 измеряют расстояние от центра каждого пятна обнаруженного синтетического красителя и линии миграции элюента до линии старта.
Значение R\prime_{f} обнаруженного синтетического красителя вычисляют по формуле
R\prime_{f} = \frac{l_{a}}{l_{\text{э}}} ,(2)
где l_{a} — расстояние от центра пятна обнаруженного синтетического красителя до линии старта, см;
l_{\text{э}} — расстояние от линии миграции элюента до линии старта, см.
3.5.5 Идентификация водо- и жирорастворимых синтетических красителей
Визуально сравнивают цвет и положение пятен обнаруженных водо- и жирорастворимых синтетических красителей на пластинах по 3.5.2 и 3.5.3 с хроматографическими картами, полученными по 3.5.1.
При совпадении цвета и положения хотя бы одного из пятен обнаруженных красителей с одним из пятен КО идентифицируют обнаруженные водо- и жирорастворимые синтетические красители, сравнивая значения R\prime_{f} , рассчитанные по 3.5.4, со значениями R_{f} КО, приведенных в таблицах 1 и 2.