ГОСТ 30627.3-98. Межгосударственный стандарт. Продукты молочные для детского питания. Метод измерения массовой доли витамина E (токоферола)
(введен в действие Постановлением Госстандарта России от 28.04.1999 № 144)
Примечание
Документ включен в Перечень международных и региональных (межгосударственных) стандартов, а в случае их отсутствия — национальных (государственных) стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «О безопасности пищевой продукции» (ТР ТС 021/2011) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 24.12.2019 № 236). Документ включен в Перечень международных и региональных (межгосударственных) стандартов, а в случае их отсутствия — национальных (государственных) стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «О безопасности отдельных видов специализированной пищевой продукции, в том числе диетического лечебного и диетического профилактического питания» (ТР ТС 027/2012) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 16.10.2018 № 168). Документ включен в Перечень международных и региональных (межгосударственных) стандартов, а в случае их отсутствия — национальных (государственных) стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «Требования безопасности пищевых добавок, ароматизаторов и технологических вспомогательных средств» (ТР ТС 029/2012) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 07.02.2018 № 21). Документ включен в Перечень стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «О безопасности молока и молочной продукции» (ТР ТС 033/2013) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 26.05.2014 № 80). Документ включен в Перечень стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «О безопасности отдельных видов специализированной пищевой продукции, в том числе диетического лечебного и диетического профилактического питания» (ТР ТС 027/2012) и осуществления оценки (подтверждения) соответствия продукции (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 18.10.2012 № 191). Документ включен в Перечень стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента «О безопасности пищевой продукции» (ТР ТС 021/2011) и осуществления оценки (подтверждения) соответствия продукции (Решение Комиссии Таможенного союза от 09.12.2011 № 880). Документ включен в Перечень нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения (утв. Россельхознадзором 30.07.2009 № 02-03-48/563). Документ включен в Перечень национальных стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимых для применения и исполнения Федерального закона «Технический регламент на молоко и молочную продукцию» и осуществления оценки соответствия (Распоряжение Правительства РФ от 15.12.2008 № 1866-р). С 01.07.2003 до вступления в силу технических регламентов акты федеральных органов исполнительной власти в сфере технического регулирования носят рекомендательный характер и подлежат обязательному исполнению только в части, соответствующей целям, указанным в п. 1 ст. 46 Федерального закона от 27.12.2002 № 184-ФЗ. Документ введен в действие с 01.05.2000.
Введен в действие
Постановлением Государственного
комитета Российской Федерации
по стандартизации и метрологии
от 28 апреля 1999 г. № 144
ПРОДУКТЫ МОЛОЧНЫЕ ДЛЯ ДЕТСКОГО ПИТАНИЯ
МЕТОД ИЗМЕРЕНИЯ МАССОВОЙ ДОЛИ ВИТАМИНА E (ТОКОФЕРОЛА)
Infant milk products. Method for determination of mass part of vitamin E (Tocopheroli)
Предисловие
2. Принят Межгосударственным Советом по стандартизации, метрологии и сертификации (Протокол от 12 ноября 1998 г. № 14).
3. Постановлением Государственного комитета Российской Федерации по стандартизации и метрологии от 28 апреля 1999 г. № 144 межгосударственный стандарт ГОСТ 30627.3-98 введен в действие непосредственно в качестве государственного стандарта Российской Федерации с 1 мая 2000 г.
1. Область применения
Настоящий стандарт распространяется на молочные продукты для детского питания, обогащенные витамином E (токоферолом), и устанавливает колориметрический метод измерения массовой доли витамина E.
Метод основан на реакции восстановления токоферолами трехвалентного железа в двухвалентное с образованием окрашенного комплекса двухвалентного железа с ортофенантролином (батофенантролином или \alpha,\alpha - \text{дипиридилом} ).
2. Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 334-73 Бумага масштабно-координатная. Технические условия
ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Технические условия
ГОСТ 3145-84 Часы механические с сигнальным устройством. Общие технические условия
ГОСТ 4147-74 Железо (III) хлорид 6-водный. Технические условия
ГОСТ 4166-76 Натрий сернокислый. Технические условия
ГОСТ 4212-76 Реактивы. Приготовление растворов для колориметрического и нефелометрического анализа
ГОСТ 4919.1-77 Реактивы и особо чистые вещества. Методы приготовления растворов индикаторов
ГОСТ 4919.2-77 Реактивы и особо чистые вещества. Методы приготовления буферных растворов
ГОСТ 5962-67 Спирт этиловый ректификованный. Технические требования
ГОСТ 6552-80 Кислота ортофосфорная. Технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 8981-78 Эфиры этиловый и нормальный бутиловый уксусной кислоты технические. Технические условия
ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия
ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ 24104-88 Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия
ГОСТ 24363-80 Калия гидроокись. Технические условия
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовки проб к анализу
ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний
ГОСТ 29227-91 Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть I. Общие требования
3. Методы отбора проб
Отбор проб и подготовка их к измерению — по ГОСТ 26809.
4. Аппаратура, материалы и реактивы
Баня водяная с обогревом, позволяющая поддерживать температуру от 0 до 100 °C с погрешностью +/- 2 °C.
Бумага масштабно-координатная (миллиметровая) по ГОСТ 334.
Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.
Весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104.
Весы лабораторные общего назначения 4-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 500 г по ГОСТ 24104.
Воронки делительные номинальной вместимостью 250 см3 по ГОСТ 25336.
Воронки стеклянные типа В диаметром 56 мм по ГОСТ 25336.
Испаритель ротационный ИР-1М [1].
Колбы мерные исполнения 1 2-го класса точности номинальной вместимостью 50, 100 см3 по ГОСТ 1770.
Колбы типа К исполнения 1 номинальной вместимостью 100 см3 по ГОСТ 25336.
Пипетки исполнений 4, 6, 7 2-го класса точности номинальной вместимостью 1, 2, 5, 10, 25 см3 по ГОСТ 29227.
Пробирки стеклянные типа П4 номинальной вместимостью 10 и 20 см3 по ГОСТ 25336.
Секундомер 2-го класса [2].
Стакан исполнения 3 номинальной вместимостью 1000 см3 по ГОСТ 9147.
Термометр жидкостный (не ртутный) диапазоном измерения 0 — 100 °C ценой деления шкалы 1 °C по ГОСТ 28498.
Фотометр фотоэлектрический диапазоном измерения 220 — 1100 нм [3] или колориметр фотоэлектрический диапазоном измерения 200 — 2000 нм, диапазоном измерения коэффициента пропускания 100 — 1% [4].
Холодильник обратимый со шлифом и водяным охлаждением по ГОСТ 25336.
Цилиндры исполнения 1 вместимостью 25, 50 см3 по ГОСТ 1770.
Часы 2-го класса по ГОСТ 3145.
Шкаф сушильный лабораторный, обеспечивающий поддержание заданного температурного режима от 50 до 200 °C с погрешностью +/- 2 °C.
Эксикатор исполнения 2 по ГОСТ 25336.
Аскорбиновая кислота (витамин C) [5].
Батофенантролин \alpha,\alpha - \text{дипиридил} (4,4-дипиридил) [6].
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Железо треххлористое 6-водное, ч., по ГОСТ 4147.
Калия гидроокись, х.ч., по ГОСТ 24363.
Натрий сернокислый безводный, х.ч., по ГОСТ 4166.
Ортофенантролин [7].
Ортофосфорная кислота, ч., по ГОСТ 6552.
Спирт абсолютный [8].
Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962.
Токоферола ацетат (витамин E ацетат) [9] или масляный раствор массовой концентрации \alpha - \text{токоферола} ацетата 300 г/дм3 (с массовой долей \alpha - \text{токоферола} ацетата в масле 30%) [10].
Фенолфталеин, ч.д.а. [11].
Эфир петролейный [12], перегнанный при температуре (50 +/- 10) °C, не содержащий перекисей.
Эфир этиловый по ГОСТ 8981.
Допускается применение других средств измерения с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками не хуже, а также реактивов и материалов по качеству не ниже вышеуказанных.
Хранение растворов — по ГОСТ 4212.
Хранение реактивов и особо чистых веществ — по ГОСТ 4919.1 и ГОСТ 4919.2.
5. Условия выполнения измерения
Измерение должно проводиться при красном или затемненном свете в связи с разрушением витамина E под воздействием ультрафиолетовых лучей.
Работу с эфиром необходимо проводить в вытяжном шкафу и в хорошо вентилируемом помещении.
6. Подготовка к выполнению измерения
6.1 Приготовление спиртового раствора треххлористого железа массовой концентрации 2 мг/см3
(0,200 +/- 0,001) г треххлористого железа, взвешенного на весах 2-го класса точности, растворяют в 25 — 50 см3 абсолютного спирта в мерной колбе вместимостью 100 см3, доводят до метки тем же спиртом и перемешивают.
Раствор хранят в склянке из темного стекла при (6 +/- 2) °C.
6.2 Приготовление спиртового раствора треххлористого железа массовой концентрации 0,25 мг/см3
1,25 см3 раствора треххлористого железа массовой концентрации 2 мг/см3 смешивают с 8,75 см3 абсолютного спирта и тщательно перемешивают.
6.3 Приготовление раствора молярной концентрации c(H_{3}PO_{4}) = 0,03\text{моль}/\text{дм}^{3} в абсолютном спирте
(0,327 +/- 0,001) г ортофосфорной кислоты, взвешенной на весах 2-го класса точности, растворяют в 25 — 50 см3 абсолютного спирта в мерной колбе вместимостью 100 см3, доводят до метки тем же спиртом и перемешивают.
6.4 Приготовление спиртового раствора ортофенантролина или батофенантролина массовой концентрации 1 мг/см3
(0,100 +/- 0,001) г ортофенантролина, взвешенного на весах 2-го класса точности, растворяют в 25 — 50 см3 абсолютного спирта в мерной колбе вместимостью 100 см3, доводят до метки тем же спиртом и перемешивают.
6.5. Приготовление спиртового раствора \alpha,\alpha - \text{дипиридила} (4,4-дипиридила) массовой концентрации 5 мг/см3
(0,500 +/- 0,001) г \alpha,\alpha - \text{дипиридила} , взвешенного на весах 2-го класса точности, растворяют в 25 — 50 см3 абсолютного спирта в мерной колбе вместимостью 100 см3, доводят до метки тем же спиртом и перемешивают.
Спиртовые растворы ортофенантролина, батофенантролина и \alpha,\alpha - \text{дипиридила} хранят в склянке из темного стекла при (6 +/- 2) °C.
6.6 Приготовление спиртового раствора фенолфталеина массовой концентрации 10 мг/см3
(1,00 +/- 0,04) г фенолфталеина, взвешенного на весах 4-го класса точности, растворяют в 70 см3 этилового спирта в мерной колбе вместимостью 100 см3, добавляют 30 см3 дистиллированной воды и перемешивают.
6.7 Приготовление водного раствора гидроокиси калия массовой концентрации 0,5 г/см3
(125,0 +/- 0,1) г гидроокиси калия, взвешенной на весах 4-го класса точности, растворяют в 100 — 150 см3 дистиллированной воды в фарфоровом стакане, охлаждают до (20 +/- 5) °C, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 250 см3, доводят до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают.
6.8 Обезвоживание сернокислого натрия
Сернокислый натрий высушивают в сушильном шкафу при (150 +/- 10) °C 8 — 12 ч. Хранят в эксикаторе.
6.9 Приготовление стандартного раствора \alpha - \text{токоферола}
(0,040 +/- 0,001) г 100%-ного препарата витамина E, взвешенного на весах 2-го класса точности, растворяют в 50 см3 абсолютного спирта в мерной колбе вместимостью 100 см3 и доводят объем до метки этим же спиртом.
6.9.1 Гидролиз
В круглодонную колбу вместимостью 100 см3 вносят 5 см3 полученного по 6.9 стандартного раствора витамина, добавляют 15 см3 этилового спирта, (0,10 +/- 0,03) г аскорбиновой кислоты, взвешенной на весах 4-го класса точности, 1 см3 гидроокиси калия массовой концентрации 0,5 г/см3 и перемешивают. Колбу соединяют с обратным водяным холодильником и выдерживают в кипящей водяной бане (18 +/- 2) мин.
6.9.2 Экстракция
По окончании гидролиза содержимое колбы охлаждают до (20 +/- 5) °C и количественно переносят в делительную воронку. Колбу ополаскивают 50 см3 дистиллированной воды, воду сливают в ту же воронку.
Признаком полного омыления служит то, что при добавлении воды к смеси муть не образуется. При образовании мути гидролиз повторяют, увеличивая при этом объем щелочи до 2 см3 или время гидролиза до (30 +/- 2) мин.
Неомыляемые вещества экстрагируют диэтиловым или петролейным эфиром три раза по 25 см3. После чего нижний (водный) слой отбрасывают.
6.9.3 Промывка
Объединенный эфирный экстракт (верхний слой) переносят в делительную воронку и отмывают от щелочи до нейтральной реакции по фенолфталеину, расходуя при этом 50 — 60 см3 дистиллированной воды.
Промытую эфирную вытяжку фильтруют в сухую круглодонную колбу со шлифом через слой безводного сернокислого натрия (20 — 30 г), не допуская заполнения воронки выше уровня этого слоя. По окончании фильтрования фильтр промывают эфиром объемом не менее 15 см3.
6.9.4 Отгонка растворителя
Колбу с фильтратом подсоединяют к роторному испарителю и отгоняют эфир под вакуумом при температуре водяной бани не более 30 °C для диэтилового эфира и не более 50 °C — для петролейного эфира.
Неомыляемый остаток растворяют в абсолютном спирте и доводят объем до 100 см3 этим же спиртом.
Если используют препарат витамина E другой концентрации, то навеску рассчитывают так, чтобы конечная концентрация стандартного раствора (после гидролиза) составляла не менее 20 мкг/см3.
6.9.5 Проверка концентрации стандартного раствора \alpha - \text{токоферола}
В полученном растворе определяют массовую концентрацию \alpha - \text{токоферола} , измеряя оптическую плотность спиртового раствора при длине волны 292 нм.
Массовую концентрацию \alpha - \text{токоферола} \rho_{E} , мкг/см3, вычисляют по формуле
где D — оптическая плотность испытуемого раствора при длине волны 292 нм против абсолютного спирта;
10000 — масса \alpha - \text{токоферола} в 1 см3 1%-ного раствора, мкг;
E — удельный показатель поглощения при длине волны 292 нм для 1%-ного раствора \alpha - \text{токоферола} в абсолютном спирте, равен 74,7.
6.9.6 Построение калибровочного графика
В пять пробирок вносят по 0,25; 0,5; 0,75; 1,0 см3 полученного стандартного раствора и доводят объем в каждой пробирке абсолютным спиртом до 5 см3. В шестую пробирку вносят 5,0 см3 абсолютного спирта (холостая проба). Затем во все пробирки приливают по 0,5 см3 раствора ортофенантролина или батофенантролина массовой концентрации 1 мг/см3, или \alpha,\alpha - \text{дипиридила} массовой концентрации 5 мг/см3, добавляют 0,5 см3 раствора треххлористого железа массовой концентрации 0,25 мг/см3, перемешивают и не более чем через 20 с добавляют 0,5 см3 раствора ортофосфорной кислоты молярной концентрации c(H_{3}PO_{4}) = 0,03\text{моль}/\text{дм}^{3} и снова перемешивают. Реакцию проводят с каждой пробиркой отдельно.
Определяют оптическую плотность на колориметре или фотометре при длине волны 490 нм, устанавливая в параллельный световой поток кювету, наполненную абсолютным спиртом.
Для построения калибровочного графика по оси абсцисс откладывают массу \alpha - \text{токоферола} от 5 до 20 мкг, а по оси ординат — разность показаний прибора между испытуемым раствором и холостой пробой.
Построение калибровочного графика повторяют при смене прибора или одного из реактивов, необходимых для проведения реакции.
6.10 Щелочной гидролиз продукта
Для жидких и пастообразных продуктов отобранную для анализа пробу прогревают при 37 °C 20 — 30 мин и перемешивают для равномерного распределения жира в продукте.
Навеску сухого продукта на гидролиз берут с учетом массовой доли витамина E в продукте.
Массовая доля витамина E, \text{млн}^{- 1} Навеска сухого продукта, г
8,5 - 15 10,0 +/- 0,4 15 - 45 5,0 +/- 0,4 45 - 120 2,0 +/- 0,4
Навеска жидкого и пастообразного продукта — (15 +/- 0,01) г.
Навеску помещают в круглодонную колбу роторного испарителя вместимостью 100 см3. К навеске для сухого продукта добавляют (9 +/- 1) см3 дистиллированной воды и перемешивают до полного растворения. В круглодонную колбу ротационного испарителя к навеске продукта добавляют 100 — 150 мг аскорбиновой кислоты, взвешенной на весах 4-го класса точности, приливают 40 см3 этилового спирта и, перемешивая, вносят 5 — 7 см3 раствора гидроокиси калия массовой концентрации 0,5 г/см3.
Колбу соединяют с обратным холодильником и выдерживают при температуре кипения смеси на водяной бане в течение (30 +/- 1) мин.
6.11 Экстракция
Экстракцию и последующие операции проводят в соответствии с 6.9.2 - 6.9.4.
Эфирный экстракт помещают в круглодонную колбу вместимостью 250 см3. Эфир выпаривают на ротационном испарителе согласно 6.9.4, а сухой остаток немедленно растворяют в 15 см3 абсолютного спирта.
7. Проведение измерения
Оптическую плотность измеряют на колориметре или фотометре при длине волны 490 нм, устанавливая в параллельный световой поток кювету, наполненную абсолютным спиртом.
1,0 — 5,0 см3 полученного раствора (в зависимости от массовой доли витамина E в продукте) помещают в пробирку, доводят объем раствора до 5 см3 абсолютным спиртом и перемешивают. Затем проводят реакцию согласно 6.9.6. Проводят параллельные измерения в двух пробирках и берут средний результат. В третьей пробирке готовят холостую пробу согласно 6.9.6.
8. Обработка результатов
Массовую долю витамина E (токоферола) X, \text{млн}^{- 1} , вычисляют по формуле
X = \frac{mV_{1}}{V_{2}m_{1}} , (2)
где m — масса витамина E в анализируемом растворе продукта, установленная по калибровочному графику (по разнице показаний оптической плотности между анализируемым раствором и холостой пробой), мкг;
V_{1} — общий объем анализируемого раствора в абсолютном спирте после экстракции, см3;
За окончательный результат измерения принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных измерений. Вычисления проводят до второго десятичного знака и округляют до первого десятичного знака.
Относительная погрешность измерения массовой доли витамина E — +/- 20% при доверительной вероятности P = 0,95.
Расхождение между результатами двух параллельных измерений не должно превышать 15% среднего арифметического значения результатов измерений.
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать 20% среднего арифметического значения результатов измерений.
(информационное)