ГОСТ 30627.1-98. Межгосударственный стандарт. Продукты молочные для детского питания. Метод измерения массовой доли витамина A (ретинола)
(введен в действие Постановлением Госстандарта России от 28.04.1999 № 142)
Примечание
Документ включен в Перечень международных и региональных (межгосударственных) стандартов, а в случае их отсутствия — национальных (государственных) стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «О безопасности пищевой продукции» (ТР ТС 021/2011) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 24.12.2019 № 236). Документ включен в Перечень международных и региональных (межгосударственных) стандартов, а в случае их отсутствия — национальных (государственных) стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «О безопасности отдельных видов специализированной пищевой продукции, в том числе диетического лечебного и диетического профилактического питания» (ТР ТС 027/2012) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 16.10.2018 № 168). Документ включен в Перечень стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «О безопасности молока и молочной продукции» (ТР ТС 033/2013) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 26.05.2014 № 80). Документ включен в Перечень стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента «О безопасности пищевой продукции» (ТР ТС 021/2011) и осуществления оценки (подтверждения) соответствия продукции (Решение Комиссии Таможенного союза от 09.12.2011 № 880). Документ включен в Перечень нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения (утв. Россельхознадзором 30.07.2009 № 02-03-48/563). Документ включен в Перечень национальных стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимых для применения и исполнения Федерального закона «Технический регламент на молоко и молочную продукцию» и осуществления оценки соответствия (Распоряжение Правительства РФ от 15.12.2008 № 1866-р). С 01.07.2003 до вступления в силу технических регламентов акты федеральных органов исполнительной власти в сфере технического регулирования носят рекомендательный характер и подлежат обязательному исполнению только в части, соответствующей целям, указанным в п. 1 ст. 46 Федерального закона от 27.12.2002 № 184-ФЗ. Документ введен в действие с 01.05.2000.
Введен в действие
Постановлением Государственного
комитета Российской Федерации
по стандартизации и метрологии
от 28 апреля 1999 г. № 142
ПРОДУКТЫ МОЛОЧНЫЕ ДЛЯ ДЕТСКОГО ПИТАНИЯ
МЕТОД ИЗМЕРЕНИЯ МАССОВОЙ ДОЛИ ВИТАМИНА A (РЕТИНОЛА)
Infant milk products. Method for determination of mass part of vitamin A (Retinoli)
Предисловие
2. Принят Межгосударственным Советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 12 ноября 1998 г. № 14).
3. Постановлением Государственного комитета Российской Федерации по стандартизации и метрологии от 28 апреля 1999 г. № 142 межгосударственный стандарт ГОСТ 30627.1-98 введен в действие непосредственно в качестве государственного стандарта Российской Федерации с 1 мая 2000 г.
1. Область применения
Настоящий стандарт распространяется на молочные продукты для детского питания и устанавливает колориметрический метод измерения массовой доли витамина A (ретинола).
Метод основан на реакции витамина A, выделенного из продукта при щелочном гидролизе, с треххлористой сурьмой (реакция Карра-Прайса) и колориметрическом измерении интенсивности окрашивания образовавшегося соединения.
2. Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 334-73 Бумага масштабно-координатная. Технические условия
ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Технические условия
ГОСТ 3145-84 Часы механические с сигнальным устройством. Общие технические условия
ГОСТ 4166-76 Натрий сернокислый. Технические условия
ГОСТ 4212-76 Реактивы. Приготовление растворов для колориметрического и нефелометрического анализа
ГОСТ 4919.1-77 Реактивы и особо чистые вещества. Методы приготовления растворов индикаторов
ГОСТ 4919.2-77 Реактивы и особо чистые вещества. Методы приготовления буферных растворов
ГОСТ 5815-77 Ангидрид уксусный. Технические условия
ГОСТ 5845-79 Калий-натрий виннокислый 4-водный. Технические условия
ГОСТ 5962-67 Спирт этиловый ректификованный. Технические условия
ГОСТ 8981-78 Эфиры этиловый и нормальный бутиловый уксусной кислоты технические. Технические условия
ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия
ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ 20015-88 Хлороформ. Технические условия
ГОСТ 24104-88 Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия
ГОСТ 24363-80 Калия гидроокись. Технические условия
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовки проб к анализу
ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний
ГОСТ 29227-91 Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть I. Общие требования.
3. Методы отбора проб
Отбор проб и подготовка их к измерению — по ГОСТ 26809.
4. Аппаратура, материалы и реактивы
Баня водяная с обогревом, позволяющая поддерживать температуру от 0 до 100 °C с погрешностью +/- 2 °C.
Бумага масштабно-координатная (миллиметровая) по ГОСТ 334.
Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.
Весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104.
Весы лабораторные общего назначения 4-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 500 г по ГОСТ 24104.
Воронки стеклянные лабораторные типа В по ГОСТ 25336.
Воронки делительные номинальной вместимостью 250, 500 см3 по ГОСТ 25336.
Испаритель ротационный [1].
Колбы типа К исполнения 1 номинальной вместимостью 100, 250, 500 и 1000 см3 по ГОСТ 25336.
Колбы мерные исполнения 1 2-го класса точности номинальной вместимостью 100, 200, 250, 500 см3 по ГОСТ 1770.
Колориметр фотоэлектрический диапазоном измерения от 200 до 2000 нм, диапазоном измерения коэффициента пропускания от 100 до 1% [2].
Пипетки исполнений 4, 6, 7 2-го класса точности номинальной вместимостью 1, 5, 10 см3 по ГОСТ 29227.
Стакан фарфоровый номинальной вместимостью 500 см3 по ГОСТ 9147.
Секундомер [3].
Термометр жидкостный (нертутный) диапазоном измерения от 0 до 100 °C с ценой деления шкалы 1 °C по ГОСТ 28498.
Холодильник обратимый со шлифами и водяным охлаждением по ГОСТ 25336.
Фотометр фотоэлектрический диапазоном измерения от 220 до 1100 нм, диапазоном измерения коэффициента пропускания от 100 до 1% [4].
Цилиндры исполнения 1 вместимостью 50, 100, 250, 500 см3 по ГОСТ 1770.
Часы 2-го класса по ГОСТ 3145.
Шкаф сушильный лабораторный, обеспечивающий поддержание заданного температурного режима от 50 до 200 °C с погрешностью +/- 2 °C.
Эксикатор исполнения 2 по ГОСТ 25336.
Ангидрид уксусный, ч.д.а., по ГОСТ 5815.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Калий-натрий виннокислый, ч.д.а., по ГОСТ 5845.
Калия гидроокись, х.ч., по ГОСТ 24363.
Кислота аскорбиновая (витамин C) [5].
Натрий сернокислый безводный, х.ч., по ГОСТ 4166.
Ретинола пальмитат (витамина A пальмитат) [6] или масляный раствор массовой концентрации ретинола пальмитата 550 г/дм3 (55%-ный раствор пальмитата в масле) [7], или ретинола ацетата (витамин A ацетат) [8], или масляный раствор массовой концентрации ретинола ацетата 34,4; 68,8; 86,0 г/дм3 (3,44; 6,88 или 8,60% раствор ретинола ацетата в масле) [9].
Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962.
Сурьма треххлористая, х.ч. [10].
Хлороформ, х.ч., по ГОСТ 20015.
Фенолфталеин, ч.д.а. [11].
Циклогексан [12].
Эфир петролейный, перегнанный при (50 +/- 10) °C, не содержащий перекисей [13].
Эфир этиловый по ГОСТ 8981.
Допускается применение других средств измерения с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками не хуже, а также реактивов и материалов по качеству не ниже вышеуказанных.
Хранение растворов — по ГОСТ 4212.
Хранение реактивов и особо чистых веществ — по ГОСТ 4919.1 и ГОСТ 4919.2.
5. Условия выполнения измерения
Измерение должно проводиться при красном или затемненном свете в помещении в связи с разрушением витамина A под воздействием ультрафиолетовых лучей.
Треххлористая сурьма при попадании на кожу вызывает ожоги. Место поражения промывают ацетоном, затем водой.
Работу с хлороформом, уксусным ангидридом, диэтиловым и петролейным эфирами необходимо проводить в вытяжном шкафу и в хорошо вентилируемом помещении.
Посуду после раствора треххлористой сурьмы и кюветы после измерений нужно промывать водным раствором калия-натрия виннокислого массовой концентрации 0,1 г/см3.
6. Подготовка к выполнению измерения
6.1 Приготовление раствора треххлористой сурьмы (реактив Карра-Прайса)
Взвешивают (60,0 +/- 0,4) г треххлористой сурьмы на весах 4-го класса точности в конической колбе вместимостью 500 см3, в которую предварительно отмерено 300 см3 хлороформа, и растворяют при подогревании на водяной бане (40 +/- 2) °C, периодически встряхивая. Раствор охлаждают до (20 +/- 5) °C, добавляют 6 — 9 см3 уксусного ангидрида, колбу закрывают и оставляют на 14 — 18 ч для отстаивания. Полученный прозрачный раствор осторожно сливают в колбу из темного стекла с плотно закрывающейся пробкой. Срок хранения реактива — не более 40 сут при (20 +/- 5) °C.
6.2 Приготовление водного раствора гидроокиси калия массовой концентрации 0,5 г/см3
Взвешивают (125,0 +/- 0,4) г гидроокиси калия на весах 4-го класса точности, растворяют в 100 — 150 см3 дистиллированной воды в фарфоровом стакане, охлаждают до (20 +/- 5) °C, фильтруют в мерную колбу вместимостью 250 см3, доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.
6.3 Приготовление спиртового раствора фенолфталеина массовой концентрации 10 мг/см3
(1,00 +/- 0,01) г фенолфталеина, взвешенного на весах 4-го класса точности, растворяют в 70 см3 этилового спирта в мерной колбе вместимостью 100 см3, добавляют 30 см3 дистиллированной воды и перемешивают.
6.4 Обезвоживание сернокислого натрия
Сернокислый натрий высушивают в сушильном шкафу при (150 +/- 10) °C 8 — 12 ч. Хранят в эксикаторе.
6.5 Приготовление раствора калия-натрия виннокислого массовой концентрации 0,1 г/см3
(10,0 +/- 0,4) г калия-натрия виннокислого (сегнетова соль), взвешенного на весах 4-го класса точности, растворяют в 40 — 60 см3 дистиллированной воды в мерной колбе вместимостью 100 см3, доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.
6.6 Проверка препарата витамина A
Взвешивают (0,100 +/- 0,002) г препарата на весах 2-го класса точности, растворяют в абсолютном спирте в мерной колбе вместимостью 100 см3, доводят объем раствора до метки тем же спиртом и перемешивают. Отбирают 2 см3 полученного раствора при использовании раствора массовой концентрации ретинола ацетата в масле 86,0 г/дм3, 2,5 см3 — при использовании раствора массовой концентрации ретинола ацетата в масле 68,8 г/дм3, 5 см3 — при использовании раствора массовой концентрации ретинола ацетата в масле 34,4 г/дм3, 0,3 см3 — при использовании раствора массовой концентрации ретинола пальмитата в масле 550 г/дм3 и разводят в мерной колбе вместимостью 50 см3, доводят до метки тем же спиртом, получая конечный раствор массовой концентрации ретинола ацетата или ретинола пальмитата 3 мкг/см3 (8 — 10 МЕ/см3).
Измеряют оптическую плотность полученного раствора на фотометре при длине волны 326 нм в кювете с толщиной слоя 1 см3.
В качестве контрольного раствора применяют абсолютный спирт.
Массовую долю витамина A (ретинола ацетата или ретинола пальмитата) в препарате m, \text{млн}^{- 1} , вычисляют по формуле
m = \frac{0,01DV_{1}100}{m_{1}EV} , (1)
где 0,01 — массовая концентрация витамина A для 1%-ного раствора ретинола ацетата или ретинола пальмитата в абсолютном спирте, г/см3;
D — оптическая плотность анализируемого раствора;
V_{1} — объем раствора второго разведения, см3;
100 — объем раствора первого разведения, взятый для приготовления раствора второго разведения, см3;
m_{1} — масса навески препарата, г;
E — удельный показатель поглощения при длине волны 326 нм, который для 100%-ного раствора ретинола ацетата в абсолютном спирте равен 1550, а для 100%-ного раствора ретинола пальмината в абсолютном спирте равен 975.
V — объем раствора, взятый для второго разведения, см3.
Вычисления проводят до второго десятичного знака и округляют результат до первого десятичного знака.
Примечание. Определение может быть проведено с использованием циклогексана вместо абсолютного спирта. В этом случае готовят раствор препарата в циклогексане массовой концентрации ретинола ацетата 3 мкг/см3 и измеряют оптическую плотность этого раствора при длине волны 327,5 нм. В данном случае E = 1515.
6.7 Построение калибровочного графика
Взвешивают (0,100 +/- 0,002) г препарата витамина A — ацетата или пальмитата на весах 2-го класса точности в мерной колбе вместимостью 100 см3, растворяют в хлороформе, доводят хлороформом до метки и перемешивают.
Массовую концентрацию витамина A в растворе X_{1} , X_{2} , ME/см3, вычисляют по формулам:
X_{2} = \frac{mm_{1}1807000}{100} (для ретинол пальмитата), (3)
где m — массовая доля витамина A (ретинол ацетата или ретинол пальмитата) в препарате, %;
m_{1} — масса навески препарата, г;
2907000 — активность 1 г витамина A (ретинол ацетата) с массовой долей 100% в абсолютном спирте, ME;
1807000 — активность 1 г витамина A (ретинол пальмитата) с массовой долей 100% в абсолютном спирте, ME;
100 — объем хлороформенного раствора препарата витамина A, см3.
Вычисления проводят до второго десятичного знака и округляют результат до первого десятичного знака.
Для построения калибровочного графика из полученного раствора витамина A рассчитанной массовой концентрации последовательно готовят разведения массовой концентрации 5 — 20 ME/см3 с интервалом в 5 ME/см3.
Из каждого разведения отбирают пипеткой номинальной вместимостью 1,0 см3 по 0,4 см3 раствора, вносят в кювету толщиной слоя 1 см, помещают кювету в кюветодержатель фотометра или колориметра, добавляют 4 см3 раствора треххлористой сурьмы и быстро (не более 5 с) измеряют оптическую плотность при длине волны 620 нм (красный светофильтр), устанавливая в параллельный световой поток такую же кювету, наполненную хлороформом.
Для построения калибровочного графика по оси ординат откладывают полученные значения оптической плотности, а по оси абсцисс — соответствующие им массовые концентрации витамина A в ME/см3. Длина осей графика должна быть не менее 200 мм. При смене раствора треххлористой сурьмы построение калибровочного графика повторяют, используя при этом свежеприготовленный раствор витамина A в хлороформе.
6.8 Щелочной гидролиз продукта (омыление)
Отобранную для анализа пробу жидких продуктов прогревают при (37 +/- 1) °C 30 — 40 мин и перемешивают для равномерного распределения жира в продукте.
Навеску сухого продукта на гидролиз берут с учетом массовой доли витамина A в продукте.
Массовая доля витамина A, \text{млн}^{- 1} Навеска сухого продукта, г
0,5 - 1,5 6,00 +/- 0,01 1,5 - 3,0 4,00 +/- 0,01 3,0 - 5,0 3,00 +/- 0,01
Навеска жидкого продукта — (15,00 +/- 0,01) г.
Навеску продукта помещают в круглодонную колбу вместимостью 250 см3, добавляют 20 см3 дистиллированной воды (для сухих продуктов), перемешивают встряхиванием до полного растворения, добавляют (0,10 +/- 0,03) г аскорбиновой кислоты, взвешенной на весах 4-го класса точности, приливают 40 см3 этилового ректификованного спирта и, перемешивая, вносят 5,0 — 7,0 см3 водного раствора массовой концентрации гидроокиси калия 0,5 г/см3.
Колбу соединяют с водяным обратным холодильником и выдерживают в кипящей водяной бане (30 +/- 2) мин.
6.9 Экстракция
По окончании омыления содержимое колбы охлаждают до (20 +/- 5) °C и количественно переносят в делительную воронку вместимостью 500 см3. Колбу ополаскивают 50 см3 дистиллированной воды, воду сливают в ту же делительную воронку.
Признаком полного омыления служит то, что при добавлении воды к смеси муть не образуется. При образовании мути процесс омыления повторяют, при этом увеличивают объем щелочи до 10 см3 и время омыления до (35 +/- 2) мин.
Неомыляемые вещества экстрагируют петролейным или диэтиловым эфиром три раза по 50 см3. После чего нижний (водный) слой отбрасывают.
6.10 Промывка
Объединенный эфирный экстракт переносят в делительную воронку вместимостью 500 см3 и отмывают от щелочи до нейтральной реакции по фенолфталеину, расходуя при этом 500 — 700 см3 дистиллированной воды.
Промытую эфирную вытяжку фильтруют в сухую круглодонную колбу со шлифом через слой безводного сернокислого натрия (20 — 30 г), не допуская заполнения воронки выше уровня этого слоя. Фильтр промывают эфиром объемом не менее 15 см3.
6.11 Отгонка растворителя
Эфир отгоняют на ротационном испарителе под вакуумом при температуре водяной бани (не более 30 °C — для диэтилового эфира и не более 50 °C — для петролейного эфира).
Неомыляемый остаток на стенках колбы немедленно растворяют в хлороформе. При расчетной массовой доле витамина A в продукте 0,5 - 1,5\text{млн}^{- 1} остаток растворяют в 2 см3 хлороформа, 1,5 - 5\text{млн}^{- 1} — в 3 см3 хлороформа. Закрыв колбу пробкой, смывают осадок со стенок колбы.
7. Проведение измерения
Измерение проводят при длине волны 620 нм (красный светофильтр), используя в качестве контрольного раствора хлороформ.
Пипеткой вместимостью 1 см3 вносят 0,4 см3 хлороформенного раствора испытуемой пробы в кювету толщиной слоя 1 см3, помещают кювету в кюветодержатель фотометра, добавляют 4,0 см3 раствора треххлористой сурьмы и быстро (не более 5 с) измеряют оптическую плотность. При наличии витамина проба окрашивается в голубой цвет. Окраска быстро исчезает, и раствор становится прозрачным.
Помутнение раствора свидетельствует о попадании воды с испытуемым раствором или с раствором сурьмы. В этом случае следует проверить раствор треххлористой сурьмы и при необходимости приготовить свежий. Анализ повторить.
8. Обработка результатов измерения
где C — активность витамина A анализируемого раствора продукта, установленная по калибровочному графику, ME/см3;
m — масса навески продукта, г,
За окончательный результат измерения принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных измерений. Вычисления проводят до второго десятичного знака и округляют до первого десятичного знака.
Относительная погрешность измерения массовой доли витамина A — +/- 20% при доверительной вероятности P = 0,95.
Расхождение между результатами двух параллельных измерений не должно превышать 10% среднего арифметического значения результатов измерений.
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать 20% среднего арифметического значения результатов измерений.