ФС.3.3.1.0054.18. Фармакопейная статья. Вакцина E сыпнотифозная комбинированная живая, лиофилизат для приготовления суспензии для подкожного введения
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 № 749)
(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том IV»)
Примечание
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/femb/pharmacopea.php по состоянию на 15.01.2019. В соответствии с Приказом Минздрава России от 31.10.2018 № 749 данный документ введен в действие с 01.12.2018. Взамен ФС 42-3674-98.
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
| Вакцина E сыпнотифозная комбинированная живая, лиофилизат для приготовления суспензии для подкожного введения | ФС.3.3.1.0054.18 |
| Взамен ФС 42-3674-98 |
Настоящая фармакопейная статья распространяется на вакцину Е сыпнотифозную комбинированную живую (ЖКСВ-Е), лиофилизат для приготовления суспензии для подкожного введения, которая представляет собой взвесь живых риккетсий Провачека (Rickettsia prowazekii) аттенуированного (вакцинного) штамма E (Мадрид-E), выращенных в ткани желточных мешков развивающихся куриных эмбрионов, в комбинации с растворимым антигеном из инактивированных риккетсий Провачека (R. prowazekii) вирулентного штамма Брейнль, лиофилизированную в стерильном обезжиренном коровьем молоке.
Вакцина предназначена для специфической профилактики сыпного тифа.
В состав препарата входит вспомогательное вещество.
Производство вакцины ЖКСВ-Е должно осуществляться с соблюдением надлежащих требований к организации производства и контролю качества лекарственных препаратов, гарантирующих качество и безопасность для человека в соответствии с ОФС «Вакцины и анатоксины».
Производственные штаммы должны быть аттестованы и депонированы в официальной коллекции микроорганизмов.
Качество производственных штаммов и периодичность контроля должны быть указаны в нормативной документации.
Описание. Пористая масса в виде таблетки от светло-желтого до темно-коричневого цвета. Определение проводят визуально.
Восстановленный препарат представляет собой гомогенную суспензию светло-желтого цвета. Определение проводят визуально.
Подлинность. Должен обладать антигенной активностью, иммуногенностью и минимальной инфицирующей дозой для РКЭ (МИДэ). Определение проводят по разделу «Специфическая активность».
Время восстановления препарата. Не более 2 мин при добавлении в ампулу 5 мл прилагаемого растворителя (стерильного 0,9% раствора натрия хлорида) Испытания проводят в соответствии с ОФС «Иммунобиологические лекарственные препараты».
Седиментационная устойчивость. Суспензия не должна расслаиваться в течение не менее 5 мин. Определение проводят в соответствии с ОФС «Суспензии».
Проходимость через иглу. Восстановленный препарат должен свободно проходить в шприц через иглу 0,8·40. Определение проводят в соответствии с ОФС «Суспензии».
pH. От 5,0 до 7,0. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС «Ионометрия».
Потеря в массе при высушивании. Не более 3,0%. Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение потери в массе при высушивании».
Стерильность. Должен быть стерильным. Определение проводят в соответствии с ОФС «Стерильность».
Аномальная токсичность. Должен быть нетоксичным. Определение проводят в соответствии с ОФС «Аномальная токсичность Содержимое 1 ампулы растворяют в 5 мл прилагаемого растворителя и вводят по 0,25 мл белым мышам массой 17 — 20 г. внутрибрюшинно, морским свинкам массой 250 — 350 г. — подкожно. Период наблюдения за животными составляет 7 сут.»
Специфическая безопасность. Должен быть безопасным. Определение проводят биологическим методом на 20 морских свинках-самцах массой тела 300 — 350 г, температура тела которых, определенная ректально, в течение предшествующих 3 сут до иммунизации не превышала 39,5 °C.
Для иммунизации используют 24 — 26 образцов (ампул) вакцины. Содержимое каждой ампулы восстанавливают в первоначальном объеме (0,5 мл) стерильной 20% МБС. Восстановленная вакцина содержит живой компонент риккетсий Провачека штамм E (Мадрид-E) в разведении 10-2. Далее готовят десятикратное разведение вакцины 10-3, для чего 1 мл вакцины в разведении 10-2 вносят в 9 мл стерильной 20% МБС. Каждую дозу вакцины (в разведении 10-2 и 10-3) вводят внутрибрюшинно 10 морским свинкам в объеме 1 мл. Наблюдение за вакцинированными животными (температурная реакция, скротальный феномен) проводят в течение 15 сут после вакцинации; лихорадочная реакция считается специфической с 4 сут после вакцинации. Вакцина не должна вызывать циклически протекающую лихорадочную реакцию (повышение ректальной температуры выше 39,5 °C) и орхит (опухание, напряженность и болезненность тестикул) или гибель животных. Допускается одно-двухдневный нерегулярный подъем температуры выше 39,5 °C без развития орхита у 1 — 2 животных из каждой группы. Допускается гибель от неспецифических причин 1 — 2 животных в каждой группе.
После завершения испытания вакцины по специфической безопасности проводят забор крови у морских свинок для испытания вакцины по показателю «Специфическая активность. 1. Антигенная активность».
Далее группу иммунизированных и контрольных животных используют для испытания вакцины по показателю «Специфическая активность. 2. Иммуногенность».
Специфическая активность. Должен обладать антигенной активностью, иммуногенностью, МИДэ в одной прививочной дозе должна составлять от 1000 до 100000. Определение проводят тремя методами.
1. Антигенную активность определяют по титру комплементсвязывающих антител (КС-антител) со стандартным образцом (СО) специфичного диагностикума риккетсиозного Провачека сухого для РСК в сыворотках крови морских свинок, иммунизированных вакциной в разведении 10-2, должен быть 1:20 — 1:160, в разведении 10-3 — 1:10 — 1:80. Титр КС-антител со СО гомологичного диагностикума риккетсиозного R. typhi сухого для РСК должен быть на 1 — 2 разведения ниже, чем со СО специфичного диагностикума риккетсиозного Провачека. Не должно быть задержки гемолиза со СО гетерологичного диагностикума риккетсиозного Сибирика сухого для РСК или СО диагностикума коксиеллезного Бернета сухого для РСК. Определение проводят серологическим методом в реакции связывания комплемента (РСК) по уровню специфических КС-антител в сыворотках крови морских свинок, взятых на 19 — 21 сут после вакцинации, после завершения испытания по специфической безопасности вакцины. Методика определения должна быть указана в нормативной документации.
2. Иммуногенность. Не менее чем у 80% морских свинок, иммунизированных вакциной в разведении 10-2, должен развиться полный иммунитет, у остальных животных — частичный иммунитет.
Не менее чем у 50% морских свинок, иммунизированных вакциной в разведении 10-3, должен развиться полный иммунитет, не более чем у 20% может наблюдаться его отсутствие, у остальных — частичный иммунитет.
Определение проводят биологическим методом на группе морских свинок, ранее иммунизированных вакциной в разведении 10-2 и 10-3, после завершения испытаний специфической безопасности вакцины и последующего взятия крови на определение специфических антител.
Через 29 — 31 сут после вакцинации всем иммунизированным свинкам вводят внутрибрюшинно по 1 мл взвеси вирулентной культуры риккетсий штамма Брейнль, содержащей не менее 10000 доз возбудителя, что соответствует разведению 10-3 при инфицирующей дозе (ИД) культуры для морских свинок 10-7. Для контроля такой же дозой вирулентной культуры одновременно заражают трех интактных морских свинок-самцов тем же способом. Для подтверждения правильности использования величины ИД заражают еще по 3 интактных животных культурой штамма Брейнль в разведениях 10-6 и 10-7 соответственно. Всего для контроля достоверности используют 9 животных, температура тела которых, в течение предшествующих 3 сут до заражения не превышала 39,5 °C.
Учет результатов проводят на основании ежедневных наблюдений в течение 21 сут за температурной реакцией и развитием скротального феномена у вакцинированных и контрольных животных.
Не менее чем у 80% морских свинок, иммунизированных вакциной в разведении 10-2, должен развиться полный иммунитет (отсутствие лихорадочной реакции и скротального феномена), у остальных животных — частичный иммунитет (укороченный лихорадочный период — не более 3 сут, и быстро проходящий за 1 — 2 сут скротальный феномен).
Не менее чем у 50% морских свинок, иммунизированных вакциной в разведении 10-3, должен развиться полный иммунитет, не более чем у 20% может наблюдаться его отсутствие (лихорадка в течение не менее 5 сут и скротальный феномен разной степени выраженности), у остальных — частичный иммунитет.
У контрольных морских свинок, зараженных вирулентной культурой штамма Брейнль в разведении 10-3 и 10-6, должны выявляться выраженная лихорадочная реакция продолжительностью не менее 5 сут и орхит у части животных.
У контрольных морских свинок, зараженных культурой в разведении 10-7, хотя бы у одного животного должна быть укороченная до 4 сут лихорадочная реакция без скротального феномена, что подтверждает величину ИД вирулентной культуры штамма Брейнль 10-7.
На 21 — 23 сут у контрольных животных берут кровь в объеме 2 — 3 мл, методом кардиальной пункции, получают сыворотки, в которых определяют титр КС-антител в РСК. Титр КС-антител в сыворотках всех контрольных морских свинок должен быть не менее 1:160.
3. МИДэ (минимальная инфицирующая доза риккетсий для развивающихся куриных эмбрионов) должна соответствовать разведению вакцины 10-6 — 10-8, что определяет содержание в одной прививочной дозе вакцины от 1000 до 100000 МИДэ. Определение проводят биологическим и бактериоскопическим методом.
Определение МИДэ проводят на 6 — 7 суточных интактных РКЭ, которым в полость желточного мешка вводят вакцину в разведениях от 10-3 до 10-8 в объеме 0,5 мл. Для испытания используют 2 образца (ампулы) вакцины. Содержимое каждой ампулы растворяют в 5 мл стерильной 20% молочно-буферной изотонической смеси (МБС) и объединяют. Полученная суспензия содержит живой компонент вакцины в разведении 10-3. Далее готовят ряд последовательных десятикратных разведений от 10-4 до 10-8. Каждым разведением вакцины заражают по 10 РКЭ, которые после введения вакцины инкубируют при температуре 34 — 36 °C и относительной влажности воздуха 40 — 60% в течение 13 сут. Эмбрионы, погибшие с 5 по 13 сут, вскрывают в день гибели, оставшиеся живыми — на 13 сут. С помощью стерильного анатомического пинцета из каждого эмбриона извлекают кусочек желточной оболочки, который после промывания в стерильном 0,9% растворе натрия хлорида pH 6,8 — 7,2 тщательно растирают на обезжиренном предметном стекле. Мазки высушивают на воздухе, фиксируют смесью Никифорова, состоящей из равных объемов спирта этилового и эфира диэтилового, затем окрашивают по методу Романовского — Гимза.
Окраска по методу Романовского — Гимза.
1. Краситель Азур-Эозин по Романовскому (в растворе)
Приготовление фосфатно-буферного раствора (ФБР). Приготовление ФБР осуществляют в соответствии с инструкцией по применению красителя Азур — Эозин по Романовскому (в растворе). Для приготовления ФБС допускается использование готовых наборов «Фосфатный буфер» с pH 6,8 — 7,2. Раствор используют для разведения красителя и промывки стекол. Фосфатный буферный раствор хранят в плотно закрытом флаконе при температуре 2 — 8 °C в течение трех мес, при комнатной температуре — не более одного мес.
Приготовление раствора красителя. Непосредственно перед окраской мазков готовят раствор красителя: смешивают краситель Азур — Эозин с фосфатно-буферным раствором в соотношении 1:5 — 1:20 и фильтруют через двойной бумажный фильтр. Степень разбавления красителя устанавливают опытным путем. Раствор красителя хранят при комнатной температуре в течение 6 — 8 ч.
Краситель Азур-Эозин по Романовскому (сухой). При отсутствии готового красителя Азур — Эозин по Романовскому (в растворе) допускается приготовление раствора из красителя Азур-Эозин по Романовскому сухого (далее — красящая смесь). Раствор красителя готовят из расчета 800 мг красящей смеси на 100 мл растворителя (смесь равных объемов спирта этилового и глицерина). 300 мг красящей смеси, растирают со 100 мл растворителя и далее, помешивая, добавляют 500 мг оставшейся красящей смеси до получения однородной смеси. Раствор красителя хранят в течение 1 мес в плотно закрытой темной бутыли отдельно от кислот и щелочей в защищенном от света месте. Если при хранении раствора красителя образуется осадок, рекомендуется его профильтровать.
Приготовление рабочего раствора красителя. К 1 мл раствора красителя добавляют 2 мл фосфатно-буферного раствора, 47 мл воды очищенной и перемешивают. Рабочий раствор красителя хранят при комнатной температуре в течение 6 — 8 ч.
Приготовленные мазки просматривают в световом биологическом микроскопе. Риккетсии должны иметь фиолетовую окраску и быть представленными преимущественно мелкими палочковидными формами «b» при наличии незначительного количества нитевидных форм «d» и кокковидных форм «a». Учет результатов анализа проводят на основании оценки накопления риккетсий по условной «трех крестной системе». <*>
<*> За МИДэ принимают наибольшее разведение вакцины, которое вызывает микроскопически подтверждаемое наличие единичных риккетсий («+»), хотя бы у одного из 10 зараженных эмбрионов (РКЭ).
Оценку количества риккетсий проводят по условной «трехкрестной» системе (микроскопия мазков, окрашенных по методу Романовского — Гимза:
«-» — отсутствие риккетсий в мазке;
«+» — единичные риккетсии хотя бы в одном поле зрения;
«++» — 20 — 50 риккетсий в каждом поле зрения;
«+++» — неподсчитываемое количество риккетсий в каждом поле зрения.
Растворитель, выпускаемый в комплекте с препаратом. Представляет собой стерильный 0,9% раствор натрия хлорида. Требования к качеству растворителя должны быть указаны в нормативной документации.
Упаковка и маркировка. В соответствии с ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственных средств», «Лекарственные формы» и ОФС «Иммунобиологические лекарственные препараты».
Транспортирование и хранение. В соответствии с ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственных средств» и ОФС «Хранение лекарственных средств» при температуре от 2 до 8 °C. Замораживание не допускается.