ФС.2.1.0425. Фармакопейная статья. Инозин пранобекс
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377)
(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)
Примечание
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте https://minzdrav.gov.ru/ по состоянию на 21.08.2023. В соответствии с Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377 данный документ введен в действие с 01.09.2023.
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
| Инозин пранобекс | ФС.2.1.0425 |
|---|---|
| Инозин пранобекс | |
| Inosinum pranobexum | Вводится впервые |
 | |
| C10H12N4O5·(C14H22N2O4)3 [36703-88-5] | М.м. 1115,3 |
9-( \beta -D-Рибофуранозил)-1,9-дигидро-6H-пурин-6-она и 4-ацетамидобензоат (2RS)-2-гидрокси-N,N-диметилпропан-1-аминия (1:3).
Содержит не менее 22,8% и не более 25,2% инозина C10H12N4O5 и не менее 72,2% и не более 79,8% 4-ацетамидобензоат (2RS)-2-гидрокси-N,N-диметилпропан-1-аминия C14H22N2O4 в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.
Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок.
Растворимость. Легко растворим в воде, очень мало растворим или практически нерастворим в метаноле.
1. ВЭЖХ. Время удерживания двух основных пиков на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пиков инозина и 4-ацетамидобензойной кислоты на хроматограмме стандартного раствора (раздел «Количественное определение»).
2. Спектрофотометрия (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,15 г (точная навеска) субстанции, растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора водой до метки.
Спектр поглощения испытуемого раствора в области длин волн от 200 до 300 нм должен иметь максимум при 261 нм.
Прозрачность раствора. Раствор 10 г субстанции в 100 мл воды должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей»).
pH раствора. От 6,0 до 7,0 (10% раствор, ОФС «Ионометрия», метод 3).
Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).
Подвижная фаза А (ПФА). Растворяют 2,65 г дикалия гидрофосфата в 800 мл воды, доводят значение pH фосфорной кислотой концентрированной до 2,5, количественно переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объем раствора водой до метки.
Подвижная фаза Б (ПФБ). Метанол.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 100 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.
Раствор стандартного образца примеси 1. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 25 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца примеси 1, растворяют в 4 мл аммиака раствора 4% и доводят объем раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 2,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора водой до метки.
Раствор стандартного образца примеси 2. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца примеси 2, растворяют в 10 мл метанола и доводят объем раствора водой до метки.
Раствор стандартного образца 4-ацетамидобензойной кислоты. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца 4-ацетамидобензойной кислоты, растворяют в воде и доводят объем раствора водой до метки.
Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл раствора стандартного образца примеси 1, 1,0 мл раствора стандартного образца примеси 2 и 1,0 мл раствора стандартного образца 4-ацетамидобензойной кислоты и доводят объем раствора водой до метки.
Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 24 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца инозина, растворяют в 50 мл воды, прибавляют 1,0 мл раствора стандартного образца примеси 1, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают на магнитной мешалке в течение 10 мин.
Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 4,4 мг фармакопейного стандартного образца 4-ацетамидобензойной кислоты, растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора водой до метки.
Примесь 1: 1,7-дигидро-6H-пурин-6-он [68-94-0].
Примесь 2: 4-аминобензойная кислоты [150-13-0].
| Время, мин | ПФА, % | ПФБ, % |
|---|---|---|
| 0 — 4,0 | 83 | 17 |
| 4,0 — 4,1 | 83 \rightarrow 60 | 17 \rightarrow 40 |
| 4,1 — 40,0 | 60 | 40 |
| 40,0 — 40,1 | 60 \rightarrow 83 | 40 \rightarrow 17 |
| 40,1 — 55,0 | 83 | 17 |
Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для проверки пригодности хроматографической системы, стандартный раствор и испытуемый раствор.
Относительное время удерживания соединений. Инозин — 1 (около 6 мин); примесь 1 — около 0,9; примесь 2 — около 1,9; 4-ацетамидобензойная кислота — около 3.
Идентификация примесей. Для идентификации пиков примеси 1 и примеси 2 используют относительное время удерживания соединений и хроматограмму стандартного раствора.
Пригодность хроматографической системы
На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика 4-ацетамидобензойной кислоты должно быть не менее 10.
На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (RS) между пиками инозина и гипоксантина должно быть не менее 2,0.
На хроматограмме стандартного раствора фактор асимметрии пика (AS) примеси 1,4-ацетамидобензойной кислоты и примеси 2 должен быть не более 1,5.
Содержание примеси 1 в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:
X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 2 \cdot 1 \cdot 100}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 0,24 \cdot 100 \cdot 10 \cdot 100} ,
где S1 — площадь пика гипоксантина на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 — площадь пика гипоксантина на хроматограмме стандартного раствора;
a0 — навеска фармакопейного стандартного образца гипоксантина, мг;
P — содержание гипоксантина в фармакопейном стандартном образце гипоксантина, %;
0,24 — массовая доля инозина в субстанции.
Содержание примеси 2 в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:
X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 1 \cdot 100}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 0,48 \cdot 100 \cdot 100} ,
где S1 — площадь пика 4-аминобензойной кислоты на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 — площадь пика 4-аминобензойной кислоты на хроматограмме стандартного раствора;
a0 — навеска стандартного образца 4-аминобензойной кислоты, мг;
P — содержание 4-аминобензойной кислоты в стандартном образце 4-аминобензойной кислоты, %;
0,48 — массовая доля 4-ацетамидобензойной кислоты в субстанции.
Содержание любой другой примеси в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:
X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 1 \cdot 100}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 100 \cdot 100} ,
где S1 — площадь пика любой неидентифицированной примеси на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 — площадь пика 4-ацетамидобензойной кислоты на хроматограмме стандартного раствора;
a0 — навеска стандартного образца 4-ацетамидобензойной кислоты, мг;
P — содержание 4-ацетамидобензойной кислоты в стандартном образце 4-ацетамидобензойной кислоты, %.
Допустимое содержание примесей:
- примесь 1 — не более 0,2%;
- примесь 2 — не более 0,2%;
- любая другая примесь — не более 0,1%;
- сумма примесей — не более 0,5%.
Не учитывают пики, площадь которых менее площади пика 4-ацетамидобензойной кислоты на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы (менее 0,025%).
Вода. Не более 0,5% (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют 0,3 г (точная навеска) субстанции.
Сульфатная зола. Не более 0,1% (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.
Тяжелые металлы. Не более 0,001%. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжелые металлы» (метод 3Б) в зольном остатке, полученном в испытании «Сульфатная зола», с использованием эталонного раствора 1.
Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».
Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».
1. Инозин и 4-ацетамидобензойная кислота. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).
Все растворы используют свежеприготовленными.
Подвижная фаза (ПФ). Смешивают 800 мл воды, 6,8 мл фосфорной кислоты концентрированной и 50 мл метанола. Количественно переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл, помещают в ледяную баню, доводят значение pH натрия гидроксида раствором 5 М до 7,0 и доводят объем раствора водой до метки.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 0,2 г (точная навеска) субстанции, растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора ПФ до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и доводят объем ПФ до метки.
Раствор стандартного образца инозина. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 60 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца инозина, растворяют в ПФ и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.
Раствор стандартного образца 4-ацетамидобензойной кислоты. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 120 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца 4-ацетамидобензойной кислоты, растворяют в метаноле и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.
Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 5,0 мл раствора стандартного образца инозина и 5,0 мл раствора стандартного образца 4-ацетамидобензойной кислоты, доводят объем раствора ПФ до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 25,0 мл полученного раствора и доводят объем ПФ до метки.
Хроматографируют стандартный раствор и испытуемый раствор.
Относительное время удерживания соединений. 4-ацетамидобензойная кислота — около 8 мин; инозин — около 13 мин.
Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме стандартного раствора:
- разрешение (RS) между пиками 4-ацетамидобензойной кислоты и инозина должно быть не менее 3,0;
- фактор асимметрии пика (AS) 4-ацетамидобензойной кислоты и инозина должен быть не более 2,0.
Содержание 4-ацетамидобензойной кислоты C9H9NO3 и инозина C10H12N4O5 в субстанции в пересчете на безводное и не содержащее остаточных органических растворителей вещество в процентах (X) вычисляют по формуле:
X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 20 \cdot 200 \cdot 20 \cdot 5 \cdot 25 \cdot 100}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 5 \cdot 5 \cdot 25 \cdot 200 \cdot 100 \cdot (100 - W)} ,
где S1 — площадь пика инозина или 4-ацетамидобензойной кислоты на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 — площадь пика инозина или 4-ацетамидобензойной кислоты на хроматограмме стандартного раствора;
a0 — навеска фармакопейного стандартного образца инозина или 4-ацетамидобензойной кислоты, мг;
P — содержание инозина в фармакопейном стандартном образце инозина или 4-ацетамидобензойной кислоты в фармакопейном стандартном образце ацетамидобензойной кислоты, %;
W — суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %.
2. N,N-диметиламино-2-пропанол. Определение проводят методом титриметрии (ОФС «Титриметрия (титриметрические методы анализа)»).
Растворяют 0,25 г (точная навеска) субстанции в 40 мл воды и титруют 0,1 М раствором хлористоводородной кислоты. Конечную точку титрования определяют потенциометрически (ОФС «Потенциометрическое титрование»).
Параллельно проводят контрольный опыт.
1 мл 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты соответствует 10,317 мг N,N-диметиламино-2-пропанола C5H13NO.