ФС.2.1.0390. Фармакопейная статья. Варфарин натрия клатрат. Варфарин
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377)
(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание)»
Примечание
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте https://minzdrav.gov.ru/ по состоянию на 18.08.2023. В соответствии с Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377 данный документ введен в действие с 01.09.2023.
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
| Варфарин натрия клатрат | ФС.2.1.0390 |
|---|---|
| Варфарин | |
| Warfarinum natricum clathratum | Вводится впервые |
 | |
| (C19H15NaO4)2·C3H8O | М.м. 720,71 |
2-Оксо-3-[(1RS)-3-оксо-1-фенилбутил]-2H-1-бензопиран-4-олят натрия-пропан-2-ол(2:1).
Содержит не менее 97,0% и не более 102,0% варфарина натрия C19H15NaO4 в пересчете на безводное и свободное от 2-пропанола и остаточных органических растворителей вещество.
Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок.
<*> Гигроскопичен.
<*> Приводится для информации.
Растворимость. Очень легко растворим в воде, легко растворим в спирте, растворим в ацетоне, очень мало растворим в метиленхлориде.
1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца варфарина натрия клатрата.
2. ГХ (ОФС «Газовая хроматография»). Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика 2-пропанола на хроматограмме стандартного раствора (раздел «2-Пропанол»).
3. Качественная реакция. Растворяют 1 г субстанции в 10 мл воды, прибавляют 5 мл азотной кислоты концентрированной, фильтруют, прибавляют 2 мл калия дихромата раствора 0,5% и встряхивают в течение 5 мин; через 20 мин должно появиться зеленовато-голубое окрашивание.
4. Качественная реакция. Субстанция должна давать характерную реакцию Б на натрий (ОФС «Общие реакции на подлинность»).
Прозрачность раствора. Раствор 1 г субстанции в 20 мл воды должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей»).
Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании «Прозрачность раствора», должен быть бесцветным (ОФС «Степень окраски жидкостей», метод 2).
pH. От 7,6 до 8,6 (1% раствор, ОФС «Ионометрия», метод 3).
Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).
Растворитель. Метанол — вода 250:750.
Подвижная фаза (ПФ). Уксусная кислота ледяная — ацетонитрил — вода 10:250:750.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 40 мг субстанции, растворяют в растворителе и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.
Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объем раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем растворителем до метки.
Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 2 мг примеси B и 2 мг примеси C, растворяют в 25 мл метанола и доводят объем раствора водой до метки.
Примесь B: 4-гидрокси-2H-1-бензопиран-2-он [1076-38-6].
Примесь C: (3E)-4-фенилбут-3-ен-2-он [1896-62-4].
Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.
Относительное время удерживания соединений. Варфарин — 1 (около 9 мин); примесь B — около 0,4; примесь C — около 0,6.
Идентификация примесей. Для идентификации пиков примесей B и C используют относительное время удерживания соединений и хроматограмму раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы.
Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (R) между пиками примеси B и примеси C должно быть не менее 2,0.
Поправочные коэффициенты. Для расчета содержания площади пиков следующих примесей умножают на соответствующие поправочные коэффициенты: примесь B — 0,5; примесь C — 0,4.
Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:
- площадь пика каждой из примесей B и C не должна более чем в 1,5 раза превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,15%);
- площадь пика любой примеси не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,1%);
- сумма площадей пиков всех примесей не должна превышать трехкратную площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,3%).
Не учитывают пики, площадь которых составляет менее половины площади пика варфарина на хроматограмме раствора сравнения (менее 0,05%).
2-Пропанол. От 8,0 до 8,5%. Определение проводят методом ГХ (ОФС «Газовая хроматография»).
Раствор внутреннего стандарта. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 0,17 г пропанола и доводят объем раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора водой до метки.
Испытуемый раствор. Растворяют 0,1 г субстанции в 2,0 мл воды и прибавляют 2,0 мл раствора внутреннего стандарта.
Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 0,17 г 2-пропанола и доводят объем раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора водой до метки. Смешивают 2,0 мл полученного раствора и 2,0 мл раствора внутреннего стандарта.
Хроматографируют контрольный, стандартный и испытуемый растворы.
Относительное время удерживания соединений. 2-Пропанол — 1; пропанол — около 1,5.
Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме стандартного раствора:
- разрешение (Rs) между пиками 2-пропанола и пропанола должно быть не менее 5,0;
- фактор асимметрии пика (As) 2-пропанола должен быть не более 1,3;
- относительные стандартные отклонения площадей пиков 2-пропанола и пропанола должны быть не более 2,0% (6 введений).
Допустимое содержание примесей. Содержание 2-пропанола в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:
X = \frac{B_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 2 \cdot 5}{B_{0} \cdot a_{1} \cdot 20 \cdot 10} ,
где B1 — отношение площади пика 2-пропанола к площади пика внутреннего стандарта на хроматограмме испытуемого раствора;
B0 — отношение площади пика 2-пропанола к площади пика внутреннего стандарта на хроматограмме стандартного раствора;
P — содержание основного вещества в 2-пропаноле, %.
Фенольные кетоны. Определение проводят методом спектрофотометрии (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,25 г (точная навеска) субстанции, растворяют в натрия гидроксида растворе 2% и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. Раствор используют сразу после приготовления.
Измеряют оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны 385 нм в кювете с толщиной слоя 1 см, используя в качестве раствора сравнения натрия гидроксида раствор 2%.
Оптическая плотность испытуемого раствора не должна превышать 0,2.
Вода. Не более 0,3% (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют 2,5 г (точная навеска) субстанции.
Тяжелые металлы. Не более 0,001%. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжелые металлы» (метод 3Б) в зольном остатке, полученном после сжигания 1,0 г субстанции, с использованием эталонного раствора 1.
Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».
Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».
Определение проводят методом спектрофотометрии (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,1 г (точная навеска) субстанции, растворяют в натрия гидроксида растворе 0,01 М и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.
Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны 308 нм в кювете с толщиной слоя 1 см, используя в качестве раствора сравнения натрия гидроксида раствор 0,01 М.
Содержание варфарина натрия C19H15NaO4 в процентах (X) в пересчете на безводное, свободное от 2-пропанола и остаточных органических растворителей вещество вычисляют по формуле:
X = \frac{A_{1} \cdot 100 \cdot 100 \cdot 100}{a_{1} \cdot 1 \cdot 431 \cdot (100 - W)} ,
где A1 — оптическая плотность испытуемого раствора;
431 — удельный показатель поглощения варфарина натрия, (A_{1\text{см}}^{1\%}) ;
W — суммарное содержание воды, 2-пропанола и остаточных органических растворителей в субстанции, %.
В сухом, защищенном от света месте.