ФС.2.1.0386. Фармакопейная статья. Булевиртида ацетат. Булевиртид

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Булевиртида ацетат	ФС.2.1.0386
Булевиртид
Bulevirtidi acetas	Вводится впервые

C248H355N65O72·xC2H4O2	М.м. 5398,9 (основание)

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

N-Тетрадеканоилглицил-L-треонил-L-аспарагинил-L-лейцил-L-серил-L-валил-L-пролил-L-аспарагинил-L-пролил-L-лейцил-глицил-L-фенилаланил-L-фенилаланил-L-пролил-L- \alpha -аспартил-L-гистидил-L-глутаминил-L-лейцил-L- \alpha -аспартил-L-пролил-L-аланил-L-фенилаланил-глицил-L-аланил-L-аспарагинил-L-серил-L-аспарагинил-L-аспарагинил-L-пролил-L- \alpha -аспартил-L-триптофил-L- \alpha -аспартил-L-фенилаланил-L-аспарагинил-L-пролил-L-аспарагинил-L-лизил-L- \alpha -аспартил-L-гистидил-L-триптофил-L-пролил-L- \alpha -глутамил-L-аланил-L-аспарагинил-L-лизил-L-валилглицинамида ацетат.

Содержит не менее 95,0% и не более 105,0% булевиртида ацетата C248H355N65O72·xC2H4O2 в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или почти белый порошок.

Растворимость. Мало или очень мало растворим в уксусной кислоте растворе 50%.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру стандартного образца булевиртида ацетата.

2. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика булевиртида на хроматограмме раствора стандартного образца булевиртида ацетата (раздел «Количественное определение»).

3. Аминокислотный состав. Содержание аминокислот должно быть в следующих пределах (моль/моль): аланин от 2,55 до 3,45; аспарагин от 11,05 до 14,95; глутамин от 1,70 до 2,30; глицин от 3,40 до 4,60; гистидин от 1,70 до 2,30; лейцин от 2,55 до 3,45; лизин от 1,70 до 2,30; фенилаланин от 3,40 до 4,60; пролин от 5,95 до 8,05; серин от 1,40 до 2,60; треонин от 0,80 до 1,20; валин от 1,70 до 2,30. Остальные аминокислоты могут присутствовать не более чем в следовых количествах. Определение проводят в соответствии с ОФС «Аминокислотный анализ» (гидролиз по методу 1 в жидкой фазе, анализ по методу 1 или 7).

ИСПЫТАНИЯ

Прозрачность раствора. Раствор 10 мг субстанции в 10 мл уксусной кислоты раствора 50% должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей»).

Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании «Прозрачность раствора», должен быть бесцветным (ОФС «Степень окраски жидкостей», метод 2).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Все растворы используют свежеприготовленными.

Подвижная фаза А (ПФА). Трифторуксусной кислоты раствор 0,1%.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Трифторуксусная кислота — ацетонитрил 1:999.

Растворитель. Ацетонитрил — вода 370:630.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 25 мг субстанции, растворяют в растворителе и доводят объем раствора растворителем до метки. Раствор готовят непосредственно перед применением.

Раствор стандартного образца булевиртида ацетата. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 20 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца булевиртида, растворяют в растворителе и доводят объем раствора растворителем до метки.

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 2,5 мл раствора стандартного образца булевиртида ацетата и доводят объем раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора растворителем до метки.

Хроматографические условия

Колонка	150 x 4,6 мм, силикагель фенилгексилсилильный, эндкепированный, для хроматографии, 2,6 мкм;
Температура колонки	60 °C;
Температура образца	5 °C;
Скорость потока	1,0 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 220 нм;
Объем пробы	5 мкл.

Режим хроматографирования

Время, мин	ПФА, %	ПФБ, %
0 — 10	63	37
10 — 50	63 \rightarrow 55	37 \rightarrow 45
50 — 50,1	55 \rightarrow 0	45 \rightarrow 100
50,1 — 55	0	100
55 — 55,1	0 \rightarrow 63	100 \rightarrow 37

Хроматографируют раствор для проверки пригодности хроматографической системы, раствор стандартного образца булевиртида ацетата и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Булевиртид — 1 (около 32 мин).

<*> Пригодность хроматографической системы

На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика булевиртида должно быть не менее 10.

На хроматограмме раствора стандартного образца булевиртида ацетата:

• фактор асимметрии пика (AS) булевиртида должен быть не более 2,0;
• относительное стандартное отклонение площади пика булевиртида должно быть не более 2,0% (6 введений).

Поправочные коэффициенты. Для расчета содержания площадь пика примеси с относительным временем удерживания около 1,05 умножают на 2.

Допустимое содержание примесей. Содержание каждой из примесей в субстанции в процентах вычисляют согласно методу нормирования (ОФС «Хроматография»):

• примесь с относительным временем удерживания около 1,05 — не более 2,4%;
• примеси с относительным временем удерживания около 0,97 и 0,99 — не более 1,0% каждая;
• любая другая — не более 0,5%;
• сумма примесей — не более 5,0%.

Не учитывают пики, площадь которых менее площади основного пика на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы (менее 0,05%).

Уксусная кислота. Не более 4,0%. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Буферный раствор. Растворяют 7 мл фосфорной кислоты и 5 мл аммиака раствора концентрированного 25% в 900 мл воды и доводят pH раствора аммиака раствором концентрированным 25% до 2,50. Полученный раствор переносят в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объем раствора водой до метки.

Подвижная фаза А (ПФА). Метанол — буферный раствор 20:1000.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Ацетонитрил — вода 500:500.

Растворитель. Хлористоводородной кислоты раствор 0,01 М.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 25 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в растворителе и доводят объем раствора растворителем до метки.

Раствор уксусной кислоты. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 0,107 г (точная навеска) уксусной кислоты ледяной и доводят объем раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора растворителем до метки.

Хроматографические условия

Колонка	250 x 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный, для хроматографии, 5 мкм, размер пор 12 нм;
Температура колонки	25 °C;
Скорость потока	1,5 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 210 нм;
Объем пробы	50 мкл.

Режим хроматографирования

Время, мин	ПФА, %	ПФБ, %
0 — 5	100	0
5 — 6	100 \rightarrow 0	0 \rightarrow 100
6 — 14	0	100
14 — 15	0 \rightarrow 100	100 \rightarrow 0
15 — 25	100	0

Хроматографируют раствор уксусной кислоты и испытуемый раствор.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора уксусной кислоты:

• относительное стандартное отклонение площади пика уксусной кислоты должно быть не более 2,0% (6 введений);
• эффективность хроматографической колонки (N), рассчитанная по пику уксусной кислоты, должна составлять не менее 2000 теоретических тарелок.

Содержание уксусной кислоты в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 50 \cdot 1}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 50 \cdot 100} ,

где S1 — площадь пика уксусной кислоты на хроматограмме испытуемого раствора;

S0 — площадь пика уксусной кислоты на хроматограмме раствора уксусной кислоты;

a1 — навеска субстанции, мг;

a0 — навеска уксусной кислоты, мг;

P — содержание основного вещества в уксусной кислоте, %.

Трифторуксусная кислота. Не более 0,1%. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Буферный раствор. Растворяют 1,4 мл фосфорной кислоты концентрированной в 900 мл воды и доводят pH раствора натрия гидроксида раствором 10 М до 3,00. Полученный раствор переносят в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объем раствора водой до метки.

Подвижная фаза А (ПФА). Метанол — буферный раствор 20:1000.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Ацетонитрил — вода 500:500.

Растворитель. Хлористоводородной кислоты раствор 0,01 М.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 25 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в растворителе и доводят объем раствора растворителем до метки.

Раствор трифторуксусной кислоты. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 10 мг (точная навеска) трифторуксусной кислоты, растворяют в растворителе и доводят объем раствора растворителем до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл раствора трифторуксусной кислоты и доводят объем раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора растворителем до метки.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 2,5 мл раствора трифторуксусной кислоты и доводят объем раствора растворителем до метки.

Хроматографические условия

Колонка	150 x 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный, совместимый с водной подвижной фазой, эндкепированный, для хроматографии, 4 мкм;
Температура колонки	25 °C;
Скорость потока	0,4 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 210 нм;
Объем пробы	100 мкл.

Режим промывки колонки

Время, мин	ПФА, %	ПФБ, %
0 — 15	100	0
15 — 16	100 \rightarrow 0	0 \rightarrow 100
16 — 24	0	100
24 — 25	0 \rightarrow 100	100 \rightarrow 0
25 — 45	100	0

Хроматографируют раствор для проверки пригодности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы:

• относительное стандартное отклонение площади пика трифторуксусной кислоты должно быть не более 2,0% (6 введений);
• эффективность хроматографической колонки (N), рассчитанная по пику трифторуксусной кислоты, должна составлять не менее 2000 теоретических тарелок.

Содержание трифторуксусной кислоты в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 25 \cdot 1 \cdot 1}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 10 \cdot 100 \cdot 10} ,

где S1 — площадь пика трифторуксусной кислоты на хроматограмме испытуемого раствора;

S0 — площадь пика трифторуксусной кислоты на хроматограмме раствора сравнения;

a1 — навеска субстанции, мг;

a0 — навеска трифторуксусной кислоты, мг;

P — содержание основного вещества в трифторуксусной кислоте, %.

Вода. Не более 10% (ОФС «Определение воды», метод 2).

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

Бактериальные эндотоксины. Не более 10 ЕЭ на 1 мг субстанции (ОФС «Бактериальные эндотоксины»).

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси» со следующими изменениями.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 20 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в растворителе и доводят объем раствора растворителем до метки.

Хроматографируют раствор стандартного образца булевиртида ацетата и испытуемый раствор.

Содержание булевиртида ацетата C248H355N65O72·xC2H4O2 в субстанции в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 50 \cdot 100}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 50 \cdot (100 - W)} ,

где S1 — площадь пика булевиртида на хроматограмме испытуемого раствора;

S0 — площадь пика булевиртида на хроматограмме раствора стандартного образца булевиртида ацетата;

a1 — навеска субстанции, мг;

a0 — навеска фармакопейного стандартного образца булевиртида ацетата, мг;

P — содержание булевиртида ацетата в фармакопейном стандартном образце булевиртида ацетата, %;

W — суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %.

ХРАНЕНИЕ

В защищенном от света месте при температуре 2 — 8 °C.

---