ФС.2.1.0360. Фармакопейная статья. Феноксиметилпенициллин

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Феноксиметилпенициллин	ФС
Феноксиметилпенициллин
Phenoxymethylpenicillinum	Взамен ФС 42-2579-97

C16H18N2O5S [87-08-1]	М.м. 350,39

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

(2S,5R,6R)-3,3-Диметил-7-оксо-6-(2-феноксиацетамидо)-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновая кислота.

Феноксиметилпенициллин образуется при росте некоторых штаммов Penicillium notatum или родственных микроорганизмов.

Содержит не менее 95,0% и не более 102,0% по сумме процентного содержания феноксиметилпенициллина C16H18N2O5S и 4-гидроксифеноксиметилпенициллина в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок.

<*> Гигроскопичен.

---

<*> Приводится для информации.

Растворимость. Растворим в спирте, очень мало растворим в воде.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции, в области от 4000 до 400 см-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца феноксиметилпенициллина.

2. ТСХ. Определение проводят методом ТСХ (ОФС «Тонкослойная хроматография»).

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля F254, 2 — 10 мкм, на алюминиевой подложке.

Предварительная подготовка пластинки. Пластинку помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет 100% длины пластинки, ее выдерживают в течение 10 мин, вынимают и сушат на воздухе в течение 15 мин. Подготовку пластинки проводят непосредственно перед использованием.

Подвижная фаза (ПФ). Ацетон — аммония ацетата раствор — уксусная кислота ледяная 30:70:5,0.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают 25 мг субстанции, растворяют в ацетоне и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца феноксиметилпенициллина. В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают 25 мг фармакопейного стандартного образца феноксиметилпенициллина, растворяют в ацетоне и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают 25 мг фармакопейного стандартного образца бензилпенициллина калия и 25 мг фармакопейного стандартного образца феноксиметилпенициллина и доводят водой до метки.

На линию старта пластинки наносят по 1 мкл испытуемого раствора (5 мкг), раствора стандартного образца феноксиметилпенициллина фумаровой кислоты (5 мкг) и раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы (10 мкг). Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80 — 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей в потоке теплого воздуха, помещают в камеру, насыщенную парами йода до появления зон адсорбции, и просматривают сквозь стеклянную подложку при дневном освещении.

Результат. Основная зона адсорбции на хроматограмме испытуемого раствора по положению, величине и окраске должна соответствовать зоне адсорбции на хроматограмме раствора стандартного образца феноксиметилпенициллина.

3. Качественная реакция. Субстанция должна давать характерную реакцию на формальдегида раствор в серной кислоте (ОФС «Общие реакции на подлинность»).

ИСПЫТАНИЯ

Удельное вращение. От +190 до +200 в пересчете на сухое вещество (1% раствор субстанции в спирте 96%, ОФС «Оптическое вращение»).

pH. От 2,4 до 4,0 (0,5% раствор, ОФС «Ионометрия», метод 3).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Для приготовления растворов используют подходящую пластиковую посуду. Все растворы хранят при 10 °C не более 42 ч.

Буферный раствор. К 250 мл калия дигидрофосфата раствора 0,2 М прибавляют 500 мл воды, доводят значение pH до 6,5 натрия гидрокарбоната раствором 8,4%, переносят в мерную колбу вместимостью 1 л и доводят объем раствора водой до метки.

Подвижная фаза А (ПФА). Буферный раствор — метанол — вода 10:30:60.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Буферный раствор — вода — метанол 5:35:60.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 80,0 мг субстанции, растворяют в буферном растворе и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объем раствора буферным раствором до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 2 мл помещают 5 мг фармакопейного стандартного образца феноксиметилпенициллина для идентификации пиков, содержащего примеси B, D, E, и F, растворяют в буферном растворе и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 1,0 мл раствора сравнения и доводят объем раствора буферным раствором до метки.

Примечание

Примесь A (бензилпенициллин): (2S,5R,6R)-3,3-диметил-7-оксо-6-(2-фенилацетамидо)-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновая кислота [61-33-6].

Примесь B: феноксиуксусная кислота, CAS 122-59-8.

Примесь C (6-аминопенициллановая кислота): (2S,5R,6R)-6-амино-3,3-диметил-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновая кислота [551-16-6].

Примесь D (4-гидроксифеноксиметилпенициллин): (2S,5R,6R)-6-[2-(4-гидроксифенокси)ацетамидо]-3,3-диметил-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновая кислота [20880-67-5].

Примесь E (пеницилловые кислоты феноксиметилпенициллина): (4S)-2-[карбокси[(2-феноксиацетамидо)метил]-5,5-диметил-1,3-тиазолидин-4-карбоновая кислота.

Примесь F (пенилловые кислоты феноксиметилпенициллина): (2RS,4S)-5,5-диметил-2-[(2-феноксиацетамидо)метил]-1,3-тиазолидин-4-карбоновая кислота.

Хроматографические условия

Колонка	150 x 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный эндкепированный для хроматографии, 100Е , 3 мкм;
Температура колонки	50 °C;
Скорость потока	1,5 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 254 нм;
Объем пробы	20 мкл.

Режим хроматографирования

Время, мин	ПФА, %	ПФБ, %
0 — 2	85	15
2 — 5	85 \rightarrow 70	15 \rightarrow 30
5 — 17	70 \rightarrow 0	30 \rightarrow 100
17 — 22	0	100

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений.

Феноксиметилпенициллин — 1 (около 11 мин); примесь B — около 0,29; примесь D — около 0,38; примесь E — около 0,55 и 0,61; примесь F — около 0,88 и 0,95.

Идентификация примесей. Для идентификации пиков примесей B, D, E, и F используют относительное время удерживания соединений, хроматограмму, прилагаемую к фармакопейному стандартному образцу феноксиметилпенициллина для идентификации пиков, и хроматограмму раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы отношение максимум/минимум (p/v) между пиками примеси F и феноксиметилпенициллина должно быть не менее 3,0.

На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика феноксиметилпенициллина должно быть не менее 20.

Поправочные коэффициенты. Для расчета содержания примесей площади пиков следующих примесей умножают на соответствующие поправочные коэффициенты: примесь B — 0,5; примесь E — 1,3.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

• площади пиков примеси E (сумма изомеров) и примеси F (сумма эпимеров) не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 1,0%);
• площадь пика примеси B не должна превышать 0,2 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,2%);
• площадь пика любой неидентифицированной примеси не должна превышать 0,15 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,15%);
• сумма площадей пиков всех примесей, кроме примеси D, не должна превышать трехкратную площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 3%).

Не учитывают пики, площадь которых менее 0,05 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (менее 0,05%).

4-гидроксифеноксиметилпенициллин (примесь D). Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси».

Для расчета содержания примеси D умножают площадь пика примеси D на соответствующий поправочный коэффициент — 1,7.

Допустимое содержание примеси D. На хроматограмме испытуемого раствора:

• площади пика примеси D не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 1,0%).

Вода. Не более 0,5% (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют 0,5 г (точная навеска) субстанции.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

Аномальная токсичность. Субстанция должна быть нетоксичной (ОФС «Аномальная токсичность»). Тест-доза — 0,6 мг феноксиметилпенициллина в 0,5 мл фосфатного буферного раствора pH 6,8 — 7,0. Срок наблюдения — 48 ч.

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси» со следующими изменениями.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 50 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в буферном растворе и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца феноксиметилпенициллина калиевой соли. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 55,0 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца феноксиметилпенициллина калиевой соли, растворяют в буферном растворе и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Содержание феноксиметилпенициллина C16H18N2O5S в препарате в процентах (X) в пересчете на сухое вещество вычисляют по формуле:

X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 50 \cdot 100 \cdot 350,39}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 50 \cdot (100 - W) \cdot 388,48} ,

где S1 — площадь пика феноксиметилпенициллина на хроматограмме испытуемого раствора;

S0 — площадь пика феноксиметилпенициллина на хроматограмме раствора стандартного образца феноксиметилпенициллина калиевой соли;

a1 — навеска субстанции, мг;

a0 — навеска фармакопейного стандартного образца феноксиметилпенициллина калиевой соли, мг;

W — содержание воды и остаточных органических растворителей, %;

P — содержание феноксиметилпенициллина калиевой соли в фармакопейном стандартном образце феноксиметилпенициллина калиевой соли, %;

350,39 — молекулярная масса феноксиметилпенициллина;

388,48 — молекулярная масса феноксиметилпенициллина калиевой соли.

Рассчитывают сумму процентного содержания феноксиметилпенициллина и 4-гидроксифеноксиметилпенициллина.

ХРАНЕНИЕ

В герметично укупоренной упаковке.

---