ФС.2.1.0344. Фармакопейная статья. Альфакальцидол

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Альфакальцидол	ФС
Альфакальцидол
Alfacalcidolum	Взамен ФС 42-3450-97

C27H44O2 [41294-56-8]	М.м. 400,64

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

(5Z,7E)-9,10-Секохолеста-5,7,10(19)-триен- 1\alpha , 3\beta -диол.

Содержит не менее 97,0% и не более 102,0% альфакальцидола C27H44O2 в пересчете на сухое вещество.

В растворе в зависимости от температуры и времени проявляет обратимую изомеризацию до пре-альфакальцидола. Активность обусловлена обоими соединениями.

СВОЙСТВА

Описание. Белые или почти белые кристаллы или белый кристаллический порошок.

<*> Чувствителен к воздействию воздуха, тепла и света.

---

<*> Приводится для информации.

Растворимость. Практически нерастворим в воде, легко растворим в спирте 96%, растворим в жирных маслах.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия бромидом, в области от 4000 до 400 см-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца альфакальцидола.

2. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика альфакальцидола на хроматограмме раствора стандартного образца альфакальцидола (раздел «Количественное определение»).

3. Спектрофотометрия (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»). Спектр поглощения испытуемого раствора в области от 220 до 330 нм должен иметь максимум при 265 нм и минимум при 228 нм.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 50 мг субстанции, растворяют в спирте 95% и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора спиртом 95% до метки.

ИСПЫТАНИЯ

Температура плавления. От 137 до 144 °C (ОФС «Температура плавления», метод 1, без предварительного подсушивания).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Все растворы защищают от света и воздуха и используют свежеприготовленными.

Подвижная фаза (ПФ). Метанол — вода — ацетонитрил 150:170:680.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 5 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в 25 мл ацетонитрила и доводят объем раствора водой до метки.

Раствор стандартного образца альфакальцидола. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 5 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца альфакальцидола, растворяют в 25 мл ацетонитрила и доводят объем раствора водой до метки.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 2 мг фармакопейного стандартного образца альфакальцидола для проверки пригодности хроматографической системы (содержит примеси A и D), растворяют в 10 мл ацетонитрила и доводят объем раствора водой до метки.

Раствор для идентификации примеси B. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 2 мг фармакопейного стандартного образца альфакальцидола для идентификации примеси B, растворяют в 10 мл ацетонитрила и доводят объем раствора водой до метки.

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл раствора стандартного образца альфакальцидола и доводят объем раствора смесью ацетонитрил — вода 1:1 до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора той же смесью до метки.

Примечание

Примесь A: (5E,7E)-9,10-секохолеста-5,7,10(19)-триен- 1\alpha , 3\beta -диол [65445-14-9].

Примесь B: (5Z,7E)-9,10-секохолеста-5,7,10(19)-триен- 1\beta , 3\beta -диол [63181-13-5].

Примесь D: неизвестная структура.

Хроматографические условия

Колонка	150 x 2,1 мм, силикагель октадецилсилильный с полярными группами и этиленовыми мостиками, гибридный, эндкепированный, 1,7 мкм;
Температура колонки	32 °C;
Скорость потока	0,3 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 264 нм;
Объем пробы	5 мкл;
Время хроматографирования	2-кратное от времени удерживания пика альфакальцидола.

Относительное время удерживания соединений. Альфакальцидол — 1 (около 15 мин); пре-альфакальцидол — около 0,91; примесь A — около 0,94; примесь D — около 0,96; примесь B — около 1,1.

Идентификация примесей. Для идентификации пика примеси используют относительное время удерживания соединений, хроматограмма, прилагаемая к стандартному образцу альфакальцидола для проверки пригодности хроматографической системы, и хроматограмма раствора для проверки пригодности хроматографической системы используются для идентификации пиков примесей A и D, а также пре-альфакальцидола; хроматограмма, прилагаемая к стандартному образцу альфакальцидола для идентификации примеси B, и хроматограмма раствора для идентификации примеси B используются для идентификации пика примеси B.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика альфакальцидола должно быть не менее 10.

На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы:

• разрешение (RS) между пиками примеси D и альфакальцидола должно быть не менее 1,5;
• отношение максимум/минимум (p/v) между пиками пре-альфакальцидола и примеси A должно быть не менее 2,0;
• отношение максимум/минимум (p/v) между пиками примеси A и примеси D должно быть не менее 1,5.

Допустимое содержание примесей: Содержание каждой из примесей в субстанции в процентах вычисляют согласно методу нормирования (ОФС «Хроматография»):

• примеси A, B и D — не более 0,5% каждая;
• любая другая примесь — не более 0,10%;
• сумма примесей — не более 1,0%.

Не учитывают пик пре-альфакальцидола и пики, площадь которых менее площади основного пика на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы (менее 0,05%).

Потеря в массе при высушивании. Не более 0,3% (ОФС «Потеря в массе при высушивании», способ 3). Высушивают 0,1 г (точная навеска) субстанции в вакууме до постоянной массы при температуре 50 °C и остаточном давлении не более 0,67 кПа (5 мм рт. ст.).

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси» со следующими изменениями.

Хроматографируют раствор стандартного образца альфакальцидола и испытуемый раствор.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора стандартного образца альфакальцидола относительное стандартное отклонение площади пика альфакальцидола должно быть не более 1,0% (6 введений).

Содержание альфакальцидола C27H44O2 в субстанции в процентах в пересчете на сухое вещество (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 50 \cdot 100}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 50 \cdot (100 - W)} ,

где S1 — площадь пика альфакальцидола на хроматограмме испытуемого раствора;

S0 — площадь пика альфакальцидола на хроматограмме раствора стандартного образца альфакальцидола;

a1 — навеска субстанции, мг;

a0 — навеска фармакопейного стандартного образца альфакальцидола, мг;

P — содержание альфакальцидола в фармакопейном стандартном образце альфакальцидола, %;

W — потеря в массе при высушивании, %.

Примечание - Если на хроматограмме испытуемого раствора присутствует пик пре-альфакальцидола, то в расчетах используется сумма площадей пиков альфакальцидола и пре-альфакальцидола.

ХРАНЕНИЕ

В герметично укупоренной упаковке, под инертным газом, в защищенном от света месте при температуре от 2 до 8 °C.

---