ФС.2.1.0065.18. Фармакопейная статья. Бензилпенициллин натрия

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 № 749)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание»)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Бензилпенициллин натрия Бензилпенициллин Benzylpenicillinum natricum	ФС.2.1.0065.18 Взамен ГФ X, ст. 95

(2S,5R,6R)-3,3-диметил-7-оксо-6-[(2-фенилацетил)амино]-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат натрия

C16H17N2NaO4S	М.м. 356,37

Содержит не менее 96,0% и не более 102,0% бензилпенициллина натрия C16H17N2NaO4S в пересчете на сухое вещество.

Примечание. При определении активности биологическим методом общая активность субстанции (сумма пенициллинов) не менее 96%. Теоретическая активность бензилпенициллина натрия 1670 ЕД/мг. 0,5988 мкг химически чистой субстанции бензилпенициллина натрия соответствует одной единице действия (ЕД) (ОФС «Определение антимикробной активности антибиотиков методом диффузии в агар»).

Точность определения должна быть такой, чтобы доверительные пределы при P = 95% отклонялись от среднего значения не более чем на 5% (ОФС «Статистическая обработка результатов определения специфической фармакологической активности лекарственных средств биологическими методами»).

Средняя величина найденной активности должна быть не менее 1600 ЕД/мг.

Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок, слегка гигроскопичен. Легко разрушается при действии кислот, щелочей и окислителей, при нагревании в водных растворах, а также при действии пенициллиназы. Медленно разрушается при хранении в растворах при комнатной температуре.

Растворимость. Очень легко растворим в воде, растворим в спирте 90% и метаноле.

Подлинность.

1. ИК-спектрометрия. Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия бромидом, в области от 4000 до 400 см-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру стандартного образца бензилпенициллина натрия.

2. Тонкослойная хроматография (ОФС «Тонкослойная хроматография»).

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля силанизированного.

Подвижная фаза (ПФ). Аммония ацетата раствор 15%, предварительно доведенный уксусной кислотой ледяной до pH 5,0 — ацетон 70:30.

Испытуемый раствор. Растворяют 25,0 мг субстанции в 5,0 мл воды очищенной.

Раствор сравнения А. Растворяют 25 мг стандартного образца бензилпенициллина натрия в 5,0 мл воды очищенной.

Раствор сравнения Б. Растворяют 25 мг стандартного образца бензилпенициллина натрия и 25 мг стандартного образца феноксиметилпенициллина калия (CAS 132-98-9) в 5,0 мл воды.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. На линию старта пластинки наносят по 1 мкл испытуемого раствора (5 мкг), раствора сравнения А (5 мкг) и раствора сравнения Б (5 мкг; 5 мкг). Пластинку с нанесенными растворами сушат на воздухе, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет около 80 — 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат на воздухе до удаления следов растворителей, выдерживают над парами йода до проявления зон адсорбции и просматривают при дневном свете.

Пригодность хроматографической системы. Основная зона адсорбции на хроматограмме испытуемого раствора по положению, интенсивности окраски и величине должна соответствовать зоне адсорбции на хроматограмме раствора сравнения А.

Зоны адсорбции на линии старта не учитывают.

Результаты анализа считаются достоверными, если на хроматограмме раствора сравнения Б наблюдаются две четко разделенных зоны адсорбции.

3. Качественная реакция. Несколько кристаллов субстанции помещают на предметное стекло или в фарфоровую чашку, прибавляют 50 мкл раствора, состоящего из 1,0 мл 1 М раствора гидроксиламина гидрохлорида и 0,3 мл 1 М раствора натрия гидроксида. Через 2 — 3 мин к смеси прибавляют 50 мкл 1 М раствора уксусной кислоты и тщательно перемешивают, прибавляют 50 мкл 5% раствора меди (II) нитрата; должен образоваться осадок зеленого цвета.

4. Качественная реакция. Около 0,1 г субстанции сжигают в тигле. Субстанция дает характерную реакцию Б на натрий (ОФС «Общие реакции на подлинность»).

Удельное вращение. От +285 до +310 в пересчете на сухое безводное вещество (2% водный раствор субстанции, ОФС «Поляриметрия»).

<*> Прозрачность раствора. Свежеприготовленный 30% раствор субстанции в воде должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень мутности жидкостей»).

<*> Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании «Прозрачность раствора», должен выдерживать сравнение с эталоном Y5 (ОФС «Степень окраски жидкостей», метод 2).

Показатель поглощения. Оптическая плотность 0,188% водного раствора субстанции в кювете с толщиной слоя 1 см при длинах волн 280 нм и 325 нм должна быть не более 0,10 и от 0,80 до 0,88 в максимуме поглощения при длине волны 264 нм (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).

При необходимости раствор дополнительно разводят для измерения при длине волны 264 нм. Оптическую плотность определяют в пересчете на основание для неразбавленного раствора (1,8 мг/мл).

pH. От 5,5 до 7,5 (2% водный раствор, ОФС «Ионометрия», метод 3).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Растворы готовят непосредственно перед использованием.

Подвижная фаза А (ПФА). Калия дигидрофосфата 0,5 М раствор, доведенный фосфорной кислотой разведенной 10% до pH 3,5 +/- 0,1 — метанол — вода 10:30:60.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Калия дигидрофосфата 0,5 М раствор, доведенный фосфорной кислотой разведенной 10% до pH 3,5 +/- 0,1 — метанол — вода 10:40:50.

Испытуемый раствор А. Около 50 мг (точная навеска) субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Испытуемый раствор Б. 80,0 мг субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 20 мл, растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор сравнения А. Около 50 мг (точная навеска) стандартного образца бензилпенициллина натрия помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор сравнения Б. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 10 мг стандартного образца бензилпенициллина натрия и 10 мг фенилуксусной кислоты (примесь В, CAS 103-82-2), растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор сравнения В. 4,0 мл раствора сравнения А помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят водой до метки.

Хроматографические условия

Колонка	25 x 0,46 см силикагель октадецилсилильный для хроматографии (C18), 5 мкм;
Температура колонки	25 °C;
Скорость потока	1,0 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 225 нм;
Объем пробы	20 мкл.

Режим хроматографирования

Время, мин	ПФ А, %	ПФ Б, %	Режим
0 — tR	70	30	Изократический
tR — (tR + 20)	70 \rightarrow 0	30 \rightarrow 100	Линейный градиент
(tR + 20) — (tR + 35)	0	100	Изократический
(tR + 35) — (tR + 50)	70	30	Изократический
tR — время удерживания пика бензилпенициллина на хроматограмме раствора сравнения В.

Хроматографируют испытуемый раствор Б и раствор сравнения Б в изократическом режиме, раствор сравнения В и воду (холостой раствор) в градиентном режиме.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора сравнения Б разрешение (R) между пиками примеси В и бензилпенициллина должно быть не менее 6,0.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора Б:

• площадь пика любой примеси должна быть не более площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения В (не более 1%).

2-Этилгексановая кислота. Не более 0,5% (м/м) (ОФС «Определение 2-этилгексановой кислоты»).

Потеря в массе при высушивании. Не более 1,0% (ОФС «Потеря в массе при высушивании», способ 1). Для определения используют около 2,0 г (точная навеска) субстанции.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

<*> Аномальная токсичность. Субстанция должна быть нетоксичной (ОФС «Аномальная токсичность»). Тест-доза — 5000 ЕД (активного вещества) субстанции в 0,5 мл воды на мышь, внутривенно. Срок наблюдения 48 ч.

<*> Бактериальные эндотоксины. Не более 0,16 ЕЭ на 1 мг субстанции (ОФС «Бактериальные эндотоксины»).

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

<*> Стерильность. Субстанция должна быть стерильной (ОФС «Стерильность»).

---

<*> Контроль по показателям качества «Прозрачность раствора», «Цветность раствора», «Аномальная токсичность», «Бактериальные эндотоксины» и «Стерильность» проводят в субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.

Количественное определение. Испытание проводят методом ВЭЖХ по методике, описанной в разделе «Родственные примеси».

Хроматографируют испытуемый раствор А и раствор сравнения А в изократическом режиме.

Содержание бензилпенициллина натрия C16H17N2NaO4S в субстанции в процентах (X) в пересчете на сухое вещество вычисляют по формуле:

X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 100}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot (100 - W)} ,

где S1 — площадь пика бензилпенициллина натрия на хроматограмме испытуемого раствора А;

S0 — площадь пика бензилпенициллина натрия на хроматограмме раствора сравнения А;

a1 — навеска субстанции, мг;

a0 — навеска стандартного образца бензилпенициллина натрия, мг;

W — потеря в массе при высушивании, %;

P — содержание основного вещества в стандартном образце бензилпенициллина натрия, %.

Хранение. В плотно закрытой упаковке, в сухом, защищенном от света месте при температуре не выше 25 °C.

---