МУК 4.1.3646-20. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение содержания N-нитрозоаминов (N-диметилнитрозоамин, N-метилэтилнитрозоамин, N-диэтилнитрозоамин, N-дибутилнитрозоамин, N-дипропилнитрозоамин, N-пиперидиннитрозоамин, N-пирролидиннитрозоамин, N-морфолиннитрозоамин, N-дифенилнитрозоамин) в пищевой продукции (копченые мясные, мясо- и птицепродукты) методом хромато-масс-спектрометрии. Методические указания
Актуально на 09.11.2026.
Как цитировать: "МУК 4.1.3646-20. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение содержания N-нитрозоаминов (N-диметилнитрозоамин, N-метилэтилнитрозоамин, N-диэтилнитрозоамин, N-дибутилнитрозоамин, N-дипропилнитрозоамин, N-пиперидиннитрозоамин, N-пирролидиннитрозоамин, N-морфолиннитрозоамин, N-дифенилнитрозоамин) в пищевой продукции (копченые мясные, мясо- и птицепродукты) методом хромато-масс-спектрометрии. Методические указания". МУК 4.1.3646-20. https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-1-3646-20
(утв. Роспотребнадзором 20.08.2020)
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 20 августа 2020 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ИЗМЕРЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ N-НИТРОЗОАМИНОВ (N-ДИМЕТИЛНИТРОЗОАМИН, N-МЕТИЛЭТИЛНИТРОЗОАМИН, N-ДИЭТИЛНИТРОЗОАМИН, N-ДИБУТИЛНИТРОЗОАМИН, N-ДИПРОПИЛНИТРОЗОАМИН, N-ПИПЕРИДИННИТРОЗОАМИН, N-ПИРРОЛИДИННИТРОЗОАМИН, N-МОРФОЛИННИТРОЗОАМИН, N-ДИФЕНИЛНИТРОЗОАМИН) В ПИЩЕВОЙ ПРОДУКЦИИ (КОПЧЕНЫЕ МЯСНЫЕ, МЯСО- И ПТИЦЕПРОДУКТЫ) МЕТОДОМ ХРОМАТО-МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.3646-20
1. Разработаны Федеральным бюджетным учреждением науки «Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Т.С. Уланова, Н.В. Зайцева, Т.В. Нурисламова, Н.А. Попова, О.А. Мальцева, Г.И. Терентьев).
2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 20 августа 2020 г.
Свидетельство об аттестации № 00000008.11.18-01.00183-2014 от 22.11.2018.
I. Назначение и область применения
1.1. Настоящие методические указания (далее — МУК) определяют порядок газохроматографического анализа с масс-селективным детектированием для измерения массовой концентрации N-нитрозоаминов (N-диметилнитрозоамин, N-метилэтилнитрозоамин, N-диэтилнитрозоамин, N-дибутилнитрозоамин, N-дипропилнитрозоамин, N-пиперидиннитрозоамин, N-пирролидиннитрозоамин, N-морфолиннитрозоамин, N-дифенилнитрозоамин) в пищевой продукции (копченые мясные, мясо- и птицепродукты) в диапазоне концентраций от 0,0002 до 0,0032 мкг/г.
1.2. МУК предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы организациями, осуществляющими исследования в области безопасности и качества пищевой продукции и продовольственного сырья.
1.3 МУК носят рекомендательный характер.
II. Физико-химические и токсикологические свойства
2.1. N-нитрозоамины малоустойчивые вещества, стабильны только при температурах ниже 0 °C, являются жидкими или твердыми веществами желтого цвета. N-нитрозоамины являются высокотоксичными соединениями. При попадании в организм поражают печень, вызывают кровоизлияния. Большая часть N-нитрозосоединений обладает сильным канцерогенным действием даже при однократном действии, проявляют мутагенные свойства. N-нитрозодиметиламин обладает отдаленными эффектами: эмбриотропным, гонадотропным, мутагенным.
N-диметилнитрозоамин: CAS 62-75-9, формула C2H6N2O/(CH3)2NN = O, молекулярная масса — 148,0, Tкип, °C — 153, растворимость в воде хорошая, давление паров, Па при 20 °C — 360, класс опасности — 1, характеристичные ионы, m/z N-нитрозодиметиламина 74-42.
N-метилэтилнитрозоамин: CAS 10595-95-6, формула CH3(C2H5)N-NO, молекулярная масса — 88,13, Tкип, °C — 154,4, класс опасности — 1, характеристичные ионы, m/z N-метилэтилнитрозоамина 88-42.
N-диэтилнитрозоамин: CAS 55-18-5, формула C2H6N2O/(C2H5)2NN = O, молекулярная масса — 176,0, Tкип, °C — 175, растворимость в воде, г/100 мл при 20 °C — 10,6, класс опасности — 1, характеристичные ионы, m/z N-диэтилнитрозоамина 102-57.
N-дибутилнитрозоамин: CAS 924-16-3, формула (C4H9)2N-NO, молекулярная масса — 158,25, Tкип, °C — 250,6, характеристичные ионы, m/z N-дибутилнитрозамина 84-57.
N-дипропилнитрозоамин: CAS 621-64-7, формула (C3H7)2N-NO, молекулярная масса — 130,19, Tкип, °C — 206, характеристичные ионы, m/z N-нитрозодипропиламина 130-70.
N-пиперидиннитрозоамин: CAS 100-75-4, формула (CH2)5N-NO, молекулярная масса — 114,15, характеристичные ионы, m/z N-пиперидиннитрозоамина 114-55.
N-пирролидиннитрозоамин: CAS 930-55-2, формула C4H8N2O, молекулярная масса — 100,12, характеристичные ионы, m/z N-пирролидиннитрозоамина 100, 41, 68.
N-морфолиннитрозоамин: CAS 59-89-2, формула C4H8N2O2, молекулярная масса — 116,12, характеристичные ионы, m/z N-морфолиннитрозоамина 116, 56, 86.
N-дифенилнитрозоамин: CAS 86-30-6, формула C12H10N2O, молекулярная масса — 198,08, Tплав, °C — 66,5, мало растворим в воде, класс опасности 4, характеристичные ионы, m/z N-дифенилнитрозоамина 168, 169, 167.
III. Показатели точности измерений
3.1. При соблюдении всех регламентированных условий и проведения измерений в точном соответствии с данной методикой значения погрешности (и ее составляющих) измерений не превышают значений, приведенных в табл. 1.
Диапазон измерений массовой концентрации N-нитрозоаминов в пищевой продукции (копченые мясные, мясо- и птицепродукты), значения показателей точности, правильности и внутрилабораторной прецизионности измерений при доверительной вероятности 0,95
Границы относительной погрешности при доверительной вероятности P = 0,95 соответствуют относительной расширенной неопределенности измерений при коэффициенте охвата k = 2.
Значения показателя точности используют при:
- оформлении результатов измерений, выдаваемых лабораторией;
- оценке деятельности лабораторий на качество проведения измерений;
- оценке возможности использования результатов измерений при реализации методики измерений в конкретной лаборатории.
IV. Метод измерения
4.1. Измерение массовой концентрации N-нитрозоаминов (N-диметилнитрозоамин, N-метилэтилнитрозоамин, N-диэтилнитрозоамин, N-дибутилнитрозоамин, N-дипропилнитрозоамин, N-пиперидиннитрозоамин, N-пирролидиннитрозоамин, N-морфолиннитрозоамин, N-дифенилнитрозоамин) в пищевой продукции (копченые мясные, мясо- и птицепродукты) выполняют методом газохроматографического анализа с масс-спектрометрическим детектированием. Извлечение и концентрирование N-нитрозоаминов из пищевой продукции проводят с добавлением калия гидроокиси, последующей дистилляцией N-нитрозоаминов с перегретым водяным паром и концентрированием дистиллята на картриджах автоматической системы твердофазной экстракции (далее — ТФЭ), идентификации веществ по масс-спектрам и времени выхода; количественном хромато-масс-спектрометрическом определении по градуировочному графику.
Определению не мешают углеводороды, спирты. Длительность измерений 40 мин.
V. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы
5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в табл. 2.
Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы
| Наименование средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов | Обозначение и наименование документов, в соответствии с которыми выпускают средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы |
| 1 | 2 |
| Средства измерений | |
| Хромато-масс-спектрометрическая система, включающая ниже перечисленные блоки, модули и программы | |
| - хроматограф с полным электронным контролем газовых потоков и режимом цифрового контроля давления и потоков с автоматическим определением параметров колонки и поиск утечек по каналу газа-носителя; - масс-селективный детектор; - автосамплер высокотехнологичное устройство, предназначенное для автоматического ввода жидких проб; - программное обеспечение, контролирующее работу всего прибора, обеспечивающее сбор и хранение всех масс-спектров в процессе проведения хромато-масс-спектрометрического анализа, обеспечивающее обработку результатов измерений, вывод и расчет хроматограмм, вывод и вычитание фона масс-спектров, количественный анализ, поиск и сравнение с библиотекой масс-спектров; - библиотека масс-спектров | Диапазон массовых чисел: от 1,6 до 700 а.е.м.; СКО выходного сигнала при автоматическом дозировании: - по высотам пиков 4%; - по временам удерживания 0,008%. СКО выходного сигнала при ручном дозировании: - по высотам 6%; - по временам удерживания 0,1%. режим импульсный без деления потока, температура ионного источника 230 °C, температура квадрупольного масс-анализатора 150 °C, ток эмиссии 70 эВ |
| Секундомер механический 60-минутная шкала с ценой деления 1 мин, 60-секундная шкала с ценой деления 0,2 с | ТУ 25-1894.003 |
| Микрошприцы серии МШ-10, диапазон дозируемого объема, (1 — 10) мм3 с ценой деления 0,2 мм3, предел допускаемого относительного СКО случайной составляющей погрешности: +/- 1% | ТУ 2.833.106 |
| Весы лабораторные равноплечные второго класса точности; с наибольшим пределом взвешивания 200 г пределом допустимой погрешности взвешивания +/- 0,15 мг | ГОСТ 24104 |
| Колбы мерные 2-100-2, 2-1000-2 | ГОСТ 1770 |
| Цилиндр 1-100-2 класс точности 2 | ГОСТ 1770 |
| Дозаторы механические переменного объема дозирования (1 — 5) см3 с одноразовыми наконечниками. Предел допустимого относительного среднего квадратического отклонения фактического объема дозы 1% при температуре (22 +/- 2) °C | ГОСТ 28311 |
| Дозаторы механические переменного объема дозирования (0,100 — 1,000) см3 с одноразовыми наконечниками. Предел допустимого относительного среднего квадратического отклонения фактического объема дозы (0,8 — 0,3)% при температуре (22 +/- 2) °C | ГОСТ 28311 |
| Дозаторы механические переменного объема дозирования (0,0020 — 0,200) см3 с одноразовыми наконечниками. Предел допустимого относительного среднего квадратического отклонения фактического объема дозы (0,7 — 0,3)% при температуре (22 +/- 2) °C | ГОСТ 28311 |
| Барометр-анероид с диапазоном измерения атмосферного давления от 80 до 106 кПа (от 600 до 800 мм рт. ст.) и пределом допускаемой основной погрешности измерения (при введении поправок) не более +/- 0,2 кПа (+/- 1,5 мм рт. ст.) | - |
| Термогигрометр. Предел допускаемой абсолютной погрешности измерения температуры в диапазоне от 0 до 50 °C не более +/- 0,5 °C. Предел допускаемой абсолютной погрешности измерения относительной влажности в диапазоне от 0 до 98% не более +/- 3% | - |
| Примечания. Допускается применение других средств измерений, обеспечивающих требуемую точность и диапазон измерений по сравнению с перечисленными | |
| Реактивы | |
| Вода для лабораторного анализа степень 1 | ГОСТ Р 52501 |
| Стандартный образец состава раствора смеси N-нитрозоаминов: N-диметилнитрозоамин (CAS 62-75-9) массовая доля основного вещества N-диметилнитрозоамина >= 99,90% | |
| массовая концентрация N-нитрозодиметиламина в интервале допускаемых аттестованных значений от 1998,6 до 2000 мкг/мл; | границы допускаемых значений расширенной неопределенности +/- 70% |
| N-метилэтилнитрозоамин (CAS 10595-95-6) массовая доля основного вещества N-метилэтилнитрозоамина >= 99,80% | |
| массовая концентрация N-метилэтилнитрозоамина в интервале допускаемых аттестованных значений от 1996,2 до 2000 мкг/мл; | границы допускаемых значений расширенной неопределенности +/- 70% |
| N-диэтилнитрозоамин (CAS 55-18-5) массовая доля основного вещества N-диэтилнитрозоамина >= 99,80% | |
| массовая концентрация N-диэтилнитрозоамина в интервале допускаемых аттестованных значений от 1998,0 до 2000 мкг/мл; | границы допускаемых значений расширенной неопределенности +/- 72% |
| N-нитрозодипропиламин CAS 621-64-7) массовая доля основного вещества N-нитрозодипропиламина >= 99,90% | |
| массовая концентрация N-нитрозодипропиламина в интервале допускаемых аттестованных значений от 1997,6 до 2000 мкг/мл; | границы допускаемых значений расширенной неопределенности +/- 76% |
| N-дибутилнитрозоамин (CAS 924-16-3) массовая доля основного вещества N-дибутилнитрозоамина >= 99,90% | |
| массовая концентрация N-дибутилнитрозоамина в интервале допускаемых аттестованных значений от 1997,6 до 2000 мкг/мл; | границы допускаемых значений расширенной неопределенности +/- 300% |
| N-пиперидиннитрозоамин (CAS 100-75-4) массовая доля основного вещества N-пиперидиннитрозоамина >= 99,90% | |
| массовая концентрация N-пиперидиннитрозоамина в интервале допускаемых аттестованных значений от 1998,4 до 2000 мкг/мл; | границы допускаемых значений расширенной неопределенности +/- 92% |
| N-пирролидиннитрозоамин (CAS 930-55-2) массовая доля основного вещества N-пирролидиннитрозоамина >= 99,90% | |
| массовая концентрация N-пирролидиннитрозоамина в интервале допускаемых аттестованных значений от 1998,4 до 2000 мкг/мл; | границы допускаемых значений расширенной неопределенности +/- 120% |
| N-морфолиннитрозоамин (CAS 59-89-2) массовая доля основного вещества N-морфолиннитрозоамина >= 99,90% | |
| массовая концентрация N-морфолиннитрозоамина в интервале допускаемых аттестованных значений от 1998,0 до 2000 мкг/мл; | границы допускаемых значений расширенной неопределенности +/- 220% |
| N-дифениламиннитрозоамин (CAS 86-30-6) массовая доля основного вещества N-дифениламиннитрозоамина >= 99,60% | |
| массовая концентрация N-дифениламиннитрозоамина в интервале допускаемых аттестованных значений от 1932,4 до 2000 мкг/мл) массовой концентрации 2000 мкг/мл в метаноле | границы допускаемых значений расширенной неопределенности +/- 180% |
| Калий двухромовокислый чистый для анализа | ГОСТ 4220 |
| Кислота серная химически чистая | ГОСТ 4204 |
| Калия гидроокись, хч | ГОСТ 24363 |
| Метанол, с массовой долей основного вещества не менее 99,9% | CAS 67-56-1 |
| Кислота бромистоводородная, чда | ГОСТ 2062 |
| Кислота уксусная, хч ледяная | ГОСТ 61 |
| Метилен хлористый с массовой долей основного вещества метилена хлористого не менее 99,90% | CAS 75-09-2 |
| Гелий газообразный марка «А», в баллонах | ТУ 20.11.11-002-01868373 |
| Азот газообразный особой чистоты 1 сорт, объемная доля азота, %, не менее 99,999 | ГОСТ 9293 |
| Примечание. Допускается использование реактивов аналогичной или более высокой квалификации, изготовленных по другим нормативным документам, в том числе и импортных | |
| Вспомогательные устройства и материалы | |
| Колонка хроматографическая капиллярная из кварцевого стекла серии HP-FFAP длиной 50 м, внутренним диаметром 0,320 мм и толщиной пленки неподвижной фазы 0,50 мкм | |
| Автоматическая система для твердофазной экстракции | |
| Картридж на угольной основе | |
| Редуктор кислородный | ТУ 3645-032-00220531 |
| Установка для перегонки с водяным паром Общее давление насыщенного пара в момент кипения, равное внешнему атмосферному давлению, сумма парциальных давлений паров компонентов P = 760 мм рт. ст. | - |
| Колба круглодонная К-2-100-34 ТС, К-2-250-34 ТС, К-2-500-34 ТС, К-2-1000-34 | ГОСТ 25336 |
| Холодильник Либиха ХПТ-1-100-14/23-14/23 с алонжем | ГОСТ 25336 |
| Парообразователь емкостью (2 — 2,5) дм3 | - |
| Стакан В-1-2000 ТС | ГОСТ 25336 |
| Стеклянная палочка ХС1 | ГОСТ 21400-75 |
| Облучатель-рециркулятор ультрафиолетовый бактерицидный | - |
| Сушильный шкаф | ТУ 92-00243346-01-92 |
| Бумага фильтровальная лабораторная марки ФБ | ГОСТ 12026 |
| Примечание. Допускается использование других вспомогательных устройств и материалов аналогичного назначения, технические характеристики которых не уступают указанным | |
VI. Требования безопасности
6.1. При выполнении работ необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007.
6.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией и соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004, и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.
6.3. При выполнении измерений с использованием хромато-масс-спектрометра соблюдают правила электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019 и инструкцией по эксплуатации прибора.
6.4. При работе с сосудами, работающими под давлением, необходимо соблюдать правила их безопасной эксплуатации <1>.
<1> Правила промышленной безопасности опасных производственных объектов, на которых используется оборудование, работающее под избыточным давлением, утвержденные приказом Ростехнадзора от 25.03.2014 № 116.
6.5. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать гигиенические нормативы <2>, а также соответствовать ГОСТ 12.1.005.
<2> ГН 2.2.5.3532-18 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны»; ГН 2.2.5.2308-07 «Ориентировочные безопасные уровни воздействия (ОБУВ) вредных веществ в воздухе рабочей зоны».
6.6. Работу с N-нитрозоаминами, стандартами, другими химическими соединениями и растворителями следует проводить в вытяжном шкафу по ТУ 25-11.1630 с использованием индивидуальных средств защиты (очки, перчатки и др.).
6.7. В лаборатории, где проводится работа с летучими N-нитрозоаминами необходимо всегда иметь 2 — 3% раствор газообразного бромоводорода (HBr) в уксусной кислоте для разрушения N-нитрозоаминов при попадании их на рабочие места и пол.
6.8. В целях разрушения летучих N-нитрозоаминов в воздухе по окончании работы помещение необходимо обработать ультрафиолетовым светом.
6.9. N-нитрозоамины хранят в специальном холодильнике в отсутствие анализируемых проб.
6.10. Работа с продуктами питания осуществляется в соответствии с санитарно-эпидемиологическими правилами <3>.
<3> СанПиН 2.3.2.1078-01 «Продовольственное сырье и пищевые продукты. Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов».
VII. Требования к квалификации операторов
7.1. К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие квалификацию не ниже инженера-химика и опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения хромато-масс-спектрометрического анализа.
VIII. Условия измерений
8.1 При выполнении измерений в лаборатории соблюдают следующие условия:
- температура окружающего воздуха (20 +/- 5) °C;
- атмосферное давление от 84,0 до 106,7 кПа (630 — 800 мм рт. ст.);
- относительная влажность воздуха от 30 до 80%;
- напряжение в сети (220 +/- 10) В;
- частота переменного тока (50 +/- 10) Гц.
Выполнение измерений на хромато-масс-спектрометре проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
Контроль температуры и относительной влажности воздуха проводят по показаниям термогигрометра, контроль атмосферного давления — по показаниям барометра-анероида.
IX. Подготовка к выполнению измерений
9.1 Подготовка посуды.
9.1.1. Используемую посуду замачивают в свежеприготовленном 3% растворе калия двухромовокислого в серной кислоте, промывают проточной водопроводной водой, ополаскивают бидистиллированной водой и сушат в сушильном шкафу при температуре (105 — 110) °C.
9.2 Подготовка хроматографической системы.
Подготовку хроматографа к работе осуществляют в соответствии с инструкцией по эксплуатации хроматографа.
9.2.1 Кондиционирование кварцевой капиллярной колонки.
Новую кварцевую капиллярную колонку предварительно кондиционируют, нагревая в термостате хроматографа ступенчато, начиная с 70 °C до 250 °C в течение 2 часов и выдерживают при 250 °C в течение суток. После охлаждения термостата до комнатной температуры выход колонки подсоединяют к устройству сопряжения с масс-спектрометром и проверяют стабильность нулевой линии при рабочей температуре термостата колонок.
9.2.2 Устанавливают режим работы хромато-масс-спектрометра в соответствии со следующими условиями:
Параметры и условия режима работы хромато-масс-спектрометра
Записывают нулевую линию при установленных режимных параметрах. При отсутствии флуктуации приступают к работе.
9.3 Приготовление растворов
9.3.1. Приготовление 3%-го раствора калия двухромовокислого в серной кислоте.
В термостойкий стакан вместимостью 2 дм3 помещают 50 г калия двухромовокислого, осторожно приливают 1 дм3 концентрированной серной кислоты по палочке порциями по 5 — 7 см3, тщательно перемешивая. Раствор используют в день приготовления.
9.3.2 Приготовление 60%-го раствора серной кислоты.
В термостойкий химический стакан стеклянным цилиндром помещают 36 см3 бидистиллированной воды, при непрерывном помешивании стеклянной палочкой приливают стеклянным цилиндром 60 см3 концентрированной серной кислоты. Раствор охлаждают. Срок хранения неограничен (хранят в посуде из темного стекла).
9.3.3 Приготовление 2 — 3%-го раствора бромисто-водородной кислоты.
В мерную колбу вместимостью 1000 см3 цилиндром помещают 43,5 см3 бромисто-водородной кислоты (46% раствор), содержимое колбы доводят до метки бидистиллированной водой и тщательно перемешивают. Срок хранения — месяц (хранят в посуде из темного стекла).
9.3.4 Приготовление исходного раствора N-нитрозоаминов.
Исходный раствор N-нитрозоаминов готовят из ГСО C = 2 мг/см3 или 2000 мкг/мл. В мерную колбу вместимостью 25 см3 дозатором добавляют метилового спирта в объеме 10 см3, вводят микрошприцем по 0,002 см3 ГСО N-нитрозоаминов (C = 2 мг/см3). Массовая концентрация N-нитрозоаминов в исходном растворе составляет 0,16 мкг/см3. Срок хранения раствора не более пяти часов.
9.3.5 Приготовление градуировочных растворов.
Градуировочные растворы N-нитрозоаминов готовят в мерных колбах вместимостью 100 см3. Для этого в каждую колбу вносят дозатором по 50 см3 бидистиллированной воды и добавляют микрошприцом или дозатором исходный раствор для градуировки в соответствии с табл. 4, содержимое колбы доводят до метки бидистиллированной водой и тщательно перемешивают. Срок хранения растворов при температуре от 4 до 10 °C не более 5 часов.
Растворы для установления градуировочной характеристики
Концентрация (мкг/г) рассчитана на навеску колбасного продукта 20 г.
9.4 Построение градуировочной характеристики.
Градуировочные характеристики в виде линейной зависимости между площадью пика молекулярных ионов N-нитрозоаминов на хроматограмме (мВ) и количеством определяемого компонента в растворе (нг) устанавливают методом абсолютной градуировки. Установление градуировочной характеристики для каждого компонента, обработка и хранение результатов градуировки проводят автоматически с использованием программно-аппаратного комплекса.
Градуировочный раствор (табл. 4) помещают в перегонную колбу объемом 500 см3 установки для перегонки ((tпарообразователя = (100 +/- 5) °C и tколбы с градуировочным раствором = (80 +/- 5) °C), добавляют 1,5 г калия гидроокиси. С помощью перегретого водяного пара, образуемого в парообразователе, выполняют процедуру отгонки. Нагрев перегонной колбы с пробой продукта и паровика осуществляют с помощью закрытых электрических плиток. Дистиллят, сконденсированный в холодильнике, собирают в объеме 70 см3 в коническую колбу-приемник. Затем дистиллят пропускают через угольный картридж объемом 6 см3 автоматической системы ТФЭ, элюирование осуществляют хлористым метиленом объемом 2,5 см3.
По истечении 30 мин экстракт хлористого метилена объемом 0,002 см3 через испаритель вводят с помощью автосамплера в хроматографическую колонку хроматографа и анализируют при условиях по п. 9.2.2. Каждый градуировочный раствор хроматографируют два раза. Процедуру повторяют аналогично для каждого градуировочного раствора в порядке возрастания содержания N-нитрозоаминов. На полученной хроматограмме определяют площади пиков (безразмерные компьютерные единицы, бке) молекулярных ионов для N-нитрозоаминов m/z, рассчитывают средние значения площади пиков N-нитрозоаминов для каждого градуировочного раствора и проверяют приемлемость результатов параллельных определений площадей пиков.
Выходные сигналы считают приемлемыми при выполнении условия:
S_{max} - S_{min} \leq 0,01 \cdot r_{s} \cdot \frac{S_{max} + S_{min}}{2} , где (1)
Smax - максимальная площадь пика для соответствующего градуировочного раствора, мВ;
Smin — минимальная площадь пика для соответствующего градуировочного раствора, мВ;
rs — предел повторяемости площади пика градуировочного раствора, rs = %.
Предел повторяемости площади пика представляют в виде рассчитанного относительного стандартного отклонения.
Результат проверки признается положительным при выполнении условия (1). Если условие не выполняется, то измерение градуировочных растворов повторяют, устранив причину неудовлетворительных результатов.
По полученным результатам рассчитывают среднее значение площади пика для каждого раствора и строят градуировочную характеристику.
Градуировочная характеристика признается приемлемой, если коэффициент корреляции градуировочной характеристики не менее значения 0,995, в противном случае измерение градуировочных растворов повторяют, устранив причину неудовлетворительных результатов.
Процедуру градуировки проводят 1 раз в 3 месяца, а также при внедрении методики в практику лаборатории, после ремонта хромато-масс-спектрометра или при получении отрицательных результатов контроля стабильности градуировочной характеристики по п. 9.5.
9.5 Контроль стабильности градуировочной характеристики.
Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят 1 раз в квартал в анализируемой серии измерений. Образцами для контроля стабильности являются градуировочные растворы, выбранные таким образом, чтобы массовая концентрация N-нитрозоаминов соответствовала нижней, верхней границам и середине диапазона построения градуировочной характеристики. Градуировка признается стабильной при выполнении условия:
|mГХ m — mГХ| <= 0,08·mГХ, где (2)
mГХ — расчетное содержание N-нитрозоаминов в градуировочном растворе, нг;
mГХm — результат измерения содержания N-нитрозоаминов в образце для градуировки, нг.
При невыполнении условия стабильности градуировочной характеристики измерения повторяют с другим градуировочным раствором. При повторном невыполнении условия стабильности градуировочной характеристики выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики.
9.6 Отбор и хранение проб.
Отбор проб проводят в соответствии с нормативно-технической документацией на конкретный вид анализируемой продукции.
Допускается хранение отобранных образцов в морозильной камере при температуре минус 18 до минус 8 °C от 1 до 3 суток в зависимости от сроков реализации продукции.
X. Выполнение измерений
10.1. Выполнение измерений пробы пищевого продукта (копченые мясные, мясо- и птицепродукты).
От пробы отбирают две навески массой 20 — 50 г. Массу навесок регистрируют до второго знака после запятой. Каждую навеску помещают в перегонную колбу вместимостью 500 см3 установки для перегонки ((tпарообразователя = (100 +/- 5) °C и tколбы с образцом пищевого продукта = (80 +/- 5) °C), соединенную с паровиком и прямым холодильником, добавляют 1,5 г калия гидроокиси, 50 — 100 см3 бидистиллированной воды и N-нитрозоамины отгоняют с перегретым водяным паром, собирая 70 см3 дистиллята. Нагрев перегонной колбы с пробой продукта и паровика осуществляют с помощью закрытых электрических плиток. Затем дистиллят пропускают через угольный картридж объемом 6 см3 автоматической системы ТФЭ, элюирование осуществляют хлористым метиленом объемом 2,5 см3. По истечении 30 мин экстракт хлористого метилена объемом 0,002 см3 через испаритель вводят в хроматографическую колонку хроматографа.
На хроматограмме с помощью программного обеспечения вычисляют площадь пика и по градуировочным характеристикам находят массу каждого компонента (mГХ, нг) в растворе хлористого метилена.
XI. Обработка результатов измерений
11.1. Массовую концентрацию (C, мкг/г) каждого определяемого компонента (N-нитрозоамина) в пробе пищевого продукта (копченые мясные, мясо- и птицепродукты) рассчитывают по формуле:
\text{С } = \frac{m_{\text{ГХ}}}{m \cdot 1000} , где (3)
mГХ — масса каждого N-нитрозоамина, установленная по градуировочной характеристике, нг;
m — масса пробы пищевого продукта, взятая для анализа, г;
1000 — коэффициент перевода нг в мкг.
11.2. За окончательный результат измерения принимают среднее арифметическое значение двух результатов измерений ( \overline{C} , мкг/г), полученных в условиях повторяемости (параллельных определений), для которых выполняется условие:
|C_{1} - C_{2}| \leq 0,01 \cdot r \cdot \frac{C_{1} + C_{2}}{2} , где (4)
r — предел повторяемости, %. Значение предела повторяемости для каждого определяемого N-нитрозоамина приведено в табл. 5.
При невыполнении условия (4) получают дополнительно еще два результата измерений. За результат измерений принимают среднее арифметическое четырех результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, для которых выполняется условие:
|C_{max,4} - C_{min,4}| \leq 0,01 \cdot CR_{0,95}(4) \cdot \frac{C_{1} + C_{2} + C_{3} + C_{4}}{4} , где (5)
CR0,95(4) — критический диапазон, %. Значение критического диапазона N-нитрозоамина приведено в табл. 5.
При невыполнении условия (5) в качестве окончательного результата измерений принимают медиану четырех результатов измерений, полученных в условиях повторяемости (параллельных определений). Дополнительно выявляют и устраняют причины, приводящие к невыполнению условий (4) и (5).
Диапазон измерений содержания N-нитрозоаминов в пробах пищевой продукции, значения пределов повторяемости, критического диапазона, внутрилабораторной прецизионности при доверительной вероятности P = 0,95
XII. Оформление результатов измерений
12.1 Результат измерений в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде:
(\overline{C} \pm \Delta_{\text{л}}) , мкг/г, где
\overline{C} — результат измерений, полученный в соответствии с прописью методики, мкг/г;
\pm \Delta_{\text{л}} — границы абсолютной погрешности измерения массовой концентрации N-нитрозоамина при доверительной вероятности P = 0,95, мкг/г, значение \pm \Delta_{\text{л}} рассчитывают по формуле:
\Delta_{\text{л}} = \frac{\delta_{\text{л}} \cdot \overline{C}}{100} , где (6)
\delta_{\text{л}} — границы относительной погрешности измерений концентрации N-нитрозоаминов при доверительной вероятности P = 0,95, %. Значение \delta_{\text{л}} приведено в табл. 1.
Численное значение \overline{C} должно оканчиваться цифрой того же разряда, что и значение погрешности (\Delta_{\text{л}}) .
XIII. Контроль качества результатов измерений
13.1. Контроль качества результатов измерений при реализации методики в лаборатории организуют и проводят путем проведения:
- проверки приемлемости результатов измерений, получаемых в условиях повторяемости;
- контроля внутрилабораторной прецизионности;
- оперативный контроль правильности процедуры выполнения измерений (с применением метода добавок);
- контроля стабильности результатов измерений.
13.2 Контроль внутрилабораторной прецизионности.
Образцами для контроля результатов измерений, получаемых в условиях внутрилабораторной прецизионности, являются образцы продукта (копченые мясные, мясо- и птицепродукты) с внесенными в них добавками растворов N-нитрозоаминов, подготовленные в соответствии с п. 9.3.
При контроле внутрилабораторной прецизионности абсолютное расхождение двух результатов анализа одной и той же пробы, при вариации факторов время, оператор, не должно превышать предела внутрилабораторной прецизионности Rл:
\frac{|C_{1} - C_{2}|}{(C_{1} + C_{2})2} \cdot 100\% \leq R_{\text{л}} , где (7)
C1 и C2 - результаты измерений концентраций N-нитрозоаминов, полученные в условиях внутрилабораторной прецизионности при вариации факторов время, оператор, мкг/г;
Rл — предел внутрилабораторной прецизионности, значение предела внутрилабораторной прецизионности приведено в табл. 5.
Если условие (7) не выполняется, процедуру повторяют. При повторном превышении предела внутрилабораторной прецизионности измерения приостанавливают до выяснения причин, приводящих к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.3. Оперативный контроль процедуры измерений с использованием метода добавок.
Оперативный контроль процедуры выполнения измерений с использованием метода добавок проводят путем сравнения результата отдельно взятой контрольной процедуры Кк с нормативом контроля К.
Результат контрольной процедуры Кк рассчитывают по формуле:
\text{К}_{\text{к}} = |\overline{C}\prime - \overline{C} - \text{С}_{\text{д}}| , где (8)
\overline{C}\prime — результат измерений концентрации N-нитрозоаминов в пробе с известной добавкой — среднее арифметическое двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, расхождение между которыми удовлетворяет условию (4);
\overline{C} — результат измерений концентрации N-нитрозоамина в исходной пробе — среднее арифметическое двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, расхождение между которыми удовлетворяет условию (4);
В качестве добавки используют растворы N-нитрозоаминов, приготовленные по п. 9.3.4.
Норматив контроля К рассчитывают по формуле:
\text{К } = \sqrt{\Delta_{\text{л},\text{С}_{\text{с}}\prime_{\text{р}}}^{2} + \Delta_{\text{л},\text{С}_{\text{ср}}}^{2}} , где (9)
\Delta_{\text{л},\text{С}_{\text{с}}\prime_{\text{р}}} , \Delta_{\text{л},\text{С}_{\text{ср}}} — значения характеристики погрешности результатов измерений.
Процедуру измерений признают удовлетворительной, при выполнении условия:
При невыполнении условия (10) контрольную процедуру повторяют. При повторном невыполнении условия (10) измерения приостанавливают до выяснения причин, приводящих к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.4. Оперативный контроль процедуры измерений, а также реализуемые процедуры контроля стабильности результатов выполняемых измерений, приводят в документах лаборатории, устанавливающих порядок и содержание работ по организации методов контроля стабильности результатов измерений в пределах лаборатории.
Библиографические ссылки
1. СанПиН 2.3.2.1078-01 «Продовольственное сырье и пищевые продукты. Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов».
2. ГН 2.2.5.3532-18 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны».
3. ГН 2.2.5.2308-07 «Ориентировочные безопасные уровни воздействия (ОБУВ) вредных веществ в воздухе рабочей зоны».
4. Приказ Ростехнадзора от 25.03.2014 № 116 «Об утверждении Федеральных норм и правил в области промышленной безопасности „Правила промышленной безопасности опасных производственных объектов, на которых используется оборудование, работающее под избыточным давлением“.»
5. ГОСТ Р ИСО 5725-6 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике».
6. ГОСТ Р 53228 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».
7. ГОСТ 12.1.019 «Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
8. ГОСТ 12.0.004 «Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения».
9. ГОСТ 12.1.004 «Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования».
10. ГОСТ 12.1.005 «Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны».
11. ГОСТ 12.1.007 «Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».
12. ГОСТ 12.4.009 «Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».
13. ГОСТ Р 53228 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».
14. ГОСТ Р 52501 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».
15. ГОСТ 25336 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».
16. ГОСТ 2062 «Реактивы. Кислота бромистоводородная. Технические условия».
17. ГОСТ 61 (СТ СЭВ 5375) «Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия».
ГОСТ 9293 (ИСО 2435) «Азот газообразный и жидкий. Технические условия».
19. ГОСТ 1770 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».
20. ГОСТ 3022 «Водород технический. Технические условия».
21. ГОСТ 4204 (СТ СЭВ 3856) «Реактивы. Кислота серная. Технические условия».
22. ГОСТ 12026 «Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия».
23. ГОСТ 24363 «Реактивы. Калия гидроокись. Технические условия».
24. ГОСТ 28311 «Дозаторы медицинские лабораторные. Общие технические требования и методы испытаний».
25. ГОСТ 9792 «Колбасные изделия и продукты из свинины, баранины, говядины и мяса других видов убойных животных и птиц. Правила приемки и методы отбора проб».
26. ТУ 2.833.106 «Микрошприцы серии МШ-10».
27. ТУ 2121-278-00204197 «Сульфаминовая кислота».
28. ТУ 16-531.743 «Электрошкаф СНВ С-4,5.4,5.4/3-И1. Технические условия».
29. ТУ 25-11.1630 «Шкаф вытяжной химический».
30. ТУ 0271-001-45905715 «Гелий газообразный высокой чистоты (сжатый). Технические условия».
31. ТУ 3645-032-00220531 «Редукторы баллонные одноступенчатые малогабаритные для газопламенной обработки».