МУК 4.1.1228-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств спироксамина в воде, почве, зерне, зеленой массе и соломе злаковых культур, винограде методом газожидкостной хроматографии. Методические указания

(утв. Минздравом России 16.03.2003)

16 марта 2003 года

4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ СПИРОКСАМИНА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЗЕРНЕ, ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ И СОЛОМЕ ЗЛАКОВЫХ КУЛЬТУР, ВИНОГРАДЕ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.1228-03

1 июля 2003 года

1. Сборник подготовлен: Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (проф. Т.В. Юдина); Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева (проф. В.А. Калинин) при участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России (А.П. Веселов). Разработчики методик контроля указаны в конце каждой из них.

2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по госсанэпиднормированию при Минздраве России.

3. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 16 марта 2003 года.

4. Введены впервые.

1. Вводная часть

Название действующего вещества: спироксамин (ИСО).

Торговое название: Фалькон.

Фирма-производитель: Байер, Германия.

8-третбутил-1,4-диоксаспиро[4,5]декан-2-ил-метил(этил)(пропил)-амин (IUPAC).

Структурная формула (не приводится).

    Эмпирическая формула: С  H  NO .
                           18 35  2

Молекулярная масса: 297,5.

Существует в виде смеси диастереоизомеров 1:2 = 49 — 56%:51 — 44%. Ниже приведены (если не указано особо) свойства для смеси диастереоизомеров.

Вязкая жидкость бледно-желтого цвета без запаха. Температура кипения 120 °С при 6,7 Ра. Давление паров 9,7 mРа (20 °С) и 17 mРа (25 °С) для изомеров 1 и 2, соответственно.

Хорошо растворим в органических растворителях. Растворимость при 20 °С в ацетоне, ацетонитриле, дихлорметане, гексане, пропаноле, толуоле более 200 г/л. Растворимость в воде при 20 °С (г/л): при рН 3 — > 200; при рН 7 — 0,470 (изомер 1) и 0,340 (изомер 2); при рН 9 — 0,014 (изомер 1) и 0,010 (изомер 2).

    Коэффициент   распределения   в   системе   н-октанол  -  вода
K   lg P = 2,79 (изомер 1) и 2,92 (изомер 2).

ow

    Спироксамин  не  разлагается  в  течение  30 дней  при 25 °С в
водных  растворах с  диапазоном рН  от 5 до 9. Период  полураспада
изомера 1 и изомера  2  в  водных  растворах  с  рН 2,1  при 37 °С
6,1 и 15,4 ч, соответственно. Изомер 1 разрушается  при повышенных

температурах. Изомер 2 термостабилен.

Значения рК составляют 6,9 как для изомера 1, так и для изомера 2.

ЛД для крыс 500 — 595 мг/кг. Класс токсичности по ВОЗ — III. 50

Гигиенические нормативы для спироксамина:

ПДК в почве (мг/кг) — 0,4

ОДУ в воде водоемов (мг/куб. дм) — 0,0025

МДУ в зерне хлебных злаков (мг/кг) — 0,2

ВМДУ в винограде — 0,1

Область применения: Фалькон, КЭ — комбинированный фунгицид широкого спектра действия на посевах зерновых культур и виноградниках, содержит спироксамина 250 мг/л + тебуконазола 167 г/л + триадименола 43 г/л.

2. Методика определения остаточных количеств спироксамина в воде, почве, зерне, зеленой массе и соломе злаковых культур, винограде методом газожидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1 Принцип метода

Методика основана на извлечении спироксамина из проб растворителем с последующей очисткой перераспределением между двумя не смешивающимися жидкостями и на колонке с окисью алюминия или флорисилом. Количественное определение проводят методом газожидкостной хроматографии с термоионным детектором.

2.1.2 Избирательность метода

Избирательность метода обеспечивается очисткой экстрактов анализируемых проб, сочетанием селективного детектора и условий хроматографирования. В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых для борьбы с сорной растительностью, защиты овощных и масличных культур от вредителей и болезней (хлор и фосфорорганические пестициды, амиды, тио- и дитиокарбаматы, синтетические пиретроиды).

2.1.3 Метрологическая характеристика метода

Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1 — 2.

Таблица 1

МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ МЕТОДА

Таблица 2

СПИРОКСАМИНА ПРИ P = 0,95 и N = 5

Минимально детектируемое количество спироксамина для хроматографа «Цвет» серии 500 с термоионным детектором — 2,5 нг, для импортных хроматографов (HP 5840, PYE UNICAM 204) — 0,5 нг.

Граница суммарной погрешности измерения — 12%.

Линейный диапазон детектирования («Цвет-550») — 2,5 — 25 нг, для импортных хроматографов — 1 - 20 нг.

2.2. Реактивы и материалы

Спироксамин (KWG 4168) аналитический стандарт, 99,0% (Байер АГ, Германия) Алюминия оксид II степени активности по Брокману ТУ 6-09-3916-75 Флорисил для хроматографии (0,150 — 0,250 мм), фирмы Merck, имп. Азот газообразный высокой чистоты ТУ 6-16-40-14-88 Гелий очищенный марки Б в баллонах с

    редуктором                                    МРТУ 6-09-374-86
    Ацетон, х.ч.                                  ТУ 6-09-3513-82
    н-Гексан, ч., свежеперегнанный                ТУ 6-09-3375-78

Натрий сернокислый безводный, ч.д.а.,

свежепрокаленный ГОСТ 4166-76 Гидроксид натрия, х.ч., 0,25 М и 1 М водные растворы ГОСТ 4328-77 Хлористый метилен, х.ч. ТУ 6-09-2662-77 Вода дистиллированная ГОСТ 6709-72 Насадки для колонок: 5% SP-2100 на хромосорбе W (0,20 — 0,25 мм), имп. 5% SE-30 на хроматоне N-Super (0,16 — 0,20 мм), имп. Неподвижная жидкая фаза OV-17, Супелко Инк, США Неподвижная жидкая фаза PS-400, Alltech Associates, Inc., США Неподвижная жидкая фаза SE-30, Супелко Инк, США Хромосорб 750 зернением 100 — 120 меш, Serva, Германия Хроматон N-AW DMCS зернением 0,2 — 0,25 мм, Хемапол, Чехия Концентрирующие патроны Диапак С16 (0,6 г) Калий фосфорнокислый, однозамещенный и 0,1 М водный раствор ГОСТ 4198-75

    Раствор ацетон-0,1 М КН РО  в соотношении
                           2  4

1:1 по объему

Спирт этиловый ГОСТ 5962-67 Хлороформ, ч.д.а. ГОСТ 20015-74 Этилацетат, х.ч. ГОСТ 22300-76 Бумага фильтровальная ТУ 6.091678-86 Универсальная индикаторная бумага или рН-метр ГОСТ 13681-93 Стекловата

2.3. Приборы, аппаратура, посуда

Газовый хроматограф Цвет 550 или

аналогичный с термоионным детектором и

стеклянной насадочной колонкой, длиной
1,8 - 2 м, внутренним диаметром 2 - 3 мм

    Аппарат для встряхивания                      ТУ 6-921-1084-73
    Баня водяная                                  ТУ 64-1-2850-76
    Ванна ультразвуковая "Серьга"                 ТУ 3.836.008
    Весы аналитические ВЛА-200 или аналогичные    ГОСТ 34104-80

Весы технические ВЛКТ-500 или аналогичные ГОСТ 24104-80 Воронки лабораторные В-75-110 ГОСТ 25336-82 Воронки делительные на 250 и 500 мл ГОСТ 8613-75 Испаритель вакуумный ротационный ИР-1М или аналогичный ТУ 25-11917-74 Колбы круглодонные вместимостью 50, 100, 250 и 500 мл ГОСТ 25336-82 Колбы плоскодонные вместимостью 250 и 500 мл ГОСТ 25336-82 Колбы мерные вместимостью 25, 50, 100 мл ГОСТ 1770-74 Мельница ножевая РМ-120 и лабораторная зерновая ЛМЗ ТУ 1-01-0593-79 Микропипетки ГОСТ 20292-74

    Микрошприц МШ-10, МШ-10М                      ТУ 2-833-106
    Насос стеклянный вакуумный водоструйный       ГОСТ 10696-75

Палочки стеклянные ГОСТ 25336-82

    рН-метр                                       ГОСТ 13681-93
    Пипетки вместимостью 1, 2, 5, 10 мл           ГОСТ 22292-74

Стаканы химические ГОСТ 25336-82Е Хроматографические стеклянные колонки, длиной 300 и 350 мм, диаметром 12 мм Цилиндры мерные вместимостью 10, 100 и

    1000 мл                                       ГОСТ 1774-74
    Пробирки с притертыми пробками на 10, 20 мл   ГОСТ 1770-74

Алонж прямой с отводом для вакуума для
работы с концентрирующими патронами

2.4. Подготовка к определению

2.4.1 Подготовка и кондиционирование колонок для газожидкостной хроматографии

Готовую насадку (5% PS-400 или 3% OV-17 на хромосорбе 750, или 5% SE-30 на хроматоне N, или 5% SP-2100 на хромосорбе W) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостат хроматографа, не подсоединяя к детектору, и выдерживают при температуре 250 °С в токе газа-носителя в течение 10 — 12 ч.

2.4.2 Подготовка растворителей и приготовление растворов

Растворители, используемые для анализа, специальной подготовки не требуют.

Рекомендуется проверить чистоту применяемых растворителей. Для этого 100 мл растворителя помещают в круглодонную колбу, испаряют при помощи вакуумного ротационного испарителя при температуре 40 °С досуха, обмывают стенки колбы 1 мл ацетона и хроматографируют по п. 2.6.1. При обнаружении примесей, которые могут мешать определению, растворители очищают общепринятыми методами.

                      2  4
калия  помещают в мерную колбу на 1 л. Добавляют в колбу 600 - 700

мл дистиллированной воды. Перемешивают содержимое колбы до полного

растворения  соли,  после  чего  доводят  объем  раствора до метки
дистиллированной  водой. рН раствора должен быть в диапазоне 4,5 -

5,0. Содержимое колбы перемешивают.

1 М раствор NaOH. Навеску 40 г гидроокиси натрия помещают в мерную колбу на 1 л. Добавляют в колбу 200 — 300 мл дистиллированной воды. Перемешивают содержимое колбы до полного растворения гидроокиси натрия. После охлаждения раствора до комнатной температуры доводят объем раствора до метки дистиллированной водой. Содержимое колбы перемешивают.

0,25 М раствор NaOH. Навеску 5 г гидроксида натрия помещают в мерную колбу на 0,5 л, добавляют 200 мл дистиллированной воды и перемешивают до полного растворения. После охлаждения раствора доводят объем раствора до метки дистиллированной водой. Содержимое колбы перемешивают.

    Раствор  ацетон-0,1  М  КН РО   в соотношении 1:1 по объему. В
                              2  4
мерную  колбу  на 1 л помещают 500 мл ацетона, затем доводят объем
раствора  до  метки,  наливая  в ту же колбу 0,1 М раствор КН РО .
                                                             2  4

Содержимое колбы перемешивают.

2.4.3 Приготовление стандартного и градуировочных растворов

Взвешивают 100 мг аналитического стандарта спироксамина, переносят в мерную колбу объемом 100 мл, доводят объем до метки ацетоном (стандартный раствор с концентрацией спироксамина 1 мг/мл).

Градуировочные растворы с концентрациями 1; 2; 2,5; 5; 10; 25 мкг/мл готовят методом последовательного разбавления по объему.

Стандартный раствор устойчив при хранении в холодильнике при температуре 0 — 4 °С в течение 3 месяцев, градуировочные растворы — 1 месяц.

Для построения градуировочного графика — зависимости высоты (мм) или площади (мв х с) пика на хроматограмме от концентрации раствора (мкг/мл), в хроматограф вводят по 1 — 2 мкл градуировочных растворов (не менее 3 параллельных определений для каждого раствора).

Градуировочные растворы используют также для внесения в контрольные образцы с целью определения полноты извлечения спироксамина.

2.4.4 Подготовка окиси алюминия и хроматографических колонок для очистки экстрактов

Сорбент прокаливают в муфельной печи при температуре 350 °С в течение не менее 16 ч, остужают в эксикаторе до комнатной температуры и помещают в плоскодонную колбу. Добавляют 3% дистиллированной воды (по весу), закрывают колбу пробкой и энергично встряхивают сначала в течение 5 мин. вручную, а затем два часа на механическом встряхивателе. Колбу оставляют на 48 ч, периодически, через каждые 2 ч, в течение рабочего дня энергично встряхивая ее содержимое 5 — 10 мин.

В нижнюю часть колонки для очистки экстрактов помещают тампон из стекловаты. Заполняют колонку на 1/4 этилацетатом. Навеску сорбента (14 г) смешивают в химическом стакане с 15 — 20 мл этилацетата. Заполняют колонку полученной суспензией. Дополнительно в верхнюю часть колонки над сорбентом помещают слой безводного сульфата натрия (1 — 1,5 г). Уровень растворителя над слоем сульфата натрия должен составлять 10 — 15 мм. Пропускают через колонку 20 мл этилацетата.

Для каждой приготовленной партии сорбента проверяют объем удерживания спироксамина на хроматографической колонке. Для этого уровень растворителя в хроматографической колонке понижают почти до верхнего слоя сорбента. При помощи стеклянной или автоматической пипетки вносят 1 мл стандартного раствора спироксамина с концентрацией 10 мкг/мл. Дают раствору впитаться, приоткрывая кран колонки и осторожно сливая растворитель, так чтобы слой растворителя над верхним краем сорбента составлял ~ 0,5 см. Элюируют спироксамин из колонки этилацетатом со скоростью 2 мл/мин., отбирая фракции объемом 10 мл в цилиндры на 10 мл. Всего отбирают 6 — 7 фракций. Из цилиндров растворы переливают в круглодонные колбы на 50 мл (каждую фракцию помещают в отдельную колбу). Каждый цилиндр ополаскивают 1 — 2 мл этилацетата, который также вносят в соответствующую колбу. Выпаривают растворитель досуха, сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона, тщательно обмывая стенки колб, и хроматографируют. Суммарный объем первых фракций, в которых не обнаружен спироксамин, представляет собой объем растворителя, который необходимо отбросить при элюировании спироксамина из колонки при очистке проб. Суммарный объем фракций, в которых обнаружен спироксамин, представляет собой объем растворителя, который необходим для элюирования спироксамина из колонки при очистке проб.

Для очистки проб винограда (ягоды, сок) используют хроматографические колонки длиной 300 мм и диаметром 12 мм. В нижнюю часть колонки помещают тампон из стекловаты, заполняют колонку флорисилом (4 г) и дополнительно в верхнюю часть колонки вносят слой безводного сульфата натрия высотой 10 мм. После этого колонку промывают 10 мл чистого н-гексана.

2.4.5 Подготовка концентрирующего патрона Диапак С16 (0,6 г) для очистки виноградного сока

Патрон Диапак С16 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, подсоединенного к водоструйному насосу. Сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Льюер объемом не менее 10 мл (используется как емкость для элюентов). Для активации и кондиционирования патрона через него последовательно пропускают 5 мл хлористого метилена, 10 мл ацетона, 10 мл 0,1 н NaOH. Элюат отбрасывают. Скорость потока через патрон не должна превышать 1 — 2 мл/мин. После кондиционирования патрона нельзя допускать высыхания поверхности картриджа и попадания в него пузырьков воздуха. После кондиционирования патрон сразу же используется для работы или герметично закрывается прилагаемыми к нему заглушками с обоих концов для последующего использования.

2.4.6 Подготовка приборов и средств измерения

Установка и подготовка всех приборов и средств измерения производится в соответствии с требованиями стандартов и технической документации.

2.5. Отбор и подготовка проб

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21 августа 1979 г. № 2051-79.

Отобранные пробы зерна и соломы подсушивают до стандартной влажности и хранят в стеклянной или бумажной таре при комнатной температуре. Замороженные образцы зеленой массы и винограда хранят в морозильной камере при температуре не выше -18 °С. Для длительного хранения пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм, зерно и солому измельчают на лабораторных мельницах.

Для длительного хранения пробы замораживаются и хранятся при температуре -18 °С.

2.6. Проведение определения

2.6.1 Экстракция

Вода. Пробу анализируемой воды (250 мл) помещают в делительную воронку на 250 мл, подщелачивают 1 н NaOH до рН 7,5 — 8,5, добавляют 30 мл хлороформа. Воронку встряхивают 2 мин., дают разделиться слоям. После полного разделения слоев хлороформ (нижний слой) сливают в круглодонную колбу на 250 мл, фильтруя через фильтр «белая лента» со слоем безводного сульфата натрия. Повторяют экстракцию еще дважды, каждый раз используя по 30 мл хлороформа. Фильтр с сульфатом натрия промывают 20 мл хлороформа. Воду отбрасывают. Объединенный экстракт выпаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 2 — 3 мл этилового спирта и выпаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °С. Операцию с этанолом повторяют еще дважды. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют по п. 2.7.1.

В случае наличия на хроматограммах проб, мешающих определению коэкстрактивных соединений проводят дополнительную очистку экстракта на колонке с окисью алюминия по п. 2.6.3.

Почва. Навеску почвы (25 г) помещают в плоскодонную колбу на

                                                            2  4
соотношении  1:1  (по  объему).  Колбу  со  смесью  встряхивают на
механическом  встряхивателе  в  течение  30  мин. Содержимое колбы
фильтруют  в  круглодонную  колбу  на  500  мл через фильтр "белая
лента"  методом  декантации. Экстракцию повторяют дважды, один раз
используя  100  мл раствора ацетона в 0,1 М КН РО  и встряхивая 30
                                              2  4
мин., а затем - 50  мл  той   же   смеси,   встряхивая   10   мин.
Объединенный   экстракт   выпаривают   на   вакуумном  ротационном
испарителе  при температуре  бани  не   выше   40  °С   до  объема
примерно 150 мл (до прекращения  энергичного  отгона  растворителя
в  приемную   колбу  ротационного   испарителя).   Далее  проводят

очистку экстракта по п. 2.6.2.

Зерно, зеленая масса и солома. Навеску растительного материала (20 г) помещают в плоскодонную колбу на 500 мл, добавляют 150 мл ацетона. Колбу с пробой встряхивают на механическом встряхиватели в течение 30 мин. Содержимое колбы фильтруют в стакан методом декантации через фильтр «белая лента» в круглодонную колбу на 500 мл. Экстракцию повторяют при тех же условиях. Колбу с пробой и осадок на фильтре промывают 50 мл ацетона. Объединенный экстракт упаривают до объема 3 — 4 мл на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не выше 45 °С. Далее проводят очистку экстракта по п. 2.6.2.

Виноград. Ягоды винограда. Навеску ягод винограда 50 г измельчают, помещают в коническую колбу на 250 мл, добавляют 100 мл раствора ацетон-хлористый метилен в соотношении 1:1 и экстрагируют спироксамин в ультразвуковой ванне 10 мин. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр (белая лента). К оставшемуся остатку добавляют 50 мл смеси ацетон-хлористый метилен и повторяют экстракцию в ультразвуковой ванне еще 10 мин. Экстракт отфильтровывают. Объединенный фильтрат помещают в делительную воронку на 500 мл и производят очистку по п. 2.6.2.

Виноградный сок. 50 мл сока помещают в плоскодонную колбу на 250 мл, добавляют 70 мл смеси ацетон-хлористый метилен (1:1) и затем 10 мл 1 М раствора NaOH (до рН 8 — 9). Колбу помещают в ультразвуковую ванну и экстрагируют спироксамин в течение 10 мин. Затем содержимое колбы переносят в делительную воронку на 500 мл, дают жидкости полностью расслоиться и нижнюю органическую фазу сливают в круглодонную колбу через слой безводного сернокислого натрия (30 г). С верхним водно-щелочным слоем (рН 8 — 9) повторяют экстракцию 50 мл той же смеси ацетон-хлористый метилен (1:1) в течение 10 мин. в ультразвуковой ванне. После расслоения жидкостей в делительной воронке нижний органический слой сливают в ту же круглодонную колбу через слой безводного сернокислого натрия, который затем промывают 10 мл той же смеси. Водно-щелочной слой отбрасывают. Объединенный органический экстракт упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона. Дополнительная очистка на колонке с флорисилом осуществляется так же, как для ягод винограда или используют патроны Диапак С16 (п. 2.6.4).

2.6.2 Очистка экстрактов

Почва. Экстракт подщелачивают 1 н NaOH до рН 7,5 — 8,5 и помещают в делительную воронку на 500 мл. Колбу ополаскивают 30 мл хлороформа, который также переливают в делительную воронку. Воронку встряхивают 2 мин., дают разделиться слоям. После полного разделения слоев хлороформ (нижний слой) сливают в круглодонную колбу на 250 мл, фильтруя через фильтр «белая лента» со слоем безводного сульфата натрия. Повторяют экстракцию еще дважды, каждый раз используя по 30 мл хлороформа. Фильтр с сульфатом натрия промывают 20 мл хлороформа. Водный слой отбрасывают. Объединенный экстракт выпаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 2 — 3 мл этилового спирта и выпаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С. Операцию с этанолом повторяют еще дважды. Далее проводят очистку экстракта на колонке с окисью алюминия по п. 2.6.3.

    Зерно,  зеленая  масса и солома. После охлаждения до комнатной
температуры  в  колбу  к  экстракту  добавляют 50 мл 0,1 М КН РО .
                                                             2  4
Содержимое  колбы  тщательно  перемешивают  в  течение  3 - 5 мин.
Раствор  фильтруют  через  фильтр "синяя лента" в коническую колбу
емкостью  200  мл. Колбу и осадок на фильтре промывают 50 мл 0,1 М

КН РО . Фильтрат подщелачивают 1 н раствором NaOH до рН 7,5 — 8,5.

  2  4
Время  от добавления к экстракту раствора КН РО  до подщелачивания
                                            2  4
не  должно  превышать  90  мин.  После  подщелачивания  к раствору
приливают  30  мл  хлороформа,  встряхивают  в  течение  2 мин.  и
переносят  в делительную воронку. Слой хлороформа пропускают через
фильтр  с  сульфатом  натрия (2 - 3 г) в круглодонную колбу на 250
мл.  Экстракцию хлороформом повторяют еще 2 раза. Фильтр промывают
20  мл  хлороформа.  Фракции  хлороформа  объединяют,  отгоняют на

вакуумном ротационном испарителе при температуре бани 40 °С. Сухой

остаток  растворяют в 2 - 3 мл этилового спирта и упаривают досуха
на  вакуумном  ротационном  испарителе при температуре бани 40 °С.
Операцию с этанолом повторяют дважды. Сухой остаток  растворяют  в

1 — 2 мл ацетона и хроматографируют по п. 2.7.1.

При наличии на хроматограммах проб мешающих определению коэкстрактивных соединений проводят дополнительную очистку экстракта на колонке с окисью алюминия по п. 2.6.3.

Виноград. В делительную воронку с объединенным фильтратом добавляют 40 — 50 мл 0,25 М раствора NaOH (до рН 8 — 9). Воронку встряхивают в течение 3 мин. Нижнюю органическую фазу сливают через слой безводного сернокислого натрия (30 г) в круглодонную колбу. Верхний водный слой (рН 8 — 9) экстрагируют 50 мл хлористого метилена, встряхивая воронку в течение 3 мин. После полного расслоения жидкостей, органическую фазу сливают в ту же круглодонную колбу через слой безводного сернокислого натрия (30 г). Водный слой отбрасывают, а объединенный органический экстракт выпаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и далее проводят очистку на колонке с флорисилом по п. 2.6.3.

2.6.3 Очистка экстрактов на колонке с окисью алюминия и флористом

Вода, почва, зеленая масса, солома, зерно. Растворяют сухой остаток в 1 мл ацетона. Перед внесением пробы уровень растворителя в колонке понижают почти до верхнего края сорбента. Пипеткой количественно вносят анализируемую пробу в колонку и дают ей впитаться. Обмывают стенки колбы 1 мл ацетона, который также вносят в колонку. Дают пробе впитаться, приоткрывая кран колонки и внимательно следя за тем, чтобы уровень жидкости в колонке не опускался ниже верхнего слоя сорбента. Элюируют спироксамин из колонки, используя 40 мл этилацетата со скоростью 2 мл/мин. Первые 10 мл элюата отбрасывают, а последующие 30 мл собирают в круглодонную колбу на 100 мл. Растворитель выпаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °С. Экстракт растворяют в 1 — 2 мл ацетона и хроматографируют по п. 2.6.1.

Виноград (ягоды, сок). Ацетоновый раствор количественно переносят в колонку с флорисилом. Стенки колбы обмывают 1 мл ацетона и также вносят в хроматографическую колонку. После впитывания раствора флорисилом элюируют спироксамин из колонки, используя 50 мл смеси ацетон-гексан в соотношении 7:3. Первые 10 мл элюата отбрасывают, а последующие 40 мл собирают в круглодонную колбу на 100 мл. Растворитель выпаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют, дозируя в хроматограф 1 — 2 мкл раствора.

2.6.4 Альтернативный вариант очистки виноградного сока с помощью патрона Диапак С16

К 50 мл виноградного сока добавляют по каплям 1 н раствор NaOH до рН 9 (контроль по индикаторной бумаге). Затем виноградный сок фильтруют в колбу на 100 мл через стеклянную воронку с ватным тампоном, предварительно промытым ацетоном. Остаток с ваты смывают 5 мл ацетона. Объединенный фильтрат пропускают через предварительно откондиционированный патрон Диапак С16 со скоростью 1 — 2 мл/мин. По окончании пропускания образца остаток раствора выдувается с картриджа током азота в течение 30 мин. Элюируют спироксамин с патрона 6 мл хлористого метилена, добавляя его порциями по 1 мл. Необходимо, чтобы первая порция элюента задержалась в патроне 1 — 2 мин. для установления равновесия в системе и более полного извлечения спироксамина. Элюат упаривают досуха при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют.

2.7. Условия хроматографирования

Газовый хроматограф, оснащенный термоионным детектором (Цвет 500, НР-5840, PYE UNICAM 204 или аналогичные). Газ-носитель — гелий или азот высокой чистоты.

    Газовый   хроматограф   Цвет-550М  с  термоионным  детектором.
Колонка  стеклянная 2 м х 3 мм, заполненная Хромосорбом W (0,200 -
0,250  мм) с 5% SP-2100 или хроматоном N-Super  (0,16 - 0,20 мм) с

390  °С.  Скорость  потока  газа-носителя (гелий)  -  37  мл/мин.,
водорода  20  мл/мин., воздуха  300 мл/мин. Шкала электрометра 2 х

9

10 .  Время  удерживания  5,0 +/- 0,1  мин.  (изомер  1),  6,0 +/-
0,1 мин.  (изомер 2).  При  скорости  газа-носителя 51,5 мл/мин. и

температуре колонки 230 °С время удерживания спироксамина 2,64 +/- 0,05 мин. (изомер 1) и 3,25 +/- 0,05 мин. (изомер 2).

Условия хроматографирования для импортируемых хроматографов HP 5840 и PYE UNICAM 204 приведены в таблице:

2.8. Обработка результатов анализа

Количественное определение проводят методом абсолютной градуировки, содержание спироксамина в пробах рассчитывают по формуле:

                         C x V x V     S    S
                                  1     1    2
                    X  = ---------- х {-- + --},
                     1     V  x P       c    c
                            2          S    S
                                        1    2

где:
Х - содержание спироксамина в пробе, мг/кг;

     с    с
    S ,  S   -  площадь  (высота)  пика спироксамина в стандартном
     1    2

растворе для изомеров 1 и 2, соответственно, мв х с (мм);

    S ,  S  - площадь  (высота)  пика спироксамина в анализируемой
     1    2

пробе для изомеров 1 и 2, соответственно, мв x с (мм); V — объем анализируемой пробы, мл; Р — навеска анализируемого образца, г; С — концентрация стандартного раствора спироксамина, мкг/мл;

    V   и  V   -  дозируемые  объемы стандартного и анализируемого
     1      2

растворов, мкл.

Содержание остаточных количеств спироксамина в анализируемой пробе вычисляют как среднее из 3 параллельных определений.

3. Требования техники безопасности

При проведении работы необходимо соблюдать требования инструкции «Основные правила безопасной работы в химической лаборатории», общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, сжатыми газами, а также инструкций по эксплуатации газового хроматографа и электрооборудования.

4. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ «Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа».

5. Разработчики

Определение спироксамина в воде, почве, зеленой массе, зерне и соломе злаковых культур: Басова Ю.Г., Сабуров Г.Г., Андреева М.В., Маслаков С.Е. Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт лесного хозяйства.

Определение спироксамина в винограде: Остроухова О.К., Блинова Т.Ф., Цибульская И.А., Долженко В.И. Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений (ВИЗР).