Методические указания по ускоренному определению севина в почве и растительном материале адсорбционной высокоэффективной жидкостной хроматографией

(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 № 6225-91)

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО УСКОРЕННОМУ ОПРЕДЕЛЕНИЮ СЕВИНА В ПОЧВЕ И РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ АДСОРБЦИОННОЙ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика препарата

Карбарил (севин) — альфа-нафтил-N-метилкарбомат — инсектицид сильного контактного и частично кишечного действия. Рекомендуется для опрыскивания кукурузы, хлопчатника, яблони, картофеля.

      OCONHCH
             3

     //\  /\\
    //  \/  \\

    \\  /\  //
     \\/  \//

    Эмпирическая формула C  H  O N. Молекулярная масса 201,14. Это

                      12 11 2

белое кристаллическое вещество с Т. пл. 142 °C, плохо растворим в воде, хорошо — в большинстве органических растворителей.

Выпускается в форме 85% смачивающегося порошка.

Среднетоксичен. ЛД для крыс — 721, для мышей — 275 мг/кг. 50

Очень  опасен  для  пчел и полезных насекомых. Стойкий препарат. В
почве  сохраняется  в течение года. Остатки в сельскохозяйственной

продукции не допускаются.

2.1. Основные положения

2.1.1 Принцип метода

Методика основана на извлечении карбарила из пробы органическим растворителем, очистке и концентрировании экстракта, селективном определении карбарила методом ВЭЖХ на неподвижной фазе «Силасорб 600» в потоке элюента н-гексан — ацетон в объемном соотношении 3:1 при 222 нм.

2.1.2 Метрологическая характеристика метода

Линейный диапазон измерения 5 — 100 нг.

Нижний предел определения севина в почве и растительном материале — 0,005 и 0,0125 мг/кг. Среднее значение определения 85,95%. Объем удерживания севина — 415 мкл.

Методика обеспечивает селективный количественный анализ препарата в присутствии глобальных загрязнителей окружающей среды, таких как ДДТ, ГХЦГ, 2,4-Д и другие ХОС, их метаболитов (полихлорированные фенолы и бензолы), азот- и фосфорорганических пестицидов, хроматографические зоны которых расположены до выходного сигнала карбарила.

2.2. Реактивы и растворы

Азот (особой чистоты), ГОСТ 9293-74.

Аммоний хлорид, хч, ГОСТ 3765-78.

Ацетон, ч, ГОСТ 2603-79.

н-Гексан, ч, ГОСТ 6-09-3375-78.

Спирт метиловый, хч, ГОСТ 6995-77.

Натрия сульфат, безводный, хч, ГОСТ 1277-81.

Натрия хлорид, хч, ГОСТ 4233-77.

Силасорб 600, 5 мкм (ЧССР).

Фильтры ФПП-ХА или АФА-ХА-20.

Эфир петролейный, ч, ГОСТ 11992-77.

2-процентный раствор аммония хлорида (2 г аммония хлорида растворяют в 98 мл дистиллированной воды).

Стандартный раствор карбарила в н-гексане с массовой долей 10 мкг/мл.

Раствор элюента н-гексан — ацетон в объемном соотношении 3:1.

2.3. Приборы, посуда, материалы

Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с, ТУ 64-1-2451-78.

Весы аналитические типа ВЛР-200, ГОСТ 24104-80.

Весы технические ВЛТК-500, ГОСТ 24104-80.

Баня водяная, ТУ 64-1-2850-76.

Испаритель ротационный типа ИР-1М, ТУ 25-11-917-76.

Установка компрессорная, ТУ 64-12986-78.

Хроматограф жидкостный микроколоночный серии «Милихром» со спектрофотометрическим детектором.

Фильтродержатели.

Электроаспиратор ЭА-30.

Воронки делительные, ГОСТ 25336-82.

Колбы конические на 50, 100, 250 мл, ГОСТ 25336-82.

Колбы грушевидные на шлифе, ГОСТ 25336-82.

Колбы мерные на 50, 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Микропипетки на 0,1 мл, ГОСТ 20292-74.

Пипетки мерные на 1; 5; 10 мл, ГОСТ 20292-74.

Пробирки мерные на шлифе, ГОСТ 1770-74.

Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74.

2.3. Отбор, хранение и подготовка проб к анализу

Отбор, хранение и подготовка проб к анализу проводятся в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов внешней среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденными Минздравом СССР за № 2051-79 от 21.08.1979.

2.4. Проведение определения

2.4.1 Экстракция препарата из анализируемой пробы

Навеску среднего образца воздушно-сухой пробы почвы, измельченной и просеянной через сито с диаметром отверстий 1 меш, массой 50 г или средней измельченной пробы растительного материала массой 20 г, взятую на технических весах, помещают в плоскодонную колбу на 250 мл, туда же проливают 100 мл н-гексана. Колбу закрывают пробкой и помещают на аппарат для встряхивания на 1 ч, затем гексановый экстракт сливают через воронку с безводным сульфатом натрия в колбу для упаривания. К пробе приливают еще 50 мл н-гексана и экстракцию повторяют в течение 15 мин. Гексановый экстракт присоединяют к первой порции. Объединенный гексановый раствор пробы упаривают на ротационном испарителе при 50 — 60 °C досуха. Сухой остаток растворяют в 10 мл метанола, добавляют 10 мл 2-процентного водного раствора хлорида аммония. Содержимое колбы перемешивают и помещают в морозильную камеру на 25 — 30 мин. После вымораживания пробы к ней добавляют 10 мл петролейного эфира и 3 г хлорида натрия. Содержимое колбы взбалтывают в течение 2 мин. и переносят в делительную воронку на 150 мл. Очистку водно-метанольного раствора пробы петролейным эфиром повторяют еще 2 раза, беря по 10 мл растворителя. Из водно-метанольного раствора карбарил трижды извлекают н-гексаном, беря по 10 мл. Объединенный гексановый экстракт высушивают безводным сульфатом натрия и упаривают на ротационном испарителе при 50 — 60 °C до 2 мл. Остаток пробы переносят в мерную пробирку и концентрируют до 0,5 мл в токе азота (особой чистоты).

После окончания подготовки проб и их концентрирования приступают к хроматографическому определению карбарила методом ВЭЖХ со спектрофотометрическим детектированием.

2.4.2 Хроматографическое определение методом адсорбционной ВЭЖХ

Сухой остаток пробы растворяют в 0,5 мл н-гексана. Из полученного раствора отбирают 0,5 — 10 мкл анализируемой пробы и вводят в жидкостный микроколоночный хроматограф со спектрофотометрическим детектором (хроматограф типа «Милихром») и измеряют массовую долю севина в исследуемых пробах при следующих условиях режима хроматографического анализа: неподвижная фаза — «Силасорб 600», 5 мкм, подвижная фаза — смесь н-гексан — ацетон в объемном соотношении 3:1, скорость элюирующего потока 200 мкл/мин.; длина волны поглощения светового потока 222 нм, поддиапазон чувствительности 1,6 А, время измерения выходных сигналов 0,6 с; скорость движения диаграммной ленты 720 мм/ч. При этих условиях анализа объем удерживания карбарила составляет 415 мкл.

Для идентификации выходных сигналов севина в пробах и расчета концентраций препарата в них проводится градуировка стандартным раствором с массовой долей севина в н-гексане 10 мкг/мл. В хроматограф вводят 0,5; 1; 3; 5; 7 и 10 мкл раствора, количественное содержание препарата в котором соответствует 5; 10; 30; 50; 70; 100 нг. Между высотой выходных сигналов и массовой долей севина в стандартном гексановом растворе сохраняется прямолинейная зависимость во всем диапазоне измеряемых концентраций.

2.5. Обработка результатов

Расчет содержания севина в пробах проводят по формуле:

                             A x h  x V
                                  2

X (мг/кг) = -----------,

                                 h  x V  x P
                                  1    1

где:

A — концентрация стандарта севина, введенная в хроматограф, нг;

h — высота выходного сигнала стандарта, мм; 1

h — высота выходного сигнала пробы, мм; 2

V — объем раствора пробы, используемого для анализа, мл;

V — объем пробы, введенный в хроматограф, мкл; 1

3. Требования безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с токсическими веществами, органическими растворителями, кислотами и щелочами, а также электрооборудованием.

---