Методические указания по определению эфаля в биосубстратах методом газожидкостной хроматографии

(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 № 6215-91)

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ЭФАЛЯ В БИОСУБСТРАТАХ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

(Дополнение к Методическим указаниям № 6132-91)

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика препарата

Эфаль — смесевой препарат:

(1) трис-O-(этилортофосфит)алюминия (аналог альетта):

       O

C H AlO P .

(C H O-PO-) Al.                            6 18   9 3

2 5	3

H М.м. 354,0.

(2) фосфит алюминия:

AlPO . М.м. 106,0. 3

(3) фосфористая кислота:

    H PO .                                    М.м. 82,02.
     3  3

Эфаль — 66,6% к.э. — вязкая прозрачная жидкость, хорошо растворимая в воде. Компоненты препарата I, III в воде растворимы, II — труднорастворимы; в органических растворителях практически не растворимы.

МДУ эфаля в огурцах — 0,5 мг/кг, винограде — 0,8 мг/кг, в воде — 0,3 мг/л.

2. Методика определения эфаля в биосубстратах методом газожидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1 Принцип метода

Метод основан на извлечении эфаля из исследуемого объекта водой, концентрировании и последующем определении методом реакционной газожидкостной хроматографии в виде метилпроизводных.

2.1.2 Метрологическая характеристика метода

Минимально детектируемое количество в хроматографируемом объеме:

    этилфосфита алюминия     0,1 нг;
    фосфористой кислоты      0,1 нг.

Среднее значение определения в различных органах и тканях (селезенка, почки, сердце, мозг, сальник, печень <*>) при n = 10, %, — 79.

---

<*> Печень составляет исключение, полнота извлечения из печени не превышала 15% от заданного количества. Будут проведены дополнительные исследования.

Размах варьирования (селезенка, почки, сердце, мозг, сальник), %, — 63 — 90.

Стандартное отклонение +/- 12,7%.

Доверительный интервал среднего при P = 0,95; n = 10 — 9,1%.

2.1.3 Избирательность метода

Условия экстракции и последующего газохроматографического определения эфаля (этилфосфита алюминия и фосфористой кислоты) позволяют избирательно определять препарат в присутствии фосфорорганических и пестицидов других групп.

2.2. Реактивы и материалы

Ацетонитрил, ч, ТУ 6-09-3534-87.

Метилгликоль (метилцеллозоль), чда, МРТУ 6-09-6347-69.

Гидразингидрат, чда.

Кали едкое, ч, ГОСТ 24363-80.

Хлороформ, хч, ГОСТ 20015-74.

Кислота уксусная (ледяная), хч, ГОСТ 18270-81.

Кислота серная, хч, ГОСТ 4204-77, 20-процентный раствор.

Метиловый спирт, хч, ГОСТ 6995-77.

Диэтиловой эфир, хч, ГОСТ 6262-79.

Азот в баллоне, особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Водород в баллоне, ГОСТ 3022-88.

Неподвижная фаза 15% Карбовакс 20 М на хроматоне N-AW-DMCS (0,16 — 0,20 мм).

Этилфосфит алюминия, хч.

Фосфористая кислота, хч.

Основные стандартные растворы (ОСР) этилфосфита алюминия и фосфористой кислоты с концентрацией по 100 мкг/мл готовят взятием навески каждого вещества 10 мг (0,0100 г) хч и растворением в дистиллированной воде в мерных колбах емкостью 100 мл. Хранить в холодильнике не более 10 дней.

Рабочие стандартные растворы с содержанием 10 мкг/мл, 5 мкг/мл, 2 мкг/мл готовят разбавлением ОСР водой. Хранить не более 2 дней.

2.3. Приборы, аппаратура и посуда

Газовый хроматограф серии «Цвет» или аналогичный с пламенно-фотометрическим (фосфорным) детектором (ПФД).

Колонка стеклянная, длина 2 м, диаметр 3,5 мм.

Микроизмельчитель тканей, тип РТ-2, ТУ 64-1-1305-79.

Ротационный испаритель типа ИР-1М, ТУ 25-11-917-76.

Колбы грушевидные (круглодонные), ГОСТ 25336-82, вместимостью 500 мл, 100 мл, 50 мл ОКШ 500-29/50-14.

Колбы мерные на шлифах, ГОСТ 1770-74, вместимостью 5 мл.

Пипетки, ГОСТ 20292-74, на 0,1; 0,2; 1; 5; 10 мл.

Микрошприц на 10 мкл МШ-10, ТУ SE-2.833-024.

Прибор для получения диазометана (рис. 1 — не приводится):

• колба круглодонная трехгорлая, емкостью 500 мл на шлифах (реакционный сосуд);
• холодильник Либиха на шлифах;
• делительная воронка на шлифе (капельница);
• П-образный переходник на шлифах;
• капилляр.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1 Подготовка колонки для ГЖХ

Колонку заполняют стандартной фазой (15% Карбовакс 20 М на Хроматоне N-AW-DMCS), подключив ее к вакууму водоструйного насоса. Заполненную колонку кондиционируют в термостате колонок в течение 6 часов без подключения к детектору, продувая азотом (20 — 24 мл/мин.) и постепенно поднимая температуру от 100° до 150°. Затем колонку присоединяют к детектору.

2.5. Описание определения

2.5.1 Экстракция

    2  г образца гомогенизируют в микроизмельчителе тканей с 30 мл
дистиллированной  воды,  дают  отстояться и отфильтровывают водную

фазу через складчатый фильтр «красная лента». Экстракцию повторяют

2  x  10  мл воды. Объединенные водные экстракты переносят в колбу
для  отгонки  и  конденсируют до ~ 2 мл под вакуумом водоструйного
насоса  при  температуре бани не более 45 °C. Измеряют точно объем

сконцентрированной пробы (V ), отбирают 0,2 мл, переносят в мерную 1

пробирку    и    доводят    до    2    мл   смесью   растворителей
метилгликоль - ацетонитрил  (1:1). Полученную  смесь  переносят  в

центрифужную пробирку и центрифугируют при 3000 об./мин. в течение

15  минут,  после чего отбирают для дальнейшего метилирования 1 мл
центрифугата;  либо  фильтруют  через  небольшой  бумажный  фильтр
"красная  лента"  и  также  отбирают  для метилирования точно 1 мл
смеси,  что соответствует аликвоте 0,1 мл (V ) сконцентрированного

                                        2

(V ) экстракта. 1

2.5.2 Получение метилпроизводных эфаля (этилфосфита алюминия

и фосфористой кислоты)

Подготовленные аликвоты экстрактов (V ) метилируют 2 диазометаном. Одновременно метилируют стандартные растворы этилфосфита алюминия и фосфористой кислоты. Для этого берут 0,1 мл рабочих стандартных растворов (10 мкг/мл, 5 мкг/мл, 2 мкг/мл) и по

0,9  мл смеси растворителей метилгликоль - ацетонитрил (1:1), т.е.
подготовленные       к       метилированию      и      дальнейшему
газохроматографическому  анализу  стандарты содержат 1 мкг/мл, 0,5

мкг/мл, 0,2 мкг/мл этилфосфита алюминия или фосфористой кислоты.

2.5.2.1 Получение диазометана

Вследствие токсичности и раздражающего действия диазометана прибор должен быть установлен в вытяжном шкафу. При работе использовать индивидуальные средства защиты: экран, перчатки, очки.

В реакционную колбу (см. рис. 1) помещают 6 г кали едкого, 3 мл метанола и 3 мл гидразингидрата. Через смесь продувают азот с расходом 100 мл/мин. Из капельницы подают хлороформ со скоростью 1 капля за 1 — 2 с.

2.5.2.2. В подготовленные пробы и стандарты вводят по 5 — 6 мкл ледяной уксусной и 3 — 5 мкл 20-процентной серной кислоты и продувают получаемый в описанном выше приборе диазометан до появления интенсивной желтой окраски раствора пробы или стандарта. Затем немедленно нейтрализуют избыток диазометана в пробе (стандарте) прибавлением нескольких микролитров уксусной кислоты до исчезновения окраски. Пробы и стандарты готовы к газохроматографическому определению.

После окончания метилирования прекращают подачу в реакционную колбу хлороформа, отключают азот, остатки в реакционной колбе заливают водой и тщательно промывают колбу и все части прибора водой.

2.5.3 Хроматографический анализ

Газовый хроматограф серии «Цвет» с пламенно-фотометрическим (фосфорным) детектором (ПФД).

Колонка хроматографическая стеклянная длиной 2 м, внутренним диаметром 3,5 мм.

Неподвижная фаза 15% Карбовакс 20 М на хроматоне N-AW-DMCS.

Температура колонки 145 °C.

Температура испарителя 180 °C.

Газ-носитель — азот с расходом 50 мл/мин.

Расход водорода 65 мл/мин.

Вводимый объем 1 — 3 мкл. -9

Шкала множителя 2 x 64 x 10 .

Скорость диаграммной ленты 240 мм/час.

Время удерживания:

диметилфосфоната (метилирование фосфористой кислоты): 2,1 мин;

метилэтилфосфоната (метилирование этилфосфита алюминия): 2,6 мин.

Пределы определения:

    диметилфосфоната     - 0,1 нг;
    метилэтилфосфоната   - 0,1 нг.

Количественную оценку проводят методом соотношения со стандартом этилфосфита алюминия и фосфористой кислоты.

Расчет результатов анализа проводят по формуле:

                          C x H  x V  x V
                               2    3    1

X = ----------------,

                          H  x V  x V  x P
                           1    2    4

где:

X — содержание этилфосфита алюминия (фосфористой кислоты) в анализируемой пробе, мг/кг;

C — концентрация стандартного раствора для ГЖХ, вводимого в хроматограф, мкг/мл;

H — высота пика стандартного раствора, мм; 1

H — высота пика пробы, мм; 2

V — конечный объем сконцентрированного экстракта пробы, мл; 1

    V  - часть экстракта V , взятая для метилирования, мл;
     2                    1
    V   -  объем  стандартного раствора, введенного в хроматограф,

 3

мкл;

V — объем пробы, введенной в хроматограф; 4

3. Техника безопасности

Соблюдать все необходимые требования безопасности при работе в химических лабораториях, а также Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях, отделениях, отделах санитарно-эпидемиологических учреждений системы МЗ СССР, № 2455-81 от 20.10.81.

Особое внимание обратить при работе с гидразингидратом и диазометаном. Соблюдать требования безопасности, описанные в методике. Гидразингидрат — токсичная, пожароопасная жидкость (температура воспламенения 59°, самовоспламенения 267°). При попадании гидразингидрата на окружающие предметы, руки, одежду его немедленно смывают большим количеством воды.

---