Методические указания по ускоренному определению 2,4-Д и ТХА в биоматериале (органы и ткани мелких наземных и почвенных животных) методом газожидкостной хроматографии

(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 № 6128-91)

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО УСКОРЕННОМУ ОПРЕДЕЛЕНИЮ 2,4-Д И ТХА В БИОМАТЕРИАЛЕ (ОРГАНЫ И ТКАНИ МЕЛКИХ НАЗЕМНЫХ И ПОЧВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ) МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика препаратов

2,4-Д (общее название — 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота) — гербицид избирательного действия, эффективное средство для борьбы с однолетними двудольными сорняками.

    _____

    Cl_//   \\_OCH COOH                            C H O Cl .
       \ ___ /    2                                 8 6 3  2

              Cl                                   М.м. 221,04.

Белое кристаллическое вещество, Т. пл. 141 °C, Т. кип. 160 °C. Растворимость в воде 540 мг/л при 20 °C, хорошо растворяется в ацетоне, спирте, эфире, четыреххлористом углероде.

Выпускается в виде 10% гранул, устойчива при хранении.

Норма расхода на посевах ржи и озимой пшеницы 10 — 12 кг/га в смеси с гранулированной аммиачной селитрой.

ТХА (общее название — натриевая соль трихлоруксусной кислоты) — гербицид, эффективный в борьбе с однолетними и многолетними злаковыми сорняками.

   Cl  O

   Cl                                             2  2

Действующее вещество — трихлоруксусная кислота. Белое кристаллическое вещество; гигроскопична. Т. разл. около 350 °C. Растворимость в воде 1200 г/л при 20 °C. Технический препарат содержит 90 — 95% д.в. Выпускается в форме 90% р.п.

Без доступа влаги можно хранить несколько лет; водные растворы могут вызвать коррозию металлической тары. Норма расхода на свекле — 5 - 14, плодовых культурах — 15 — 20, льне, картофеле, капусте, свекле, моркови, огурцах — 23 — 50 кг/га.

2. Методика определения 2,4-Д и ТХА в биоматериале наземных и почвенных животных методом ГЖХ

2.1. Основные положения

2.1.1 Принцип метода

Метод основан на совместном извлечении 2,4-Д и ТХА из биоматериала этанолом, концентрировании и очистке экстракта с последующим раздельным газохроматографическим определением препаратов в одной пробе.

2.1.2 Метрологическая характеристика метода

    Среднее значение определения 2,4-Д и ТХА (%)        75 и 70
    Стандартное отклонение (%)        -"-               +/- 4,69 и +/- 5,93
    Относительное стандартное отклонение (%) -"-        2,1 и 2,7
    Доверительный интервал (%)        -"-               +/- 3,7 и +/- 3,9
    Предел обнаружения (мг/кг)        -"-               0,002 и 0,001

2.1.3 Избирательность метода

Метод избирателен в присутствии глобальных загрязнителей биосферы — хлорпроизводных циклопарафинов (у-ГХЦГ и его изомеры), соединений дифенилметанового ряда (4,4'-ДДТ и его производные), а также различных азот- и фосфорсодержащих пестицидов.

2.2. Реактивы и растворы

Азот, осч, ГОСТ 9293-74.

Вода дистиллированная, ГОСТ 6709-72.

н-Гексан, ч, ТУ 6-09-3375-78.

Диметилсульфат, МРТУ 6-09-3688-67.

Метанол, хч, ГОСТ 6995-77.

Натрия гидрокарбонат, чда, ГОСТ 4201-66.

Натрия сульфат безводный, ч, ГОСТ 4166-76.

Натрия хлорид, хч, ГОСТ 4233-77.

Универсальные индикаторные бумаги pH 0 — 12 «Lachema» (ЧССР).

Фильтры «красная лента», ТУ 6-09-1678-77.

Хлористоводородная кислота, ч, ГОСТ 3118-77.

Хлороформ, фармакопея СССР.

Этиловый спирт, хч, ГОСТ 5962-67.

Эфир для наркоза, фармакопея СССР, ГОСТ 6562-74.

0,5 М раствор гидрокарбоната натрия (42 г натрия гидрокарбоната растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 1000 мл; объем раствора доводят до метки).

Насыщенный раствор хлорида натрия в дистиллированной воде. 5% раствор диметилсульфата в абсолютном метаноле.

Стандартный раствор метилового эфира 2,4-Д в н-гексане с концентрацией 0,02 мкг/мл.

Стандартный раствор метилового эфира ТХУ в н-гексане с концентрацией 0,01 мкг/мл.

2.3. Приборы и посуда

Хроматограф типа «Цвет-100», снабженный детектором по захвату электронов или постоянной скорости рекомбинации.

Аппарат для встряхивания АВУ-6С, ТУ 64-1-2451-78.

Весы аналитические типа ВЛР-200, ГОСТ 24104-80.

Весы технические типа ВЛКТ-500, ГОСТ 24104-80.

Испаритель ротационный типа ИР-1М2, ТУ 25-1173-102-84.

Линейка металлическая, ГОСТ 25706-83.

Микрошприц МШ-10М, ТУ 2-833-106, или аналогичный.

Воронки делительные, ГОСТ 25336-82, на 100 мл.

Воронки конические, ГОСТ 25336-82.

Колбы конические с пришлифованной пробкой, ГОСТ 25336-82, на 100 мл.

Колбы круглодонные со шлифом, ГОСТ 25336-82, на 100 мл.

Колбы мерные, ГОСТ 1770-74, на 100 и 1000 мл.

Пипетки мерные, ГОСТ 20292-74, на 1 и 5 мл.

Пробирки мерные, ГОСТ 1770-74, на 10 мл.

Ступки фарфоровые, ГОСТ 9147-80.

Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74, на 10, 25 и 100 мл.

2.4. Отбор, хранение и подготовка проб

Отбор, хранение и подготовка проб к анализу проводятся в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.79 за № 2051-79. Пробы готовят к анализу в день отбора.

2.5. Проведение анализа

2.5.1 Экстракция препаратов из анализируемой пробы

Навеску биоматериала массой 1 — 2 г (если все органы или ткани меньше указанной массы, берут общую навеску от нескольких особей) помещают в фарфоровую ступку и измельчают ножницами, туда же насыпают 10 — 30 г сульфата натрия (или толченого стекла) и тщательно растирают до гомогенной массы, которую переносят в плоскодонную колбу вместимостью 100 мл с притертой пробкой. Ступку ополаскивают 5 мл этанола, который сливают в колбу с пробкой, и приливают туда же еще 5 — 20 мл этого растворителя. Колбу помещают на 20 мин. в аппарат для встряхивания. Этанольный экстракт фильтруют через складчатый фильтр в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 100 мл. Экстракцию пробы повторяют еще раз 10 — 25 мл этанола в течение 10 мин., после чего экстракт присоединяют к первой порции, а пробу переносят на фильтр и дважды промывают ее 5 мл растворителя, каждый раз ополаскивая им колбу из-под пробы. Этанольный экстракт упаривают на ротационном испарителе при 60 — 70 °C до водного остатка, который (после охлаждения) смешивают с 10 мл 0,5 М раствора гидрокарбоната натрия и переносят в делительную воронку вместимостью 100 мл, колбу ополаскивают еще 10 мл гидрокарбоната натрия, который присоединяют к первым 10 мл. Для очистки пробы от сопутствующих примесей хлор- и фосфорорганических пестицидов, а также других органических веществ проводится их переэкстракция (2 раза по 20 мл) вначале хлороформом, затем н-гексаном (оба растворителя отбрасываются). В раствор бикарбоната натрия приливают 0,2 мл концентрированной хлористоводородной кислоты, пробу перемешивают и после окончания выделения углекислого газа из подкисленного водного раствора извлекают 2,4-Д и ТХУ диэтиловым эфиром, повторяя переэкстракцию 3 раза (10, 10 и 5 мл). Объединенные эфирные экстракты отмывают дистиллированной водой до нейтральной pH (3 раза по 50 мл) и фильтруют через прокаленный сульфат натрия в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 50 мл. Делительную воронку ополаскивают небольшим количеством эфира, которым промывают сульфат натрия на фильтре. Эфирный экстракт упаривают досуха на ротационном испарителе при 30 — 35 °C. Далее проводят получение производных 2,4-Д и ТХУ с помощью 5%-ного раствора диметилсульфата в метаноле, хроматографическое определение метиловых эфиров на 1 м колонки, заполненном инертным носителем Chromaton N-AW-DMCS с 5% SE-30, в режиме, описанном в известных методиках (определение остаточных количеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде. М.).

Хроматографическое определение метилового эфира ТХУ можно также проводить и при другом температурном режиме: Т. детектора 120 °C, Т. испарителя 100 °C, Т. колонки 50 °C, — что позволяет более четко разделить производные продуктов превращения ТХУ и сопутствующих примесей.

2.6. Обработка результатов анализа

Расчет содержания 2,4-Д и ТХУ в анализируемой пробе биоматериала при определении методом газожидкостной хроматографии производят по формуле:

                               h  x V x C x V
                                1            1

Х (мг/кг) = ---------------,

                                 h  x V  x P
                                  2    2

где:

h — высота хроматографического сигнала пробы, мм; 1

h — высота хроматографического сигнала стандартного раствора, 2 мм;

V — объем анализируемой пробы, мл;

P — навеска анализируемой пробы, г;

C — концентрация стандартного раствора, мкг/мл;

V — объем стандартного раствора, введенный в хроматограф, 1 мкл;

V — объем раствора пробы, введенный в хроматограф, мкл.

 2

3. Требования безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, концентрированными кислотами.