Методические указания по определению 2,4-Д в воде методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии

(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 № 6127-91)

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ 2,4-Д В ВОДЕ МЕТОДОМ ОБРАЩЕННО-ФАЗОВОЙ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика препарата

Краткая характеристика препарата приведена в Методических указаниях.

2. Методика определения 2,4-Д в воде

2.1. Основные положения

2.1.1 Принцип метода

Метод основан на концентрировании 2,4-Д в пробе и последующем определении препарата с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ.

2.1.2 Метрологическая характеристика метода

    Среднее значение определения (%)         - 90
    Стандартное отклонение (%)               - 8,06

Относительное стандартное отклонение (%) — 3,61

Доверительный интервал (+/- %) — 2,95

Предел обнаружения (мг/л) в неочищенной и очищенной пробе — 0,7 и 0,002.

2.1.3 Избирательность метода

Метод избирателен в присутствии глобальных загрязнителей окружающей среды — производных циклопарафинов (у-ГХЦГ и его изомеры), соединений дифенилметанового ряда (ДДТ и его производные), а также галакона, глифосата и других гербицидов, применяемых на зерновых культурах.

2.2. Реактивы и растворы

Вода дистиллированная, ГОСТ 6709-72.

н-Гексан, ч, ТУ 6-09-3375-78.

Метанол, хч, ГОСТ 6995-77.

Натрия сульфат, безводный, ч, ГОСТ 4166-76.

Натрия гидрокарбонат, чда, ГОСТ 4201-66.

Универсальные индикаторные бумаги pH 0 — 12 «Lachema» (ЧCCP).

Фильтры «синяя лента», ТУ 6-09-1678-77.

Хлороформ, Фармакопея СССР, ГОСТ 20015-74.

Хлористоводородная кислота, ч, ГОСТ 3118-77.

Эфир для наркоза, Фармакопея СССР, ГОСТ 6265-74.

Стандартный раствор 2,4-Д в воде с концентрацией 10 мкг/мл.

2.3. Приборы и посуда

Весы аналитические типа ВЛР-200, ГОСТ 24104-80.

Весы технические типа ВЛКТ-500, ГОСТ 24104-80.

Испаритель ротационный типа ИР-1М2, ТУ 25-1173-102-84.

Микроколонка стандартная металлическая (50 x 2 мм) с сорбентом «Силасорб C », 5 мкм, «Chemapol» (ЧССР). 18

Хроматограф микроколоночный жидкостный типа «Милихром».

Воронки делительные, ГОСТ 25336-82, на 250 мл.

Воронки конические, ГОСТ 25336-82.

Колбы конические с пришлифованной пробкой, ГОСТ 25336-82, на 100 мл.

Колбы круглодонные со шлифом, ГОСТ 25336-82, на 100 мл.

Колбы плоскодонные, ГОСТ 25336-82, на 250 мл.

Пипетки мерные, ГОСТ 20292-74, на 1 мл.

Пробирки мерные, ГОСТ 1770-74, на 10 мл.

Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74, на 100 и 25 мл.

Линейка металлическая, ГОСТ 25706-83.

2.4. Отбор, хранение и подготовка проб

Отбор, хранение и подготовка проб к анализу проводятся в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.79 за № 2051-79.

2.5. Подготовка к определению

2.5.1 Приготовление элюента

Элюирующая смесь вода — метанол в объемном соотношении 7:3 готовится заранее, перед проведением хроматографического анализа. Цилиндром вместимостью 100 мл отмеряют 70 мл дистиллированной воды, которую выливают в плоскодонную колбу с пришлифованной пробкой вместимостью 100 мл; туда же приливают 30 мл метанола, колбу закрывают пробкой, содержимое перемешивают при легком взбалтывании и дают смеси отстояться в течение 30 — 40 мин., после чего фильтруют в сосуд для элюента. Элюент отстаивают еще некоторое время (до прекращения образования пузырьков воздуха на стенках сосуда) и приступают к подготовке хроматографической системы прибора к анализу.

2.5.2. Подготовка хроматографической системы к проведению определения 2,4-Д. Подготовку прибора к хроматографическому анализу начинают с промывки насоса свежеприготовленным элюентом, после чего насос заполняют элюирующей смесью вода — метанол (7:3) и приступают к промывке хроматографической системы и заполнению кюветы сравнения элюентом. Подготовка хроматографа продолжается до установления равномерного нулевого выходного сигнала детектора и снижения шумов до минимума.

2.6. Проведение анализа

2.6.1 Экстракция препарата из анализируемой пробы

Чистую пробу воды (прозрачная и бесцветная) фильтруют через складчатый фильтр и проводят хроматографический анализ неочищенной пробы, вводя в колонку от 5 до 40 мкл (вводимый объем берется по усмотрению оператора, но не более 40 мкл).

Если проба воды грязная (мутная и окрашена или содержит сопутствующие примеси природных органических соединений, других пестицидов, влияющих на проведение анализа), поступают следующим образом: 100 мл отфильтрованной пробы помещают в плоскодонную коническую колбу вместимостью 250 мл, туда же добавляют 4 г гидрокарбоната натрия, взвешенного на технических весах, и, при перемешивании раствора, его растворяют в пробе, после чего содержимое колбы переносят в делительную воронку вместимостью 250 мл. Для удаления из пробы влияющих на анализ примесей проводится их переэкстракция сначала в хлороформ (2 раза по 25 мл), а затем в н-гексан (2 раза по 25 мл) при взбалтывании содержимого воронки в течение 1 мин. Растворители, содержащие сопутствующие примеси пробы, отбрасывают, а водный раствор сливают в колбу вместимостью 250 мл и постепенно приливают туда 1 мл хлористоводородной кислоты, раствор перемешивают при легком взбалтывании. После прекращения выделения углекислого газа раствор переносят в делительную воронку и проводят переэкстракцию 2,4-Д в диэтиловый эфир (2 раза по 20 мл) в течение 1 мин. Водный раствор отбрасывают, а объединенный эфирный экстракт отмывают дистиллированной водой (до нейтрального pH), фильтруют через прокаленный сульфат натрия в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 100 мл, упаривают на ротационном испарителе при 30 — 35 °C до небольшого объема, переносят в мерную пробирку и упаривают в токе азота особой чистоты досуха. Сухой остаток пробы растворяют в 0,2 мл дистиллированной воды и проводят хроматографический анализ.

2.6.2 Хроматографическое определение 2,4-Д методом ВЭЖХ

    Количественное   определение   2,4-Д  проводят  при  следующих
условиях хроматографирования: неподвижная фаза - "Силасорб C  ", 5

                                                        18

мкм; подвижная фаза — вода с метанолом в объемном соотношении 7:3;

скорость    элюирующего    потока -  200   мкл/мин.;   поддиапазон
чувствительности  измерений - 0,2  А;  время  измерения  выходного

сигнала — 0,6 с; скорость протяжки диаграммной ленты — 300 мм/час; длина волны поглощения светового потока — 280 нм; объем удерживания — 235 мкл.

После окончания подготовки прибора к анализу проводится хроматографирование градуировочного раствора 2,4-Д (10 мкг/мл) в объеме от 5 до 40 мкл (5, 10, 15, 20, 30, 40 мкл), а затем пробы воды в объеме, необходимом для обнаружения препарата (но не более 40 мкл), как в несконцентрированной, так и в сконцентрированной (при необходимости) пробе. Если содержание в пробе находится за пределом верхней границы обнаружения, часть ее разбавляют в определенном объеме дистиллированной воды и анализ повторяют при тех же условиях хроматографирования.

2.6.3 Обработка результатов анализа

Количественное определение 2,4-Д проводят методом соотношения со стандартами, путем сравнения площадей пиков в анализируемом образце воды и стандартном растворе.

Расчет проводят по формуле:

                     S  x V x C
                      1

X = ---------- (мг/л), S x P 2

где:

S — площадь пика 2,4-Д в пробе, кв. мм; 1

S — площадь пика стандартного раствора, кв. мм; 2

C — концентрация стандартного раствора, мкг/мл;

V — объем анализируемой пробы, мл;

3. Требования безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, концентрированными кислотами.

---