Библиотека
Скачать PDF

Временные методические указания по определению остаточных количеств нафталевого ангидрида в зерне кукурузы, льна и воде тонкослойной хроматографией

Министерство здравоохранения СССР · № 6096-91Действующий акт

(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 № 6096-91)

Утверждены
Министерством здравоохранения СССР

29 июля 1991 г. № 6096-91

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ НАФТАЛЕВОГО АНГИДРИДА В ЗЕРНЕ КУКУРУЗЫ, ЛЬНА И ВОДЕ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика препарата

Нафталевый ангидрид — антидот последействия хлорсульфуроновых гербицидов. Действующее начало — ангидрид 1,8-нафталиндикарбоновой кислоты.

    O

        /\                                        C  H O .
       /  \                                        12 6 3
    O=C    C=O
М.м. 198,2. 
     //\  /\\

     \\/  \//
                          -6

    Летучесть при 20 °C 1 x 10   мг/л. Стабилен при pH 7, в кислой
среде  разлагается до нафталевой кислоты. Растворимость в воде при
20 °C  1%, в этиловом спирте - 2,2%, ацетоне - 2,5%. Нерастворим в

гексане. Среднерастворим в хлороформе. Соединение нетоксичное. МДУ в продуктах питания еще не установлен. ПДК в воде водоемов санитарно-бытового водопользования 0,5 мг/л.

2. Методика определения нафталевого ангидрида в кукурузе и льне ТСХ

2.1. Основные положения

2.1.1 Принцип метода

Метод основан на извлечении нафталевого ангидрида из зерна кукурузы или льна хлороформом, очистке экстракта хроматографией на колонке с двуокисью кремния для люминофоров, а затем микросублимацией в вакууме с последующим определением ТСХ.

2.1.2 Метрологическая характеристика метода

Диапазон измеряемых концентраций — 0,2 — 3,0 мг/кг в растительных пробах, 0,25 — 3,75 мг/л в воде.

Предел обнаружения в хроматографической пробе — 0,05 мкг.

Предел определения в пробе — 0,2 мг/кг в растительных пробах, 0,00025 мг/л в воде.

Среднее определение стандартных количеств нафталевого ангидрида при n = 15 — 75%.

Стандартное отклонение S — +/- 13%.

Доверительный интервал среднего определения — 75 +/- 15% (при n = 5, P = 0,95).

Размах варьирования — 60 — 100%.

2.1.3 Избирательность метода

Метод селективен, ФОП, ХОП определению не мешают. Селективность метода обеспечивается сочетанием альтернативных систем подвижных растворителей различной полярности и трех проявляющих реагентов.

2.2. Реактивы и растворы

н-Гексан, ч, ТУ 6-09-3375-78.

Ацетон, чда, ГОСТ 2603-79, высушенный над Na SO . 2 4

Хлороформ, чда, ГОСТ 20015-74.

Бензол, хч, ГОСТ 5955-75.

Этиловый спирт, ректификат.

Родамин С, ТУ 856-53, или родамин Б — 1-процентный раствор в этаноле.

Двуокись кремния для люминофора (сход с сита размером 0,4 мм) по ГОСТ 9428-73.

Стандартные растворы нафталевого ангидрида в хлороформе с содержанием 100 мкг/мл (раствор 1) или 1 мкг/мл (раствор 2). Стандартные растворы стабильны при хранении в холодильнике в течение 3 месяцев.

Хроматографические пластинки марки «Силуфол» UV 254.

2.3. Приборы, аппаратура и посуда

Камеры хроматографические с пришлифованными крышками, ГОСТ 25336-82, или аналогичные.

Источник УФ-света с длиной волны 254 и 366 нм.

Аппарат для встряхивания, ТУ 64-1-1081-73, или аналогичный.

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-817-76, или аналогичный с набором колб.

Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 25336-82, или аналогичные.

Мерные колбы, ГОСТ 1770-74, вместимостью 100 мл.

Колбы плоскодонные, ГОСТ 25336-82, вместимостью 250, 500 мл.

Колонка для хроматографии с краном длиной 15 см, внутренним диаметром 1 см.

Прибор для микросублимации в вакууме.

Пробирки градуированные, ГОСТ 1770-74, с пробками на шлифах.

Пипетки с делениями, ГОСТ 20292-74Е, на 10,0; 1,0; 0,1 мл.

Микрошприц на 100 мкл.

Кофейная мельница бытовая.

2.4. Подготовка к определению

Хроматографические камеры за 1 час до начала хроматографирования заполняют смесью гексан — ацетон (2:1) и хлороформ — гексан (95:5) для насыщения камер парами подвижных растворителей. Объем подвижного растворителя в камере должен по высоте находиться не выше чем на 0,7 — 1,0 см от уровня дна камеры.

Хроматографическую колонку заполняют на высоту 10 см суспензией двуокиси кремния для люминофоров в гексане. Избыток растворителя сбрасывают при подсоединении слабого вакуума, оставляя слой растворителя на уровне 1 — 3 мл над поверхностью сорбента.

2.5. Отбор проб

Отбор проб для анализа проводят в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденными Минздравом СССР 21 августа 1979 г. № 2051-79.

2.6. Подготовка проб к анализу

Кукурузу и лен размалывают с помощью кофейной мельницы до консистенции манной крупы. Для анализа берут навеску помола кукурузы (10 г), льна (2,5 г).

2.7. Проведение определения

Кукуруза, лен. Навеску кукурузы (10 г), льна (2,5 г) помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 мл, увлажняют ее 3 мл воды (дистиллированной) и экстрагируют нафталевый ангидрид хлороформом трижды порциями по 70 мл. Экстракт фильтруют в плоскодонную колбу вместимостью 250 мл, сушат над безводным сульфатом натрия (5 — 7 г) и фильтруют в круглодонную колбу вместимостью 250 мл.

С помощью ротационного вакуумного испарителя концентрируют раствор до объема ~ 0,5 мл. Остаток переносят на подготовленную колонку, заполненную двуокисью кремния для люминофоров в гексане. Перенос осуществляют с помощью бензола. Раствору дают возможность впитаться в сорбент, колбу несколько раз обмывают бензолом и полученный раствор при открытом кране переносят на колонку. Нафталевый ангидрид элюируют с колонки 25 мл бензола.

Бензольный экстракт концентрируют с помощью ротационного вакуумного испарителя до объема ~ 0,5 мл и остаток количественно переносят в патрон сублиматора 25 мл ацетона. Затем нагреванием на горячей водяной бане полностью отгоняют растворитель из патрона, вставив предварительно запаянный капилляр для равномерного кипения раствора. После отгона растворителя в сублиматор вставляют «палец», подсоединяют водяное охлаждение и проводят сублимирование при давлении 0,2 — 0,3 мм рт. ст. на кипящей водяной бане в течение 40 мин.

После окончания сублимации систему разгерметизируют и смывают нафталевый ангидрид с «пальца» сублиматора 20 мл безводного ацетона в грушевидную колбочку вместимостью 50 мл.

Отгоняют ацетон с помощью ротационного вакуумного испарителя досуха и к сухому остатку добавляют пипеткой 1 мл безводного ацетона. Колбочку закрывают пробкой на шлифе и тщательно обмывают стенки растворителем. Наносят на хроматографическую пластинку с помощью микрошприца аликвоту (50 — 200 мкл) полученного раствора.

Вода. Воду (1 л) помещают в делительную воронку вместимостью 2000 мл и экстрагируют нафталевый ангидрид трижды хлороформом порциями по 50 мл. Объединенные хлороформные экстракты сушат над безводным сульфатом натрия (~ 10 г). Фильтруют, концентрируют с помощью вакуумного испарителя до объема ~ 0,5 мл, остаток переносят в патрон сублиматора, сублимируют нафталевый ангидрид и проводят все определения, как это описано для кукурузы.

2.7.1 Определение ТСХ
    Справа  и слева от рабочей пробы наносят с помощью микрошприца
серию  стандартных  растворов нафталевого ангидрида с  содержанием
0,5;  0,6;  0,7;  1,0...10  мкг. Хроматограмму развивают в системе
гексан - ацетон   (2:1)  или   хлороформ - гексан  (95:5).   После

развития хроматограмму высушивают, а затем рассматривают при длине

волны   254   нм,   где   нафталевый  ангидрид  проявляется в виде
светящихся голубовато-зеленых пятен с R  = 0,4 +/- 0,03  в  первой
                                   f

системе растворителей и 0,06 +/- 0,03 - второй с  нижним  пределом
обнаружения  0,5 мкг. Если хроматограмму обработать 0,1-процентным

раствором родамина Б или С, то нафталевый ангидрид просматривается при лямбда = 254 нм в виде голубых пятен на желтом фоне, а при лямбда = 366 нм в виде ярко-фиолетовых пятен на оранжевом фоне.

Чувствительность детектирования пятен увеличивается при рассматривании пластинки при лямбда = 366 нм без обработки ее раствором родамина Б. Тогда на темно-фиолетовом фоне пластинки отчетливо видны светящиеся флуоресцентные пятна нафталевого ангидрида с нижним пределом детектирования 0,025 мкг. Линейный диапазон детектирования составляет 0,025 — 0,3 мкг. Пятна стабильны в течение длительного времени.

2.8. Обработка результатов

Количественное определение нафталевого ангидрида в анализируемой пробе проводят сравнивая площади и интенсивность окраски пятен рабочей пробы и серии стандартов. Содержание нафталевого ангидрида в пробе (X) в мг/кг или в мг/л вычисляют по формуле:

                        A x V

X = ------ мг/кг, V x P a

где:

A — количество нафталевого ангидрида, найденного в хроматографической пробе, мкг;

V — общий объем раствора, мл;

V — объем аликвоты, взятой для анализа, мл; a

P — навеска анализируемой пробы зерна в г или воды в мл.

3. Требования безопасности

Соблюдать все меры предосторожности, необходимые при работе с горючими растворителями.