Методические указания по газохроматографическому определению остаточных количеств этамона в столовой и сахарной свекле, зеленой массе растений и почве

(утв. Минздравом СССР 27.07.1991 № 6094-91)

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ГАЗОХРОМАТОГРАФИЧЕСКОМУ ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ЭТАМОНА В СТОЛОВОЙ И САХАРНОЙ СВЕКЛЕ, ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ РАСТЕНИЙ И ПОЧВЕ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика препарата

Этамон — новый отечественный препарат, рекомендуемый в качестве регулятора роста растений свеклы, картофеля, сои, гороха. Действующее начало препарата — диметилфосфорнокислый диметил бис (оксиэтил) аммоний.

<pre class="legal-pre">    ┌─             ─┐  ┌─         ─┐
    │CH             │  │           │
    │  3    CH CH OH│  │          O│                   C H  NO P.
    │   \ +/  2  2  │  │        // │                    8 22  6
    │    N          │  │(CH O) P   │
    │   / \         │  │   3  2 \  │                   М.м. 259,2.
    │CH    CH CH OH │  │         O │
    │  3     2  2   │  │           │
    └─             ─┘  └─          ┘</pre>

Этамон — в чистом виде бесцветная жидкость. Очень хорошо растворяется в воде. Нерастворим в неполярных растворителях, плохо растворим в полярных.

Препарат малотоксичный, ЛД для белых мышей 2000 мг/кг. 50 Временные МДУ этамона в сельскохозяйственных культурах 0,2 мг/кг.

Применяется для предвсходовой обработки семян в качестве стимулятора проростков и корневой системы. Нормы расхода 5 — 10 г/т семян.

2. Методика хроматографического определения этамона в свекле

2.1. Основные положения

2.1.1 Принцип метода

Метод основан на извлечении этамона из анализируемой свеклы подкисленным этиловым спиртом, этерификации образовавшегося диметилового эфира фосфорной кислоты диазобутаном, очистке экстракта, перераспределении образовавшегося бутилового эфира диметилфосфорной кислоты в гексан и определении ГЖХ с термоионным детектором.

2.1.2 Метрологическая характеристика метода

Метрологическая характеристика метода представлена в таблице 1.

Таблица 1

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА

Объект	Предел обнаружения	Предел определения, мг/кг	Диапазон измеряемых концентраций, мг/кг	Среднее значение определен. C, n = 15, %	Стандартное отклонение S, n = 15 +/- 15	Доверительный интервал среднего определения	Размах варьирования R, %
Свекла Листья свеклы Почва	0,2 0,2 0,2	0,02 0,02 0,02	0,02 — 1,2 0,02 — 1,2 0,02 — 1,2	81,5 81,7 91,6	6,4 5,8 7,7	81,5 +/- 7,9 81,7 +/- 7,2 91,6 +/- 9,5	75,0 — 91,5 73,1 — 91,4 80,2 — 100,0

Метрологическая оценка метода проводилась на основной колонке с 15% Реоплекса.

2.1.3 Избирательность метода

Метод селективен, прочие ФОП определению не мешают.

2.2. Реактивы и растворы

н-Гексан хч, ТУ 6-09-3375-78.

Этиловый спирт — ректификат, ГОСТ 5962-67, и подкисленный (3 кап. конц. HCl на 150 мл этилового спирта).

Диэтиловый эфир хч, ГОСТ 6265-74.

Мочевина хч, ГОСТ 6691-77.

Соляная кислота осч, ГОСТ 3118-77, концентрированная и 0,1 н.

Бутиламин солянокислый хч.

Нитрит натрия хч, ГОСТ 9285-78.

Гидроксид калия чда, ГОСТ 9285-78.

Серная кислота осч, ГОСТ 14262-78.

Гидроксид натрия, очищ., ГОСТ 11078-78.

Хлорид натрия чда, ГОСТ 4233-77.

Диазобутан в диэтиловом эфире.

Получение диазобутана. Растворяют 16,4 г солянокислого бутиламина и 30 г мочевины в 40 мл дистиллированной воды и кипятят с обратным холодильником в течение 10 час. После охлаждения добавляют в раствор 11,1 г нитрита натрия. Реакционную массу охлаждают до -10 °C при помощи бани, содержащей лед с NaCl, и медленно, при постоянном перемешивании добавляют 60 г льда и 11 г концентрированной серной кислоты. Полученные кристаллы нитрозобутилмочевины отфильтровывают на воронке Бюхнера, остаток на фильтре промывают ледяной дистиллированной водой, а затем сушат на воздухе. Нитрозобутилмочевину хранят в холодильнике в темной склянке.

В коническую колбу вместимостью 250 мл помещают 15 мл охлажденного 40%-ного раствора KOH и 50 мл диэтилового эфира. Смесь охлаждают на ледяной бане, содержащей смесь льда и NaCl, до 5 °C и добавляют небольшими порциями 3 г нитрозобутилмочевины. Реакционную массу в течение 30 мин. периодически встряхивают, не допуская повышения температуры выше 5 °C. Эфирный раствор полученного диазобутана сливают в сухую плоскодонную колбу вместимостью 250 мл. Оставшуюся в колбе щелочь дважды промывают при непрерывном встряхивании в течение 2 — 3 мин. диэтиловым эфиром порциями по 50 мл и эфирные растворы также переносят в колбу с диазобутаном. Раствор диазобутана хранят в склянке с притертой пробкой в морозильной камере. Срок хранения не более 3-х дней.

Сульфат натрия чда, ГОСТ 4166-76, безводный.

Хроматон N-AW-DMCS (0,250 — 0,315 мм) с 15% Reoplex 400.

Жидкая фаза — полидиэтилгликоль сукцин (ПДЭГС), ТУ 6-11-15-68.

Хроматон N-AW-HMDS (0,125 — 0,160 мм).

Азот газообразный из баллона с редуктором, ГОСТ 9293-74.

Водород из баллона с редуктором, ГОСТ 3022-80, или получаемый из генератора водорода.

Воздух из баллона с редуктором, ГОСТ 9.010-80, или нагнетаемый компрессором.

Стандартный раствор этамона в этиловом спирте с содержанием 100 мкг/мл (раствор 1), 6 мкг/мл (раствор 2), 1 мкг/мл (раствор 3) и 0,1 мкг/мл (раствор 4).

Стандартные растворы этамона стабильны при хранении в холодильнике в течение 3-х месяцев.

2.3. Приборы, аппаратура и посуда

Хроматограф «Цвет 500М» с термоионным детектором или аналогичный.

Стеклянные колонки длиной 1 м, внутренним диаметром 3 мм.

Механический встряхиватель, ТУ 64-1-1081-73 или аналогичный.

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-76 или аналогичный с набором колб.

Делительные воронки, ГОСТ 25336-82, на 100 мл.

Колбы плоскодонные, ГОСТ 25336-82, вместимостью 500 и 250 мл.

Колбы мерные, ГОСТ 1770-74, вместимостью 100 мл.

Пипетки, ГОСТ 20292-74, на 10 и 1 мл с делениями.

Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74Е, вместимостью 100 мл.

Микрошприц на 10 мкл.

Стеклянный пористый фильтр, ГОСТ 25336-82, пор 100.

Градуированные пробирки с пробками на шлифах, ГОСТ 1770-74, вместимостью 10 мл.

2.4. Подготовка к определению

Приготовление насадки для хроматографической колонки

В круглодонную колонку вместимостью 500 мл помещают 1 г ПДЭГС, растворяют жидкую фазу в 200 мл хлороформа.

В полученный раствор при непрерывном плавном помешивании постепенно высыпают 49 г хроматона N-AW-HMDS (0,125 — 0,160 мм).

По объему раствора должно быть не меньше чем в два раза больше насыпного объема сорбента. С помощью ротационного вакуумного испарителя при слабом нагревании водяной бани удаляют растворитель. После того как носитель при вращении колбы начинает легко осыпаться со стенок колбы, его переносят в фарфоровую чашечку и выдерживают в сушильном шкафу при температуре 60 — 70 °C в течение одного часа. После охлаждения в эксикаторе носитель пересыпают в темную склянку с плотной пробкой.

Хроматографическую колонку заполняют подготовленной или готовой насадкой с подсоединением слабого вакуума. Достаточная плотность набивки обеспечивается равномерной загрузкой и непрерывным постукиванием по колонке. Колонку кондиционируют при скорости газа-носителя 35 мл/мин. в режиме программирования температуры от 50 до 190 °C со скоростью нагрева 2 °C/мин., а затем в изометрическом режиме при 200 °C в течение 6 — 8 час. без подсоединения колонки к детектору. Общую подготовку прибора проводят согласно инструкции.

2.5. Отбор проб

Отбор проб свеклы для анализа проводят в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденными Минздравом СССР 21.08.1979, № 2051-79.

2.6. Подготовка проб к анализу

Образцы свеклы моют, затем трут на крупной терке. Для анализа отбирают пробы массой 20 г. Листья мелко режут.

2.7. Проведение определения

Свекла, листья свеклы, почва. Навеску пробы (20 г) помещают в плоскодонную колбу вместимостью 500 мл, заливают 50 мл подкисленного этилового спирта и экстрагируют этамон с помощью механического встряхивания колбы в течение 20 мин. Экстракт декантируют в круглодонную колбу вместимостью 250 мл. Экстракцию повторяют еще два раза тем же количеством растворителя. Объединенный экстракт концентрируют с помощью ротационного вакуумного испарителя до объема 0,5 — 1 мл. К остатку в колбе добавляют 30 — 40 мл диазобутана и проводят бутилирование в течение 10 мин. при периодическом покачивании колбы. Содержимое колбы количественно, при помощи гексана, переносят в воронку на 100 мл и трижды промывают реакционную массу 0,1 н HCl, порциями по 15 мл. Водную фазу отбрасывают, а органическую фазу переносят в грушевидную колбу вместимостью 100 мл и концентрируют с помощью ротационного вакуумного испарителя до объема 2 — 3 мл.

Остаток количественно, с помощью гексана, переносят в градуированную пробирку вместимостью 10 мл и доводят раствор гексаном точно до 10 мл. Пробирку закрывают пробкой на шлифе и ее содержимое аккуратно перемешивают. В хроматограф вводят 2 — 5 мкл полученного раствора.

УСЛОВИЯ ХРОМАТОГРАФИРОВАНИЯ

Насадка колонки	I колонка 15% Реоплекса 400 на хроматоне N-AW-DMCS (0,250 — 0,315 мм)	II колонка 2% ПДЭГС на хроматоне N-AW-HMDS (0,125 — 0,160 мм)
Длина и внутренний диаметр	1 м x 3 мм	1 м x 3 мм
Скорость потока газа-носителя азота, мл/мин.	35	26
Скорость потока водорода, мл/мин.	20 — 22	20 — 22
Скорость потока воздуха, мл/мин.	400	400
Температура термостата колонки, град. C	160	140
Температура испарителя, град. C	180	150
Температура детектора, град. C	250 -10	250 -10
Рабочая шкала электрометра, А	3,2 x 10	3,2 x 10
Скорость протяжки ленты самописца мм/час	240 x 10	240 x 10
Объем вводимой пробы, мкл	2 — 5	2 — 5
Время удерживания бутилового эфира диметилфосфата	3 мин. 45 с	1 мин. 40 с
Линейный диапазон определения, нг	0,2 — 12	1 — 60

Количественное определение проводят методом соотношения со стандартами этамона, бутилирование которых проводят одновременно с рабочей пробой в одинаковых условиях с последующим проведением всех операций, что и с рабочей пробой.

2.8. Обработка результатов анализа

Содержание этамона в анализируемой пробе (X мг/кг) вычисляют до формуле:

                         C   x H   x V
                          ст    пр

X = ------------- мг/кг,

                         H   x V  x A
                          ст    а

где:

C — количество стандарта, введенного в хроматограф, нг; ст

H — высота пика рабочей пробы, мм; пр

H — высота пика стандарта, мм; ст

V — общий объем раствора, мл;

V — объем аликвоты, вводимой в хроматограф, мкл; а

3. Требования безопасности

При работе соблюдать требования безопасности, принятые для работы с легковоспламеняющимися жидкостями и пестицидами. Особое внимание обратить на работу с диазометаном и диэтиловым эфиром.

---