Методические указания по хроматографическому измерению содержания ксилидина на коже

(утв. Минздравом СССР 28.09.1989 № 5117-89)

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОМУ ИЗМЕРЕНИЮ

    (CH ) C H NH                                                М.м. 121,19
       3 2 6 3  2

Технический продукт ксилидин представляет собой смесь изомеров с температурой кипения 214 — 226 °C.

Ксилидин — жидкость со специфическим запахом, хорошо растворим в этаноле, эфире и некоторых других органических растворителях, плохо растворим в воде.

1. Характеристика методики

Определение основано на хроматографировании ксилидина в тонком слое сорбента, с последующим проявлением хроматограмм n-диметиламинобензальдегидом. В качестве смывающей жидкости используют этиловый спирт.

Диапазон измеряемого содержания — 0,024 мг/кв. см — 0,72 мг/кв. см.

Определению не мешают толуидин и анилин.

Граница суммарной погрешности измерения не превышает +/- 20%.

ПДУ ксилидина на коже — 0,08 мг/кв. см.

2. Реактивы, растворы и материалы

Этиловый спирт, ректификат, ГОСТ 5962-67.

n-Диметиламинобензальдегид, 1% раствор.

Бензол, х.ч.

Основной раствор ксилидина: в мерную колбу на 25 мл вносят 10 — 15 мл этилового спирта и взвешивают на аналитических весах. Добавляют 0,1 — 0,2 мл ксилидина и вновь взвешивают. По разности в весе определяют количество ксилидина. Объем доводят до метки этиловым спиртом и вычисляют содержание ксилидина в 1 мл.

Раствор устойчив в течение двух недель.

Стандартный раствор № 1, содержащий 10 мг/мл ксилидина, готовят соответствующим разбавлением основного раствора этиловым спиртом. Раствор готовят перед употреблением.

Материал для смыва — вата, которую следует проверить на чистоту. В случае загрязнения ее надо предварительно прокипятить в дистиллированной воде, затем промыть этиловым спиртом и вновь в горячей дистиллированной водой, просушить.

3. Приборы, аппаратура, посуда

Спектрофотометр.

Теплоэлектровентилятор.

Пробирки колориметрические с притертыми пробками высотой 120 мм, внутренним диаметром 15 мм.

Камера хроматографическая размером (22 х 25 х 12) см.

Колбы мерные вместимостью 25 и 50 мл, ГОСТ 1770-74.

Микропипетки, ГОСТ 20292-74, вместимостью 0,1 — 0,2 мл.

Пипетки, ГОСТ 20292-74, вместимостью 1, 2 и 10 мл.

Воронки стеклянные d = 3,0 — 3,5 см.

Линзы плоско-выпуклые (+ 10 Д).

Баня водяная.

4. Проведение измерения

Смыв с кожных покровов проводится способом обмыва.

Для этого в фарфоровую чашку наливают 30 мл этилового спирта. Ватным тампоном (0,3 г), смоченным в смывающей жидкости, обмывают участок кожного покрова (100 кв. см) сверху вниз. При этом тампон несколько раз обмакивают в жидкость. Смыв переносят в склянку. Одновременно проводят контрольный смыв с кожи у рабочих, не контактирующих с ксилидином.

Стеклянной палочкой ватный тампон тщательно промывают в смывной жидкости, переносят в воронку с фильтром, через который эту жидкость фильтруют в цилиндр. Затем вату промывают еще 10 мл этилового спирта (дробными порциями). Жидкость присоединяют к основному смыву и доводят общий объем пробы до 40 мл. На анализ берут 0,01 мл смыва (при большом содержании ксилидина — 0,005 мл).

Пробу наносят на хроматографическую пластинку, которую помещают в хроматографическую камеру, предварительно заполненную бензолом. Бензол наливают в таком количестве, чтобы нижний край пластинки был погружен в растворитель на 1 см ниже линии старта. После того как растворитель поднимется по слою сорбента на 13 см (фронт растворителя), пластинку вынимают и снова подвергают хроматографированию, повторяя эту операцию 5 раз.

    Хроматограммы  проявляют  1%  раствором  n-диметиламинобензальдегида  в
этиловом  спирте.  Ксилидин  проявляется  в виде пятен желтого цвета с R  =

                                                                    f

0,23  -  0,27.  Через  30  мин.  интенсивность окраски  пятен  измеряют  на
спектрофотометре  СФ-10  при  430  -  435  нм.  Для  этого на входе лучей в
интегрирующий  шар, справа и слева по ходу их, ставят плоско-выпуклую линзу

с оптической силой + 10 Д (концентрируя световой поток до размеров 6,5 х 15

мм).  Определяют отражения по всей площади окрашенной зоны. В качестве фона
для  сравнения  берут  хроматографические  пластинки, обработанные таким же
образом  холостой  пробой,  т.е.  смывом  с  кожи  лиц, не контактирующих с

ксилидином. Записывают отражение фона. Затем вместо правого, по ходу лучей, эталона помещают измеряемый образец и записывают его спектр отражения. Находят минимальное значение длины волны (для ксилидина 430 — 435 нм) и при

этой  длине  волны вычисляют для каждой концентрации коэффициенты отражения
(К   ) по формуле:

отр

                           отражение пробы, %

                        К    = ------------------.
                         отр   отражение фона, %

Затем для каждой величины концентрации вычисляют значение функции отражения по формуле:

                          отражение стандарта, %

                       К    = ----------------------;
                        отр     отражение фона, %;

                                         2
                               (I - K   )
                                      отр

f(K) = -----------. 2 x K отр

Количество ксилидина в пробе находят по градуировочному графику, построенному на логарифмической бумаге и отражающему зависимость от количества ксилидина (мкг).

Определение методом стандартных серий проводят путем сравнения интенсивности окраски зон проб ксилидина с окраской нанесенных на пластинку стандартных растворов.

Градуировочный график и шкалу стандартов для визуального определения строят в условиях аналитической пробы.

Для этого из стандартного раствора № 1 готовят серию стандартных растворов с содержанием ксилидина 0,06 мг/мл, 0,09 мг/мл, 0,12 мг/мл, 0,15 мг/мл, 0,18 мг/мл. На хроматографическую пластинку наносят по 0,01 мл каждого из растворов, что соответствует содержанию ксилидина 0,6 — 0,9 — 1,2 — 1,5 — 8 мкг. Шкалу стандартов обрабатывают аналогично пробам.

Содержание ксилидина (мг/кв. см) C вычисляют по формуле:

                               Q

C = -, S

где Q — количество искомого вещества во всей пробе, мг;

S — площадь исследуемой части тела, кв. см.

---