Методические указания по хроматографическому измерению содержания гептилового и амилового спиртов на коже

(утв. Минздравом СССР 28.09.1989 № 5111-89)

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОМУ ИЗМЕРЕНИЮ СОДЕРЖАНИЯ

    I. CH (CH ) CH OH                                           М.м. 88,15
         3   2 3  2

Амиловый спирт — бесцветная жидкость. Т. кип. 138 °C, Т. пл. (-78,5°). Растворимость в воде 2,7%, хорошо растворим в этаноле, эфире, ацетоне и некоторых других органических растворителях.

    II. CH (CH ) CH OH                                          И.и. 116,21
          3   2 5  2

Гептиловый спирт — бесцветная жидкость. Т. кип. 174 — 176°, Т. пл. — 34,1°.

Растворим в этаноле, эфире, ацетоне и некоторых других органических растворителях.

1. Характеристика методики

Определение основано на переведении спиртов в соответствующие нелетучие производные — 3,5-динитробензонаты, которые разделяют в тонком слое силикагеля, пропитанного родамином 6ж. Количественное определение проводят после извлечения бензоатов по реакции Яновского.

В качестве смывающей жидкости используется ацетон.

Диапазон измеряемого содержания 0,12 — 1,2 мг/кв. см.

Определению не мешает метиловый спирт.

Граница суммарной погрешности измерения +/- 25%.

ПДУ гептилового и амилового спирта на коже 0,2 мг/кв. см.

2. Реактивы и растворы

Спирты: амиловый и гептиловый, х.ч., перегнанные при температуре кипения.

Бензол, ГОСТ 5955-75, осушенный над хлористым кальцием.

3,5-динитробензоилхлорид, раствор с содержанием 50 мг в 30 мл бензола.

Пиридин, ГОСТ 13647-78, 10-процентный раствор в бензоле.

Ацетон, ГОСТ 2603-71.

Натрия гидроксид, ГОСТ 4328-77, 40-процентный раствор.

Родамин 6ж, 0,05-процентный раствор в этаноле.

Диэтиловый эфир для наркоза.

Пластинки хроматографические «Silufol».

Основной стандартный раствор готовят для каждого спирта отдельно. Для чего в мерную колбу на 25 мл вносят 10 — 15 мл бензола и взвешивают. Добавляют 0,1 — 0,2 мл спирта и вновь взвешивают. По разности в весе определяют количество спирта. Объем доводят до метки бензолом и вычисляют содержание спирта в 1 мл. Раствор устойчив в течение месяца.

Стандартный раствор № 1, содержащий 2 мг/мл, готовят соответствующим разбавлением основного раствора.

3. Приборы и посуда

Теплоэлектровентилятор.

Пробирки с притертыми пробками высотой 120 мм, внутренним диаметром 15 мм.

Камера хроматографическая размером 22 x 25 x 12 см.

Кювета эмалированная размером 22 x 27 см.

Колбы мерные вместимостью 25 x 50 мл.

Микропипетки, ГОСТ 20292-74, вместимостью 0,1 — 0,2 мл.

Пипетки, ГОСТ 20222-74, вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл.

Баня водяная.

Термометр на 100 °C.

Пинцет медицинский.

Скальпель.

Воронки стеклянные d = 3,0 — 3,5 см.

4. Проведение измерения

Смыв с кожных покровов проводится способом обмыва. Для этого в фарфоровую чашку наливают 30 мл ацетона. Ватным тампоном (0,3 г), смоченным в смывающей жидкости, обмывают участок кожного покрова (100 кв. см) сверху вниз. При этом тампон несколько раз обмакивают в жидкость. Смыв переносят в склянку. Одновременно проводят контрольный смыв у рабочих, не контактирующих с амиловым и гептиловым спиртами.

Вату извлекают из смыва пинцетом, помещают в воронку, тщательно отжимают и вновь промывают 5 мл ацетона. Жидкость присоединяют к основному смыву, фильтруют и измеряют объем. Для анализа берут 1 мл пробы, добавляют 2 мл бензола, 0,4 мл раствора 3,5-динитробензоилхлорида и 2 капли раствора пиридина.

Одновременно с пробами готовят бензоаты спиртов для построения стандартной шкалы («свидетели»).

С этой целью берут по 0,5 мл стандартного раствора каждого спирта с содержанием — 2 мг/мл, переносят в колориметрическую пробирку, добавляют 0,4 мл раствора 3,5-динитробензоилхлорида, 2 капли раствора пиридина, 1 мл ацетона и объем доводят до 3 мл бензолом.

И стандарт, и пробу помещают на водяную баню, постепенно доводят температуру до 90 — 95 °C и пробу выпаривают до сухого остатка.

Сухой остаток пробы растворяют в 30 мл бензола; 0,05 — 0,1 мл этого раствора используют для последующего хроматографического определения.

Стандарт растворяют в 1 мл бензола, при этом получают раствор 3,5-динитробензоатов спиртов, соответствующих содержанию 1 мг каждого спирта в 1 мл.

Хроматографическое разделение:

Пластинку «Silufol» размером 15 x 15 см пропитывают родамином 6ж. С этой целью в эмалированную кювету наливают 0,05-процентный этанольный раствор родамина и наносят его на пластинку путем быстрого погружения ее в раствор.

Пластинку сушат в вытяжном шкафу при комнатной температуре в течение 4 — 5 мин. и затем 30 мин. в сушильном шкафу при температуре 100 — 110 °C. На обработанной таким образом пластинке проводят линию старта в 1,5 см от края, на которой намечают 6 точек на расстоянии 2 см друг от друга. В камеру можно помещать сразу две пластинки, т.е. одновременно определять несколько проб. При этом микропипеткой в часть точек каждой пластинки наносят пробы, в остальные — растворы «свидетелей», соответствующие 20 — 40 — 80 — 100 — 140 — 180 — 200 мкг каждого спирта.

После нанесения проб и «свидетелей» пластинку помещают в хроматографическую камеру, на дно которой предварительно (за 1,5 — 2 ч до начала анализа) наливают бензол (подвижная фаза).

Пластинку извлекают из камеры, когда подвижный растворитель поднимется на 13,5 — 14 см, сушат в вытяжном шкафу при комнатной температуре и вторично помещают в камеру.

Когда растворитель пройдет то же расстояние, что и при первом разделении, пластинку извлекают и сушат в тех же условиях. Пятна бензоатов спиртов при этом проявляются в виде малиновых пятен на слабо розовом фоне.

При слабой окраске пятен наблюдение за разделением можно вести в фильтрованном ультрафиолетовом свете (320 — 380 нм). При этом видны коричневые пятна бензоатов на желтом фоне.

    Путем  сравнения  на  хроматограмме  пятен  проб  с пятнами стандартных
растворов  "свидетелей"  делают вывод о наличии в пробе спирта. Производные
одного  и  того  же  спирта располагаются на одинаковом расстоянии от линии
старта.  Ближе  к старту находится амиловый спирт R  амилового спирта 0,65;

                                               f

гептилового 0,83.

Для количественного определения спиртов в пробах бензоаты пятен проб и «свидетелей» элюируют эфиром.

С этой целью скальпелем осторожно переносят силикагель пятна в пробирку с притертой пробкой, заливают 2 мл эфира, при взбалтывании в течение 3 — 4 мин. извлекают бензоаты. Частицам силикагеля дают осесть на дно пробирки, а раствор переносят в сухую пробирку.

Силикагель промывают 1 мл эфира и присоединяют к первой порции элюата. Ацетоном доводят содержимое до 5 мл.

После извлечения бензоатов проб и «свидетелей» во все пробирки добавляют по 1 мл раствора едкого натра, осторожно перемешивают и устанавливают количество спирта путем сравнения интенсивности фиолетовой окраски проб с окраской «свидетелей» стандартной шкалы.

Содержание спирта C (мг/кв. см) вычисляют по формуле:

                                 Q

C = -, S

где Q — количество искомого вещества во всей пробе, мг;

S — площадь исследуемой части тела, кв. см.

---